周鳳蕊，李廣明

(鄭州市第六人民醫(yī)院 肝病五科 河南 鄭州 450015)

肝硬化是以肝組織纖維化、假小葉形成為病理改變的進(jìn)行性、彌漫性、慢性肝病，臨床上以肝功能損害和門脈高壓為主要臨床表現(xiàn)，后期常出現(xiàn)腹水、消化道出血、脾腫大、肝腎綜合征等嚴(yán)重并發(fā)癥。目前以保護(hù)肝功能及對(duì)癥支持治療為主。近年來(lái)隨著對(duì)細(xì)胞研究認(rèn)識(shí)的不斷深入及分子生物學(xué)和細(xì)胞生物工程技術(shù)的快速發(fā)展，干細(xì)胞移植成了研究熱點(diǎn)，尤其是骨髓干細(xì)胞移植治療肝硬化顯示出良好前景，為失代償期肝硬化的治療提供了一種嶄新方法。筆者運(yùn)用經(jīng)肝動(dòng)脈自體骨髓干細(xì)胞移植治療失代償期肝硬化43例，取得了滿意療效，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2012年1月至2013年6月鄭州市第六人民醫(yī)院肝病五科住院的43例肝硬化患者，其中男性22例，女性21例，年齡(36.37±7.41)歲，病程(9.62±3.13)a;乙肝肝硬化31例，丙肝肝硬化10例，酒精性肝硬化2例，肝硬化程度按Child-Pugh 分級(jí)評(píng)定［1］。本研究已通過(guò)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 治療方法 ①術(shù)前準(zhǔn)備:術(shù)前12 h 行碘過(guò)敏實(shí)驗(yàn)、術(shù)區(qū)常規(guī)備皮，術(shù)前6 h 禁食水，患者移植當(dāng)天進(jìn)行隔離，采髓室消毒常規(guī)消毒;②自體骨髓干細(xì)胞的采集:取髂前上棘為穿刺點(diǎn)，術(shù)區(qū)常規(guī)消毒、鋪巾，采用浸潤(rùn)麻醉，骨髓穿刺針穿刺至骨髓腔，抽取骨髓160 ml，以15 000 U 肝素鈉抗凝;③自體骨髓干細(xì)胞的分離:抽取的抗凝骨髓血采用專門的干細(xì)胞分離試劑盒，用密度梯度離心法分離制成干細(xì)胞懸液，生理鹽水調(diào)節(jié)細(xì)胞密度，計(jì)數(shù)后置冰桶備用;④干細(xì)胞移植方法:在數(shù)字減影血管造影機(jī)下，局部浸潤(rùn)麻醉滿意后穿刺左側(cè)股動(dòng)脈，置入動(dòng)脈鞘，引入肝動(dòng)脈導(dǎo)管，在數(shù)字造影機(jī)下置于肝固有動(dòng)脈，了解血管分布，然后緩慢注入分離好的骨髓干細(xì)胞懸液約1.0 ×109/ml 細(xì)胞注入肝動(dòng)脈內(nèi)。術(shù)后拔出動(dòng)脈鞘，鹽袋加壓包扎穿刺部位，平臥12 h，禁止下肢劇烈活動(dòng)。

1.3 觀察指標(biāo)

1.3.1 血清生化指標(biāo)檢測(cè):分別于移植術(shù)前和術(shù)后第3 周、6 周、9 周檢測(cè)血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、總膽紅素(TBiL)、白蛋白(ALB)和凝血酶原時(shí)間(PT)。

1.3.2 臨床癥狀及體征變化:觀察患者治療前后乏力、食欲、腹脹、黃疸、腹水的變化。

1.3.3 不良反應(yīng)觀察:觀察患者不良反應(yīng)的發(fā)生情況，隨時(shí)記錄。

1.4 臨床療效判斷標(biāo)準(zhǔn)［2］顯效:臨床主要癥狀和體征消失，血清生化指標(biāo)檢查正常;有效:臨床主要癥狀和體征明顯改善，血清生化指標(biāo)好轉(zhuǎn);無(wú)效:臨床主要癥狀和體征無(wú)改善或加重，血清生化指標(biāo)無(wú)好轉(zhuǎn)甚至惡化。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 運(yùn)用SPSS 13.0 軟件，定量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，用t 檢驗(yàn)，定性資料用百分比表示，用χ2檢驗(yàn)。所有檢驗(yàn)均采用雙側(cè)檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)為α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 臨床療效 術(shù)后第9 周觀察，43例患者中顯效17例，有效14例，無(wú)效12例，總有效率為73.1%。

2.2 血清生化指標(biāo)變化 患者自體骨髓干細(xì)胞移植后第3 周血清生化指標(biāo)開(kāi)始出現(xiàn)變化，ALT、AST、TBiL開(kāi)始下降，ALB 開(kāi)始升高，PT 無(wú)明顯變化;至第6 周時(shí)ALT、AST、TBiL 均較術(shù)前明顯降低(P ＜0.05)，ALB較術(shù)前顯著升高(P ＜0.05)，PT 較前下降，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＞0.05);至第9 周時(shí)，ALT、AST、TBiL、ALB 和PT 與術(shù)前相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.05)，見(jiàn)表1。

表1 經(jīng)肝動(dòng)脈自體骨髓干細(xì)胞移植術(shù)前后血清生化指標(biāo)變化(±s)

表1 經(jīng)肝動(dòng)脈自體骨髓干細(xì)胞移植術(shù)前后血清生化指標(biāo)變化(±s)

