徐金鳳 張洪娟

（黑龍江澳利達奈德制藥有限公司·152400）

芪蜂降糖膠囊是在多年臨床基礎上開發(fā)而成的現(xiàn)代中藥制劑，處方由黃芪、蜂膠、山茱萸、山藥等十余味中藥組成，其中蜂膠為主要藥味，白楊素和高良姜素等黃酮類成分是蜂膠的主要活性成分[1]，也是蜂膠質(zhì)量控制的主要指標之一[2][3]。收載于《中華人民共和國藥典》蜂膠含量測定項下均以白楊素和高良姜素含量為指標，因此以該成分作為含量測定指標比較合理[4]，其研究內(nèi)容報告如下：

1 白楊素、高良姜素含量測定方法

1.1 儀器與藥品

島津LC-2010CHT高效液相色譜儀；KQ-300DB型超聲儀；十萬分之一電子天平；恒溫水浴。甲醇為色譜純，其他試劑為分析純，水為超純水；白楊素、高良姜素對照品（含量測定用）購自中國藥品生物制品檢定所；藥品：由黑龍江省中醫(yī)醫(yī)院制劑室提供。

1.2 色譜條件

DiamonsilC18（4.6mm×250mm5μm）色譜柱及同性能色譜柱；以甲醇—0.15%磷酸溶液（64：36）為流動相；流速0.8ml/min；檢測波長268nm；柱溫：25OC；理論板數(shù)按白楊素峰計算應不低于6000。

1.3 測定方法

對照品溶液的制備 取白楊素對照品、高良姜素對照品適量，精密稱定，加甲醇分別制成每1ml含白楊素30μg、高良姜素20μg的溶液，即得。

供試品溶液的制備 取本品內(nèi)容物約0.3g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，稱定重量，加熱回流1小時，放冷，再稱定重量并用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

測定法 分別精密吸取上述兩種對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。

2 白楊素、高良姜素含量測定方法學研究

方法學研究參照2010年版《中華人民共和國藥典》一部附錄ⅩⅧA中藥品質(zhì)量標準分析方法驗證指導原則要求和文獻資料設計，主要進行了方法的穩(wěn)定性、準確度、精密度、專屬性、線性、范圍等研究內(nèi)容。

2.1 供試品溶液的穩(wěn)定性試驗

取內(nèi)容物混勻，約0.3g，精密稱定，按指標性成分含量測定方下制備供試品溶液，每2h進樣10μl，測定峰面積，經(jīng)計算白楊素RSD=1.06%、高良姜素RSD=1.45%，表明被測溶液中白楊素、高良姜素兩種成分在室溫下12小時內(nèi)測定結(jié)果穩(wěn)定。

2.2 準確度試驗

取已知含量的同批樣品6份，精密稱定，分別精密加入白楊素、高良姜素對照品適量，按供試品制備方法處理，測定白楊素、高良姜素含量，計算回收率，結(jié)果見表1、2。

表1 白楊素加樣回收率結(jié)果

表2 高良姜素加樣回收率結(jié)果

由表可見，白楊素加樣回收率為102.91%，RSD=1.83%，高良姜素加樣回收率為103.39%，RSD=1.38%，表明該方法測定結(jié)果準確。

2.3 精密度試驗

2.3.1 重復性 精密吸取同批次供試品溶液10μl，按上述色譜條件測定，連續(xù)進樣6次，測定峰面積，經(jīng)計算白楊素RSD=0.96%，高良姜RSD=1.95%，表明精密度良好。

2.3.2 中間精密度 精密吸取同批次供試品溶液10μl，按上述色譜條件測定，用同一實驗室Agelient1100型高效液相色譜儀（DAD檢測器）連續(xù)進樣6次，測定峰面積，經(jīng)計算白楊素RSD=1.45%，高良姜素RSD=1.78%，表明精密度良好。

