楊燕，韓紅星，李小勇，劉厚明，單萬水（廣東醫(yī)學(xué)院附屬深圳市第三人民醫(yī)院檢驗科，深圳 518020）

戊型肝炎是一種經(jīng)糞－口傳播的急性傳染病，潛伏期為2～11周，平均6周，臨床患者多為輕、中型肝炎，常為自限性，兒童感染表現(xiàn)亞臨床型較多，成人病死率高于甲型肝炎，尤其孕婦患戊型肝炎病情嚴重，在妊娠的后3個月發(fā)生感染的病死率達20%。目前對戊型肝炎臨床檢測多采用檢測患者體內(nèi)戊型肝炎病毒IgM 抗體，MP公司針對戊型肝炎病毒第2開放閱讀框編碼的高度保守構(gòu)象表位序列重組抗原，研制出膠體金法和酶聯(lián)免疫試驗（ELISA）兩種試劑盒，為驗證其各項性能參數(shù)，特在本院進行臨床試驗驗證，選擇批準上市的同品類試劑盒，萬泰公司生產(chǎn)的ELISA 試劑作為對比試劑，如MP 公司試劑與萬泰試劑檢測結(jié)果不一致，用SFDA 注冊的第三方試劑（上?？迫A生物工程股份有限公司生產(chǎn)，戊型肝炎病毒IgM 抗體，ELISA）進行復(fù)核。現(xiàn)將臨床試驗結(jié)果和評價報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料選擇2009年12月至2010年7月本院住院或門診收治的戊型肝炎患者及其他患者和健康體檢者250例，年齡2～68歲，平均38歲。

1.2 儀器與試劑愛康全自動酶聯(lián)免疫儀Ureanase－150。對比試劑：戊型肝炎病毒IgM 抗體ELISA 診斷試劑由萬泰公司提供，第三方試劑戊型肝炎病毒IgM 抗體由科華公司提供，被考核試劑是MP公司生產(chǎn)的戊型肝炎病毒IgM 抗體快速檢測試劑（膠體金法）和戊型肝炎病毒IgM 抗體檢測試劑（ELISA）。所有試劑均按照要求保存，在有效期內(nèi)按要求使用。

1.3 方法所有研究對象（包括臨床診斷戊型肝炎，乙型肝炎，丙型肝炎，其他疾病以及健康者）空腹采血4mL，3000r／min 離心10min 分離血清，分別用萬泰ELISA、MP公司膠體金法、ELISA 進行戊型肝炎病毒IgM 抗體檢測，結(jié)果不一致的標本再用第三方試劑科華ELISA 進行復(fù)核，均嚴格按照試劑盒內(nèi)說明書嚴格操作和判讀結(jié)果。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行分析，計算MP公司膠體金法和酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測戊型肝炎病毒IgM 抗體結(jié)果與萬泰酶聯(lián)免疫試劑檢測結(jié)果的陰性符合率、陽性符合率、總符合率。采用計數(shù)資料的配對設(shè)計四格表進行χ2檢驗，并計算一致性系數(shù)即Kappa（K）值。K＞0.8，則表明兩種檢測方法有等效性；若K＜0.8，則表明兩種檢測方法測定數(shù)據(jù)沒有等效性。

2 結(jié)果

2.1 以MP 公司研制生產(chǎn)的戊型肝炎病毒IgM 抗體診斷試劑盒膠體金法作為被驗證試劑，以萬泰公司生產(chǎn)的戊型肝炎病毒IgM 抗體診斷試劑盒ELISA 作為對比試劑，對250例血清標本進行平行試驗，見表1。

表1 MP公司膠體金法和萬泰公司ELISA 檢測戊型肝炎－IgM 結(jié)果（n）

根據(jù)表1可計算出，陰性符合率為96.92%，陽性符合率為94.55%，總符合率為96.40%，兩種試劑盒的檢測結(jié)果差異無統(tǒng)計學(xué)意義（χ2＝0.44，P＞0.05）；一致性系數(shù)K值為0.8978，可認為兩種方法檢測結(jié)果具有高度一致性。對9例MP公司膠體金法和萬泰公司ELISA 檢測結(jié)果不一致標本采用科華公司生產(chǎn)的同類試劑進行復(fù)檢，3例萬泰陽性而MP陰性標本用科華試劑檢測均為陽性，表明MP公司膠體金法靈敏度尚待提高，6例萬泰陰性而MP 陽性標本用科華試劑檢測，其中有3例陽性和3例陰性，表明MP公司膠體金法特異度介于萬泰和科華公司之間，特異度良好。

