惲志華（江蘇省常州市武進(jìn)人民醫(yī)院檢驗科 213162）

國際標(biāo)準(zhǔn)化組織（ISO）文件ISO17511和ISO18153對臨床檢驗工作中的量值溯源進(jìn)行了說明，認(rèn)為量值溯源的關(guān)鍵是采用參考系統(tǒng)，即通過采用參考測量程序或參考物質(zhì)的方法，對臨床檢驗結(jié)果的準(zhǔn)確性進(jìn)行驗證。參考系統(tǒng)除包括參考測量程序和參考物質(zhì)外，還包括從事參考測量的實驗室［1］。在開展臨床檢驗工作的醫(yī)學(xué)實驗室中，約15%的實驗室存在因標(biāo)準(zhǔn)品誤差而導(dǎo)致檢測準(zhǔn)確度不合格的現(xiàn)象［2］。在這種情況下，本組利用貝克曼原裝配套酶復(fù)合校準(zhǔn)品定標(biāo)6種酶類［丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、肌酸激酶（CK）、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、乳酸脫氫酶（LD）、堿性磷酸酶（ALP）、γ－谷氨酰轉(zhuǎn)移酶（γ－GT）］，所得實際K 因子和理論參數(shù)K 因子值對同一定值質(zhì)控血清中6種酶測定結(jié)果進(jìn)行比較，為定值質(zhì)控血清和酶校準(zhǔn)品在室內(nèi)質(zhì)控中的應(yīng)用及溯源性的影響因素研究提供試驗數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑日本Olympus AU－5421全自動生化分析儀；由貝克曼公司提供原裝試劑ALT（OSR6107）、AST（OSR6109）、ALP（OSR6104）、GGT（OSR6120）、CK（OSR6179）LD（OSR6128）。定值質(zhì)控血清由伯樂（Bio－Rad）公司提供（Liquid Assayed Multiqual）血清，批號分別為45663（下稱質(zhì)控高值）和45662（下稱質(zhì)控中值），血清酶校準(zhǔn)品為貝克曼公司提供的原裝酶復(fù)合校準(zhǔn)品（Beckman Coulter System Calibrator L66300－0115－ML01），批號為66300。

1.2 方法

1.2.1 理論K 因子法測定按儀器、試劑的操作要求輸入理論K 因子值，進(jìn)行定值質(zhì)控血清高值和中值的測定，重復(fù)3次取平均值。理論K 因子的換算方法：

1.2.2 酶校準(zhǔn)品實際校準(zhǔn)后測定用酶校準(zhǔn)品進(jìn)行校準(zhǔn)后根據(jù)實際K 因子檢測定值質(zhì)控血清高值和中值，重復(fù)3次取平均值。

2 結(jié)果

2.1 用貝克曼原裝酶復(fù)合校準(zhǔn)品進(jìn)行校準(zhǔn)得到實際K 因子，同時通過計算得到理論K 因子。見表1。

表1 各指標(biāo)實際校準(zhǔn)K 因子與理論計算K 因子

2.2 分別檢測6種酶中值和高值結(jié)果，并與伯樂公司提供的結(jié)果進(jìn)行比較，見表2。

表2 各指標(biāo)中值和高值標(biāo)本檢測結(jié)果

2.3 從表1、2中可以看出利用貝克曼原裝復(fù)合校準(zhǔn)品進(jìn)行校準(zhǔn)測得的ALT、AST、ALP、CK、LDH 實際校準(zhǔn)K 因子與理論計算K 因子之間的相對偏倚達(dá)20.0%～30.0%，只有GGT 之間相對偏倚為3.0%。以實際校準(zhǔn)校準(zhǔn)所得K 因子檢測美國伯樂公司提供的中值和高值定值質(zhì)控品，得知ALT、AST、ALP、GGT、CK、LDH 檢測值均接近于伯樂公司提供的標(biāo)示預(yù)期結(jié)果，而使用理論K 因子的檢測結(jié)果明顯與伯樂公司提供結(jié)果相差巨大，其相對偏倚達(dá)20.0%～30.0%，其中ALT、AST、CK、LD 相差尤為明顯。

3 討論

目前，外周血中酶成分的測定通常是通過測量其催化反應(yīng)的速度而進(jìn)行定量檢測，以酶催化濃度表示。與利用免疫反應(yīng)原理，將酶視為蛋白質(zhì)進(jìn)行檢測相比，酶促反應(yīng)檢測的優(yōu)點在于快速、敏感度高、特異性強(qiáng)等。然而，酶催化濃度是一種相對結(jié)果，結(jié)果的準(zhǔn)確性依賴于檢測原理、單位的定義和檢測條件，具體而言，其影響因素包括（1）酶促反應(yīng)的底物、輔因子、變構(gòu)劑、活化劑的種類和濃度；（2）在采用偶聯(lián)酶促反應(yīng)檢測原理時，涉及的輔助酶和指示酶的種類和濃度；（3）反應(yīng)體系的pH、離子強(qiáng)度和緩沖劑種類；（4）其他因素，如抑制劑、雜酶等。上述因素中的任何一項發(fā)生變化，均有可能導(dǎo)致測定結(jié)果的改變。由于影響酶促反應(yīng)的因素較多，導(dǎo)致臨床檢驗工作中，酶成分檢測的質(zhì)量控制效果較其他生化項目相對較差［3］。