組別 ALT/(U/L) AST/(U/L) TBiL /(μmol/L) ALB /(g/L)PT/s術(shù)前治療后3 周治療后6 周治療后9 周68.2±15.3 44.5±11.7 33.6±14.4 32.7±13.9 71.1±18.2 52.7±13.1 46.8±14.6 44.3±13.8 62.6±18.2 51.7±12.8 34.9±11.4 31.1±10.3 30.1±3.7 31.6±2.9 35.2±3.1 35.4±2.8 25.1±4.7 24.3±4.4 19.2±3.3 17.7±2.6

2.3 臨床癥狀及體征變化 自體骨髓干細(xì)胞移植術(shù)后第6 周時(shí)大多數(shù)患者臨床癥狀及體征明顯改善，至第9 周時(shí)改善顯著，其中黃疸減少13例，腹脹減少19例，乏力減少30例，食欲減退改善27例，腹水減少17例。見(jiàn)表2。

表2 經(jīng)肝動(dòng)脈自體骨髓干細(xì)胞移植術(shù)前后癥狀及體征的變化(n)

2.4 不良反應(yīng) 43例經(jīng)肝動(dòng)脈自體骨髓干細(xì)胞移植患者術(shù)中均未發(fā)現(xiàn)不良反應(yīng)，術(shù)后1例出現(xiàn)皮膚瘙癢，未特殊處理，4 h 后緩解;2例出現(xiàn)穿刺切口出血，給予加壓包扎;5例出現(xiàn)低熱，無(wú)藥物治療，自行緩解。

3 討論

我國(guó)為肝炎大國(guó)，肝炎逐漸發(fā)展為肝硬化，因此肝硬化為臨床常見(jiàn)病、多發(fā)病，年發(fā)病率17.1/10 萬(wàn)，每年全世界死于肝硬化的人數(shù)超過(guò)31 萬(wàn)，近幾年增加到50 萬(wàn)［3］。但對(duì)肝硬化的治療，一直以來(lái)缺乏有效的治療手段，只是對(duì)癥處理，不能延緩肝硬化進(jìn)程以及晚期并發(fā)癥的出現(xiàn)，失代償期肝硬化的終點(diǎn)治療方法肝移植，由于資源緊缺、費(fèi)用昂貴、排斥反應(yīng)等一些問(wèn)題在很大程度上限制了臨床治療和應(yīng)用。

干細(xì)胞能定向分化為特定功能細(xì)胞，利于器官的修復(fù)，甚至能替代失去功能的器官，主要應(yīng)用于器官損傷的治療及替代治療，是目前生命科學(xué)、分子生物學(xué)及細(xì)胞生物工程學(xué)研究的熱點(diǎn)［4］。研究表明，干細(xì)胞定向分化在肝細(xì)胞修復(fù)及肝細(xì)胞再生的過(guò)程中起著十分重要的作用，利于肝臟損傷修復(fù)。而干細(xì)胞的主要來(lái)源骨髓干細(xì)胞，也具有干細(xì)胞定向分化的潛能［5］。骨髓造血干細(xì)胞還可通過(guò)啟動(dòng)快速高效的內(nèi)源性肝細(xì)胞的增殖途徑，誘導(dǎo)后產(chǎn)生的肝細(xì)胞可以很好地替代受損肝細(xì)胞，進(jìn)而恢復(fù)肝臟的功能［6］，并且骨髓干細(xì)胞移植來(lái)源充足，取材方便，不受供體缺乏的限制，具有費(fèi)用低廉、技術(shù)風(fēng)險(xiǎn)小、安全性高、效果顯著等優(yōu)點(diǎn)，被譽(yù)為“肝硬化治療第二條終極途徑”。筆者基于以上理論，臨床開(kāi)展了經(jīng)肝動(dòng)脈自體骨髓干細(xì)胞移植治療失代償期肝硬化臨床療效及安全性觀察，結(jié)果發(fā)現(xiàn)骨髓干細(xì)胞移植后患者臨床癥狀及體征明顯改善，黃疸、腹水消失，腹脹減輕，食欲改善，乏力好轉(zhuǎn);血清生化指標(biāo)也有顯著變化，尤其是血清白蛋白的升高，提高了肝臟的合成及修復(fù)，增強(qiáng)了肝臟儲(chǔ)備能力。因此經(jīng)肝動(dòng)脈自體骨髓干細(xì)胞移植治療失代償期肝硬化是一種全新而有效的治療方法，療效確切，為失代償期肝硬化患者提供新的治療途徑，雖不能給失代償期肝硬化患者帶來(lái)治愈性效果，但很大程度上延緩肝硬化的進(jìn)展速度，提高患者的生存質(zhì)量，值得進(jìn)一步深入研究。

［1］ 葉任高.內(nèi)科學(xué)［M］.第5 版.北京:人民衛(wèi)生出版社，2002:460-468.

［2］ 中華人民共和國(guó)中醫(yī)藥行業(yè)標(biāo)準(zhǔn).中醫(yī)病證診斷療效標(biāo)準(zhǔn)［M］.南京:南京大學(xué)出版社，1994:17-18

［3］ Hunton D B，Bollman L，Hoffman H N.Studies of hepatic-function with indocyanine green ［J］.Gastroenterology，2006，(39):713-724.

［4］ Yao P.Activation of NF-KB is not essential for hepatocyte growth factor mediated antiapoptos is effect on WB F-344 cell but for WB cell proliferation［J］.Hepatology，2014，(40):391-398.

［5］ Jiang Y，Jahagibdar B N，Reinghardt R L，et al.Pluripotency of mesenchymal stem cells derived from adult marrow［J］.Nature，2012，418(6893):41-49.

［6］ 姚鵬.細(xì)胞因子在體外對(duì)大鼠肝干細(xì)胞的影響［J］.中華肝臟病雜志，2006，11(1):33-36.