牛冬梅， 洪 駿， 吳 嘉， 宋佳希， 于瑞杰， 袁云龍， 汪俊軍

(南京軍區(qū)南京總醫(yī)院全軍臨床檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)研究所，江蘇南京210002)

視黃醇結(jié)合蛋白4(retinol binding protein 4，RBP4)屬于脂質(zhì)運(yùn)載蛋白超家族，主要由肝臟合成，可被腎小球?yàn)V過(guò)并在腎小管被重吸收和分解［1］。早期研究發(fā)現(xiàn)RBP4可靈敏地反映腎功能的早期損傷。一般認(rèn)為當(dāng)腎小球?yàn)V過(guò)功能下降時(shí)，血清RBP4水平可明顯升高;當(dāng)腎小管功能受損時(shí)，尿液RBP的排泄則會(huì)顯著增加。近年研究［2］表明，血清 RBP4與小而密低密度脂蛋白(small and dense of low density lipoprotein，sdLDL)明顯獨(dú)立相關(guān)，而sdLDL易于氧化，與血清高氧化低密度脂蛋白(oxidized-low density lipoprotein，ox-LDL)水平密切相關(guān)，血漿高sdLDL和ox-LDL水平是動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)發(fā)生的強(qiáng)危險(xiǎn)因素。推測(cè)RBP4可能與ox-LDL相關(guān)聯(lián)，參與了AS相關(guān)的脂質(zhì)代謝過(guò)程，并已在冠心病和高脂血癥患者中進(jìn)行了證實(shí)［3-4］。

腎病綜合征(nephrotic syndrome，NS)患兒常伴有明顯的脂代謝異常，體內(nèi)氧化、抗氧化活性失衡，脂蛋白被高度氧化。我們先前的研究已證實(shí)在NS患兒中ox-LDL水平明顯升高，并與疾病的嚴(yán)重程度密切相關(guān)［5］。目前，國(guó)內(nèi)、外關(guān)于NS患兒血清RBP4水平與脂質(zhì)代謝的關(guān)系的研究較少，RBP4與ox-LDL之間的關(guān)系尚不明確。據(jù)此，我們擬探討NS患兒血清RBP4與ox-LDL的相關(guān)性，為進(jìn)一步闡述NS相關(guān)的血脂異常代謝機(jī)制提供依據(jù)。

材料和方法

一、研究對(duì)象

2012年1月至12月在南京軍區(qū)南京總醫(yī)院小兒科住院確診的原發(fā)性NS患兒118例，男84例，女34例，年齡1～14歲;以健康體檢兒童45名作為正常對(duì)照組，男32名，女13名，年齡1～14歲。2組之間性別、年齡差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

二、方法

所有對(duì)象均禁食12 h以上，采集空腹血液樣本，自然凝固，1 h內(nèi)離心留取血清，－70℃保存。人血清RBP4水平采用免疫比濁法測(cè)定，試劑盒及配套校準(zhǔn)品購(gòu)自上海北加公司。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)血清ox-LDL水平［6］，以兔抗人ox-LDL抗體為包被抗體、酶標(biāo)記羊抗人載脂蛋白B100(apo B100)抗體為檢測(cè)抗體。血清總膽固醇(total cholesterol，TC)、甘油三酯(triglyeride，TG)、尿素(urea)、肌酐(crea，Cr)和白蛋白(albumin，Alb)試劑及配套校準(zhǔn)品購(gòu)自Randox公司。低密度脂蛋白膽固醇(low density lipoproteincholesterol，LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(high density lipoprotein-cholesterol，HDL-C)試劑及脂蛋白校準(zhǔn)品購(gòu)自日本第一化學(xué)株式會(huì)社。儀器均為HITACHI 7600全自動(dòng)生化分析儀(日本日立公司);非高密度脂蛋白膽固醇(non high density lipoprotein-cholesterol，non HDL-C)采用以下公式計(jì)算:non HDL-C=TC－HDL-C。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。正態(tài)分布數(shù)據(jù)以±s表示，偏態(tài)分布數(shù)據(jù)以中位數(shù)(P25～P75)表示。2組間比較用成組設(shè)計(jì)的t檢驗(yàn)，偏態(tài)分布數(shù)據(jù)經(jīng)log轉(zhuǎn)換使其符合正態(tài)分布后再進(jìn)行比較;變量間相關(guān)性用Sperman相關(guān)檢驗(yàn);多因素分析采用多元線(xiàn)性回歸處理。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