為了提高酶成分檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和精密度，確保檢測結(jié)果在不同方法學(xué)之間和不同實驗室之間具有可比性，消除酶成分參考范圍不一致的問題，提高酶成分檢測的標(biāo)準(zhǔn)化程度勢在必行。目前，國內(nèi)外主要采用兩種方法實現(xiàn)酶成分檢測的標(biāo)準(zhǔn)化，即使用推薦方法或者使用經(jīng)參考方法定值的酶參考物以校正常規(guī)檢測方法［4］。

國際臨床化學(xué)聯(lián)合會（IFCC）最早于1979年頒布了血清（血漿）酶催化濃度檢測方法總則，并于1985年制定了AST 和ALT 檢測的推薦方法［5－7］。隨后，某些國家或地區(qū)相繼頒布了GGT、ALP、CK、LDH 檢測的推薦方法，但與IFCC 的推薦方法相比，均存在一定程度的差異。通過使用推薦方法，酶測定的規(guī)范化、一致化程度有所提高，不同實驗室間的檢測結(jié)果也具有了可比性，檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和精密度也有了明顯提高。然而，即使如此，針對同一種酶成分，目前尚無法實現(xiàn)推廣采用推薦的單一方法的目標(biāo)。

本次研究擬通過具有溯源的定值質(zhì)控血清及血清酶校準(zhǔn)品在實際工作中的應(yīng)用，探討酶校準(zhǔn)物實際檢測K 因子與理論計算K 因子的差異。比較使用血清酶校準(zhǔn)品定標(biāo)后測定定值血清6種酶（ALT、AST、ALP、GGT、CK、LDH）結(jié)果有無明顯差異，分析發(fā)現(xiàn)只有GGT 的偏離程度小于3.5%，其種5種酶（ALT、AST、CK、ALP、LD）的相對偏倚均達(dá)20.0%～30.0%，其結(jié)果有明顯差異。使用校準(zhǔn)品所得K 因子檢測6種血清酶均值與伯樂定值質(zhì)控血清標(biāo)示值間的相對偏倚均小于3.5%，表明這6種酶與國際公認(rèn)質(zhì)控品有較好的相關(guān)性，另外通過近幾年參加省級室間質(zhì)量控制考評均取得了優(yōu)異的成績。

目前，大多數(shù)臨床實驗室在測定血清酶活性時不用校準(zhǔn)品，而是根據(jù)儀器系統(tǒng)特性，用理論給定的K 因子值計算酶的活性。而有的酶（如腺苷脫氨酶、肌酸激酶同工酶等）沒有酶校準(zhǔn)品，有的酶甚至連質(zhì)控品都沒有。這樣可能與真實值有4.5%～67.6%的誤差。雖然IFCC 推出了血清酶活性的方法，可因每天儀器比色杯吸光度的變化、酶試劑穩(wěn)定性的原因及其吸光度發(fā)生變化，測定結(jié)果的相對偏倚、離散程度也較大，需要進(jìn)行校正后消除干擾因素，測定結(jié)果才能接近真實值。為此，ISO 于1999年起草了5個相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，ISO／DIS 18153“酶催化濃度校準(zhǔn)物質(zhì)和質(zhì)控物質(zhì)定值的計量學(xué)溯源性”為其中標(biāo)準(zhǔn)之一。因此，首先建議用酶校準(zhǔn)品進(jìn)行定標(biāo)，以消除測量值與真實值之間的偏差。但由于酶為生物催化劑，穩(wěn)定性差，而其標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的研制工作極為困難，進(jìn)展緩慢［8－9］。近幾年IFCC組織多家國際實驗室合作。對過去的IFCC 酶催化濃度測量過程進(jìn)行了修改和優(yōu)化，包括ALT、AST、AMY、CK 等，并對原參考物質(zhì)重新定值。因而具有溯源性的酶校準(zhǔn)品價格也較昂貴，經(jīng)常使用會大大增加檢驗成本。盡管國際著名生產(chǎn)質(zhì)控品的伯樂公司曾直截了當(dāng)?shù)匦迹骸安畼饭舅械目刂破范ㄖ稻痪哂杏嬃可系目勺匪菪?，這完全符合ISO17511的要求”［10］。但作為國內(nèi)廣大的實驗室還大多數(shù)以此為標(biāo)準(zhǔn)，否則更加缺乏可比性。本組選擇了國內(nèi)較常用的全自動生化分析儀、原裝配套試劑、定值質(zhì)控血清和原裝復(fù)合酶校準(zhǔn)品，同時發(fā)現(xiàn)伯樂定值質(zhì)控血清有許多優(yōu)點：它是用與校準(zhǔn)物相同的介質(zhì)制備的，具有較好的穩(wěn)定性和重復(fù)性，其作用主要是控制儀器的穩(wěn)定性，以保證儀器、試劑、工作環(huán)境具有高度的穩(wěn)定性；在缺乏酶校準(zhǔn)品的情況下可以替代酶校準(zhǔn)品。而校準(zhǔn)物是根據(jù)權(quán)威或官方所制定的參考物為標(biāo)準(zhǔn)、具有較好準(zhǔn)確性的標(biāo)示物，用以校正儀器或方法準(zhǔn)確性，使測定結(jié)果盡可能接近真實值，通過參加室間質(zhì)量評價也獲得了滿意的結(jié)果。同時，相關(guān)部門應(yīng)該明文禁止使用理論K 因子的方法進(jìn)行血清酶檢測，只有這樣才能為臨床提供可靠的結(jié)果。

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