2.4 專屬性試驗

產(chǎn)品配方中去掉蜂膠按照產(chǎn)品的制備工藝制成不含蜂膠模擬樣品，以下操作同供試品溶液制備方法得蜂膠空白對照液。按照指示性成分含量測定方法，分別吸取蜂膠空白對照液、供試品溶液及白楊素、高良姜素對照品溶液各進樣10μl，測定結(jié)果表明，空白對照液色譜圖在白楊素、高良姜素出峰位置上未見有吸收峰，說明空白無干擾。

2.5 線性

精密稱取置五氧化二磷減壓干燥器中干燥12小時以上的白楊素對照品8.35mg，高良姜素對照品5.90mg，置100ml容量瓶中，加入適量的甲醇使其溶解，加甲醇稀釋至刻度，作為白楊素對照品高良姜素對照品儲備液。分別精密吸取上述對照品溶液1、2、4、6、8ml于10ml容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，再吸取上述各對照品溶液10μl分別注入高效液相色譜儀，以峰面積為縱坐標，進樣量為橫坐標繪制標準曲線。白楊素 線性回歸方程： Y=107325X+20629，r=0.9999高良姜素 線性回歸方程：Y=57364X-870，r=0.9996

2.6 范圍

通過精密度、準確度以及線性關(guān)系測定，結(jié)果表明：線性回歸白楊素r=0.9999，高良姜素r=0.9996，白楊素在0.0835－0.6680μg之間，高良姜素在0.1180－0.5900μg之間均呈良好的線性關(guān)系，故確定兩種成分含量按此測定方法白楊素在0.0835－0.6680μg之間，高良姜素在0.1180－0.5900μg之間范圍內(nèi)測定數(shù)據(jù)可靠。

2.7 成分指標值的確定：

三批中試產(chǎn)品指標性成分白楊素、高良姜素含量測定結(jié)果見表3。

表3 三批中試樣品含量測定結(jié)果

指標性成分限量值的確定：白楊素和高良姜素指標值的確定是在三批中試樣品實測數(shù)據(jù)的基礎上適當下浮而得出的。根據(jù)測定數(shù)據(jù)規(guī)定本品每100g含白楊素不得少于0.53g,高良姜素不得少于0.50g。

3 討論

人類對蜂膠的認識和應用有著十分悠久的歷史，蜂膠的應用研究在我國開始于20世紀七十年代。蜂膠作為既食又藥物品，至今已經(jīng)有百余種各種劑型的產(chǎn)品上市，功效涵蓋增強免疫力、輔助降血糖、輔助降血脂、抗疲勞、對胃粘膜輔助保護作用、抗突變、抗氧化等多種功能。收載于《中華人民共和國藥典》2010年版一部，并明確指出蜂膠不能直接服用，需要經(jīng)過炮制制成酒制蜂膠才可以服用，本產(chǎn)品以酒炙蜂膠入藥。

本產(chǎn)品在質(zhì)量標準研究中考慮，考慮由于目前國內(nèi)外蜂膠市場混亂，重點進行了處方中蜂膠質(zhì)量標準提高試驗研究，采用高效液相色譜法建立了產(chǎn)品中指標性成分白楊素、高良姜素含量測定方法，方法簡便可行，即可有效控制產(chǎn)品質(zhì)量，又可以避免原料蜂膠的摻假和劣質(zhì)蜂膠使用，因此對提高和控制產(chǎn)品質(zhì)量具有一定的意義。

[1] 曹煒，符軍放，索志榮,等.蜂膠中白楊素和高良姜素的HPLC分析[J].藥物分析雜志，2007，27（4）：522-524.

[2] 王歡，胡紅剛，黃小鍵.HPLC法測定蜂膠片中兩種有效成分的含量[J].江西中醫(yī)藥，2008，139（12）：79.

[3] 宋愛清，劉杰.HPLC法測定蜂膠中黃酮類化合物的含量[J].中國養(yǎng)蜂，2001，52（3）：10-11.

[4] 國家藥典委員會編，中國醫(yī)藥科技出版社出版，《中華人民共和國藥典》2010年版一部