一、NS組和正常對(duì)照組各項(xiàng)目測(cè)定結(jié)果比較

NS 組血清 RBP4、ox-LDL、TC、TG、HDL-C、LDL-C和Urea水平明顯高于正常對(duì)照組(P＜0.05)，Alb水平則明顯低于正常對(duì)照組(P＜0.05)，見(jiàn)表1。

表1 NS組和正常對(duì)照組各項(xiàng)目測(cè)定結(jié)果比較

二、NS患兒血清RBP4與血脂各指標(biāo)間的相關(guān)性

血清 RBP4 與ox-LDL、TC、TG、LDL-C、non HDL-C及Urea均呈正相關(guān)，見(jiàn)表2。分別以RBP4、ox-LDL為自變量，以與有相關(guān)性的其他指標(biāo)為應(yīng)變量進(jìn)行多元線(xiàn)性回歸分析。分析結(jié)果顯示，NS組血清 TC(β=0.617，P＜0.01)、Urea(β=0.259，P＜0.01)和 ox-LDL(β=0.199，P＜0.05)共同影響了48.4%的RBP4的變化;而血清non HDL-C(β=0.558，P＜0.01)、RBP4(β=0.167，P＜0.05)和 TG(β=0.174，P＜0.05)則共同決定了61.4%的ox-LDL變化。

表2 NS患兒血清RBP、ox-LDL與其他指標(biāo)的相關(guān)性

討 論

NS是兒童常見(jiàn)的一種腎小球疾病，高脂血癥為其主要臨床特征之一。高脂血癥與進(jìn)行性腎臟損傷、AS的發(fā)生有密切的聯(lián)系。NS患兒腎小球毛細(xì)血管壁通透性損傷使體內(nèi)氧自由基增加，脂質(zhì)和脂蛋白在過(guò)氧化反應(yīng)過(guò)程中釋放大量的活性氧，進(jìn)一步損傷腎上皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)的完整性和腎小球的通透性。另外，高濃度的ox-LDL也具有一定的細(xì)胞毒性，可直接損害腎小球動(dòng)脈的內(nèi)皮細(xì)胞及平滑肌細(xì)胞?？傊I臟病變導(dǎo)致脂代謝障礙，脂質(zhì)代謝異常與腎小球硬化的發(fā)生密切相關(guān)，是NS病情加重、復(fù)發(fā)及遷延的重要因素［7-8］。本研究結(jié)果顯示NS患兒血清ox-LDL水平明顯升高，與Urea呈明顯正相關(guān)，且與Alb呈明顯負(fù)相關(guān)，這與文獻(xiàn)［5］報(bào)道一致。