2.2 以MP 公司研制生產(chǎn)的戊型肝炎病毒IgM 抗體診斷試劑盒ELISA 作為被驗證試劑，以萬泰公司生產(chǎn)的戊型肝炎病毒IgM 抗體診斷試劑盒ELISA 作為對比試劑，對250例血清標本進行平行測試，見表2。

表2 MP公司ELISA 法和萬泰公司ELISA 法檢測戊型肝炎－IgM 結(jié)果（n）

根據(jù)表2可計算出，陰性符合率為94.87%，陽性符合率為92.73%，總符合率為94.40%，表明兩種試劑盒的檢測結(jié)果差異無統(tǒng)計學(xué)意義（χ2＝1.79，P＞0.05）；一致性系數(shù)K值為0.8430，可認為兩種方法檢測結(jié)果具有高度一致性。對14例MP公司和萬泰公司ELISA 檢測結(jié)果不一致標本采用科華公司生產(chǎn)的同類試劑進行復(fù)檢，4例萬泰陽性而MP陰性標本用科華試劑檢測均為陽性，表明MP 公司ELISA 靈敏度尚待提高，10例萬泰陰性而MP陽性標本用科華試劑檢測，其中有7例陽性和3例陰性，表明MP公司膠體金法特異度介于萬泰和科華公司之間，特異度良好。

3 討論

文獻［1］報道我國戊型肝炎病毒流行率為17.2%，各省市分布不均，均有散發(fā)性戊型肝炎病例發(fā)生，約占急性散發(fā)性病毒性肝炎的8.6%。戊型肝炎臨床表現(xiàn)與甲型肝炎類似，但重型肝炎發(fā)病率高，病死率為1%～3%，較甲型肝炎高（約0.5%），尤其孕婦感染病情較重，病死率可高達20%。戊型肝炎病毒DNA 檢測是臨床戊型肝炎診斷的金標準，但尚難以在臨床上普遍應(yīng)用，常規(guī)試驗診斷仍主要依靠血清學(xué)檢測。戊型肝炎病毒IgM 抗體僅在急性期存在，因此最適合于臨床急性戊型肝炎的診斷。由于戊型肝炎病毒的體外培養(yǎng)尚未成功，目前商業(yè)化的戊型肝炎病毒抗體檢測試劑所用抗原多為重組蛋白或合成肽［2－5］。這些重組蛋白或合成肽來源于不同基因型或不同地區(qū)的戊型肝炎病毒株，其結(jié)構(gòu)區(qū)一般是ORF2和ORF3區(qū)域。有研究表明，ORF2大片段抗原在檢測IgM 和IgG 中要優(yōu)于ORF2小片段和ORF3多肽抗原，而且很多實驗室對所用抗原的表達和純化方法也不盡相同，并且檢測系統(tǒng)本身也存在差異［6］。上述諸多不同均會影響檢測試劑的靈敏度和特異度。

目前研究表明，人體感染戊型肝炎病毒后，機體引發(fā)多階段的反應(yīng)。在急性感染期的早期，伴隨著臨床癥狀的發(fā)生，機體開始產(chǎn)生抗戊型肝炎病毒IgM 抗體，一般可持續(xù)2～3個月［7－8］。IgG 抗體的出現(xiàn)要晚于IgM，在急性期內(nèi)持續(xù)上升，直至恢復(fù)期，并可持續(xù)維持高水平1～4.5年，甚至更長時間［2，9］。因此，對IgM 和IgG 抗體的檢測成為臨床診斷戊型肝炎和研究戊型肝炎流行情況的重要手段，而ELISA 和膠體金法成為戊型肝炎病毒抗體檢測最常用的方法。

本研究結(jié)果顯示，MP 公司膠體金法和ELISA 檢測戊型肝炎病毒IgM 抗體均具有較高的敏感性和特異度，與對比試劑萬泰公司ELISA 檢測結(jié)果比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），且一致性系數(shù)都大于0.80，表明MP 公司膠體金法和ELISA 檢測戊型肝炎病毒IgM 抗體與萬泰公司ELISA 檢測結(jié)果具有等效性。本次驗證的MP公司膠體金法和ELISA 檢測戊型肝炎病毒IgM 抗體試劑的靈敏度較萬泰公司和科華公司ELISA 略低，表明尚需要提高試劑的靈敏度，特異度介于萬泰公司和科華公司ELISA 之間，表明MP 公司試劑的特異度良好。

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