王著敏，金 杰

(1.河南省第二人民醫(yī)院 內(nèi)科二病區(qū) 河南鄭州 451191;2.河南中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院 腦病三區(qū) 河南鄭州 450000)

慢性疲勞綜合征(chronic fatigue syndrome，CFS)患者長期的虛弱性疲勞嚴(yán)重影響日常工作和生活質(zhì)量。目前CFS的病因不清，臨床尚無有效治療藥物。從目前公認(rèn)的CFS診斷標(biāo)準(zhǔn)來看，診斷依據(jù)主要為患者的主訴，無客觀的體征和實驗室檢查、影像學(xué)資料，符合中醫(yī)學(xué)審癥求因、辨證論治的整體觀認(rèn)知疾病方式。本實驗通過觀察紅景天對慢性疲勞大鼠IL-2、TNF-α的影響，試圖從免疫調(diào)節(jié)角度闡述紅景天治療CFS的作用機制。

1 材料與方法

1.1 動物及分組 雄性SD大鼠40只，質(zhì)量(200±20)g，由河南省動物實驗中心提供(動物質(zhì)量合格證號:SYXX(豫)2005-0012)。大鼠自然進(jìn)食飲水，5只/籠，飼養(yǎng)環(huán)境為正常光照、室溫(20±2)℃、相對濕度40%。適應(yīng)5 d后，稱量大鼠質(zhì)量;按數(shù)字表法隨機分為正常組、模型組、紅景天組、歸脾丸組，每組10只。

1.2 動物模型制備

1.2.1 造模用具:①游泳池:長80 cm，寬50 cm，高50 cm;②自制束縛筒:管狀，長18 cm，內(nèi)徑5.8 cm，筒前端有一通氣口，內(nèi)徑1.8 cm;③自制敞箱:立方形，高33 cm，長、寬均為80 cm，周壁為黑色，底面用藍(lán)線劃分為面積相等的25個方塊;④電子天枰，型號:DS-671，d=0.5 g，由上海寺岡電子有限公司制造;⑤秒表;⑥溫度計。

1.2.2 造模方法:①冷水游泳:在不同時間到冷水中游泳，大鼠游泳時水溫為(16±1)℃，水深36 cm，每次游泳持續(xù)7 min。②束縛:采用上述介紹的自制束縛筒，大鼠頭向通氣口置入后，抵住其尾端，每次束縛30 min。③造模之日起，除正常組外，其余3組單號日期進(jìn)行冷水游泳，雙號日期進(jìn)行夾尾激怒(每次夾尾30 min)，并每日進(jìn)行束縛，造模時間為21 d。④從造模之日起，正常組普通飼養(yǎng)，模型組按3 ml/只給予生理鹽水灌胃;紅景天組按168 mg/(kg·d)給予圣地紅景天混懸液(紅景天:諾迪康膠囊，由西藏紅景天藥業(yè)股份有限公司制造，國藥準(zhǔn)字 Z10980020，0.28 g/粒)灌胃;歸脾丸組按900 mg/(kg·d)給予歸脾丸混懸液灌胃(歸脾丸，由河南省宛西制藥股份有限公司制造，國藥準(zhǔn)字Z41021897，每8丸相當(dāng)于原藥材3 g)，3 ml/只，每日1次，連續(xù)21 d。

1.3 儀器與試劑 低速自動平衡離心機(型號:LDZ5-2，產(chǎn)地:北京);放射免疫 γ計數(shù)器(型號:SN-682，上海核福光電儀器有限公司生產(chǎn));電熱恒溫水槽(型號:DK-8A，上海醫(yī)用恒溫設(shè)備廠生產(chǎn));IL-2放免試劑盒(解放軍總醫(yī)院科技開發(fā)中心提供);TNF-α放免試劑盒(北京科美東雅生物技術(shù)有限公司提供)。