兒童NS的病理改變主要為腎小球損傷。因此，本研究發(fā)現(xiàn)NS患兒血清RBP4水平明顯升高。多項(xiàng)研究還證實(shí)RBP4與公認(rèn)的致AS的脂蛋白類(lèi)及脂代謝中的酶類(lèi)存在獨(dú)立相關(guān)性［9-12］，提示RBP4可能參與脂質(zhì)代謝。RBP4參與脂代謝的機(jī)制尚未闡明。由于RBP4是循環(huán)中視黃醇的唯一轉(zhuǎn)運(yùn)體，而視黃醇是形成維甲酸X受體(retinoid X receptor，RXR)的前體。推測(cè)RBP4調(diào)節(jié)脂代謝的可能機(jī)制之一是:RBP4可通過(guò)RXR，上調(diào)載脂蛋白CⅢ(apo CⅢ)表達(dá)，apo CⅢ可進(jìn)一步抑制脂蛋白脂肪酶活性，促進(jìn)極低密度脂蛋白(VLDL)水平的升高，升高的VLDL促進(jìn)易于氧化的sdLDL的形成［12］。本研究顯示 NS患兒血清 RBP4 水平與ox-LDL、LDL、nonHDL-C、TG、TC、Urea均呈明顯正相關(guān)，證實(shí)NS患兒的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中伴隨著血清RBP4水平的改變。進(jìn)一步多因素分析顯示，血清TC、Urea和ox-LDL水平共同影響了 48.4%的 RBP4的變化，且血清 TG、RBP4、nonHDL-C水平共同決定了61.4%的 ox-LDL變化。進(jìn)一步證實(shí)NS患兒的腎臟病變過(guò)程伴隨著血清RBP4水平的改變，升高的RBP4與ox-LDL的增加有一定的關(guān)聯(lián)。

總之，RBP4可能通過(guò)調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝，參與了NS的發(fā)生、發(fā)展。連續(xù)監(jiān)測(cè)NS患兒的血清RBP4水平有助于治療效果的評(píng)估以及預(yù)后的判斷。

［1］Yang Q，Graham TE，Mody N，etal.Serum retinol binding protein 4 contributes to insulin resistance in obesity and type 2 diabetes［J］.Nature，2005，436(7049):356-362.

［2］Usui S，Ichimura M，Ikeda S，etal.Association between serum retinol-binding protein 4 and small dense low-density lipoprotein cholesterol levels in young adult women［J］.Clin Chim Acta，2009，399(1-2):45-48.

［3］李翰卿，牛冬梅，汪俊軍，等.冠心病患者血漿視黃醇結(jié)合蛋白與氧化低密度脂蛋白水平相關(guān)性分析［J］.臨床檢驗(yàn)雜志，2012，30(3):196-198.

［4］Wu J，Shi YH，Niu DM，etal.Association among retinol-binding protein 4，small dense LDL cholesterol and oxidized LDL levels in dyslipidemia subjects［J］.Clin Biochem，2012，45(9):619-622.

［5］汪俊軍，韓愛(ài)忠，劉小傳，等.兒童腎病綜合征患者血漿氧化低密度脂蛋白及其免疫復(fù)合物水平［J］.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2010，25(5):352-355.

［6］王 成，楊翠華，張春妮，等.SLE患者血清氧化LDL水平檢測(cè)分析［J］.臨床檢驗(yàn)雜志，2010，28(2):116-118.

［7］Delvin EE，Merouani A，Levy E.Dyslipidemia in pediatric nephrotic syndrome:causes revisited［J］.Clin Biochem，2003，36(2):95-101.

［8］El-Melegy NT，Mohamed NA，Sayed MM，etal.Oxidative modification of low-density lipoprotein in relation to dyslipidemia and oxidant status in children with steroid sensitive nephritic syndrome［J］.Pediatr Res，2008，63(4):404-409.

［9］Von Eynatten M，Lepper PM，Liu D，etal.Retinolbinding protein 4 is associated with components of the metabolic syndrome，but not with insulin resistance，in men with type 2 diabetes or coronary artery disease［J］.Diabetologia，2007，50(9):1930-1937.

［10］Ingelsson E，Lind L.Circulating retinol-binding protein 4 and subclinical cardiovascular disease in the elderly［J］.Diabetes Care，2009，32(4):733-735.

［11］Lee JW，Im JA，Lee HR，etal.Visceral adiposity is associated with serum retinol binding protein-4 levels in healthy women［J］.Obesity(Silver Spring)，2007，15(9):2225-2232.

［12］Lin CC，Lai MM，Li TC，etal.Relationship between serum retinol-binding protein 4 and visfatin and the metabolic syndrome［J］.Diabetes Res Clin Pract，2009，85(1):24-29.