1.4 取材及檢測方法 腹腔注射10%烏拉坦400 mg/kg麻醉大鼠后，打開腹腔，從腹主動脈取血3 ml收集到普通試管中，待血清析出后吸出血清，放置－70℃低溫冰箱中保存。采用放射免疫方法檢測血清中IL-2、TNF-α的含量。具體操作按試劑盒說明書進(jìn)行，由專業(yè)人員一次完成檢測。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 13.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，組間差異采用單因素方差分析:方差齊時采用LSD法(最小顯著差異法);方差不齊時采用Dunnett’s T3法。P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

正常組、紅景天組、歸脾丸組大鼠血清IL-2、TNF-α水平均較模型組高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。與正常組比較，紅景天組IL-2、TNF-α含量降低，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。與正常組比較，歸脾丸組IL-2、TNF-α含量降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。具體數(shù)據(jù)見表1。

表1 各組大鼠血清IL-2、TNF-α的比較(±s)

表1 各組大鼠血清IL-2、TNF-α的比較(±s)

組別 n IL-2 TNF-α正常組10 2.52±0.37 1.07±0.33模型組 10 1.46±0.27 0.46±0.19紅景天組 10 2.21±0.54 0.93±0.32歸脾丸組10 2.04±0.37 0.77±0.36

3 討論

CFS表現(xiàn)為長期原因不明的強疲勞感和身體不適，目前臨床上尚無有效治療藥物。CFS診斷主要根據(jù)患者的主訴，具有自限性，發(fā)病機制尚不清楚。本實驗從免疫調(diào)節(jié)角度觀察紅景天對慢性疲勞大鼠的影響，以闡明紅景天治療CFS的作用機制。

IL-2是一種具有高活化的多功能小分子蛋白，是由活化的CD4+T細(xì)胞及少量CD8+T細(xì)胞產(chǎn)生的一種免疫調(diào)節(jié)淋巴因子，能夠增強NK細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞的活性，刺激NK細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞，誘導(dǎo)IL-1β受體的生成，產(chǎn)生γ-INF，維持T細(xì)胞在體外的生長，激活多種免疫細(xì)胞。IL-2水平的高低反映了T細(xì)胞的功能狀態(tài)，其產(chǎn)生能力是機體細(xì)胞免疫功能的重要指標(biāo)。

TNF-α是由活化的NK細(xì)胞釋放產(chǎn)生的多肽類介質(zhì)，具有廣泛的生物學(xué)作用，大量臨床研究表明，TNF-α參與了炎癥感染、內(nèi)毒素休克、惡液質(zhì)性消瘦和營養(yǎng)不良綜合征、免疫調(diào)節(jié)等一系列病理過程，在細(xì)胞反應(yīng)中發(fā)揮了重要作用。TNF-α具有劑量依賴性，高劑量時可降低心輸出量，激活凝血系統(tǒng)，引起低糖血癥，致全身中毒性休克;中等劑量時以內(nèi)分泌方式作用于全身組織，導(dǎo)致發(fā)熱，刺激肝細(xì)胞分泌蛋白質(zhì)，抑制骨髓造血;低劑量時以自分泌和旁分泌方式作用于局部白細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞，誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)。也就是說，低劑量的TNF-α對機體具有免疫調(diào)節(jié)和保護(hù)作用，中、高等劑量參與機體多種病理改變，造成多器官損傷。

實驗結(jié)果顯示，模型組與正常組血清IL-2和TNF-α含量差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。這些差異可能是慢性疲勞綜合征發(fā)生的病理機制之一。經(jīng)紅景天、歸脾丸治療后，大鼠模型血清IL-2和TNF-α含量均有明顯升高，且紅景天治療組IL-2和TNF-α血清含量恢復(fù)至接近正常水平，優(yōu)于歸脾丸組(P＜0.05)。該結(jié)果說明，紅景天較歸脾丸具有更強的免疫調(diào)節(jié)作用。綜上所述，免疫調(diào)節(jié)可能是紅景天治療慢性疲勞綜合征獲效的機制之一。

［1］馬云.應(yīng)用白細(xì)胞介素-2增強運動員免疫力的效果觀察［J］.中國運動醫(yī)學(xué)雜志，2002，21(1):107-108.

［2］金其貫.過度訓(xùn)練對大鼠NK細(xì)胞和IL-2含量的影響［J］.體育科學(xué)，2001，21(6):67-69.