蘇瓊

[摘要] 目的 研究抗人肝癌免疫毫微粒的制備以及對靶細(xì)胞的殺傷作用。 方法 使用異型雙工能SPDP對人肝癌以及載阿霉素（ADR）和人血清蛋白微粒進(jìn)行偶聯(lián)，通過實(shí)驗(yàn)對其的免疫特性進(jìn)行測試。檢測的方法使用MTT法，這種方法的檢測對免疫毫微粒是否能夠?qū)w外具備殺傷的作用十分有效。檢測后在人肝癌老鼠模型上使用HAb18-HSA（ADM）-NS、HSA（ADM）-NS 和ADM， 來測試其對肝癌的抑制情況。結(jié)果 HAb18抗體可以偶聯(lián)到毫微粒上，對體外殺傷的細(xì)胞值為45.5 μg/mL，與ADM的366.1 μg/mL比較下，明顯了降低。免疫毫微粒能夠和靶細(xì)胞結(jié)合并且對靶細(xì)胞具有殺傷和選擇功能。 結(jié)論 偶聯(lián)的方法適用制備肝癌免疫毫微粒，并且免疫毫微粒在對抗肝癌治療上有著明顯的效果，值得推廣使用。

[關(guān)鍵詞] 人肝癌；免疫毫微粒；制備；免疫鑒定

[中圖分類號] R4 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1674-0742（2014）06（c）-0180-02

在我國每年發(fā)生肝癌致命的病例有很多，肝癌導(dǎo)致死亡的概率列居腫瘤致死忘總概率的第二。可想而知，肝癌對于人類產(chǎn)生的危害是巨大的，給患者和醫(yī)師帶來了很多困擾。關(guān)于治療肝癌的免疫毫微粒很多專家開始進(jìn)行研究。具有免疫性的毫微粒具有很大的載藥性，而且這種微粒還具有緩釋藥物，不需要進(jìn)行偶聯(lián)的特點(diǎn)，另外，毫微粒在病位進(jìn)行藥物治療時還具有選擇性，因此得到很多專家醫(yī)生的青睞[1]，選取2012年3月—5月間50只裸鼠為研究對象，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集了50只實(shí)驗(yàn)裸鼠，鼠齡在4～8歲之間，裸鼠為BALB/C型老鼠，50只裸鼠是有江西某以醫(yī)學(xué)院提供的。從人肝癌細(xì)胞中提取細(xì)胞株，ADM-NS的含量控制在34%左右，平均直徑在300 nm，需要被保存于溫度為5 ℃的環(huán)境下。使用濃度為21 mmolPL的異型雙功能交聯(lián)劑實(shí)現(xiàn)偶聯(lián)，

1.2 方法

使用異型雙工能SPDP對人肝癌以及載阿霉素（ADR）和人血清蛋白微粒進(jìn)行偶聯(lián)，通過實(shí)驗(yàn)對其的免疫特性進(jìn)行測試。檢測的方法使用MTT法，這種方法的檢測對免疫毫微粒是否能夠?qū)w外具備殺傷的作用十分有效[2]。檢測后在人肝癌老鼠模型上使用HAb18-HSA（ADM）-NS、HSA（ADM）-NS 和ADM，來測試其對肝癌的抑制情況。選用的ADM主要從江蘇某制藥廠調(diào)購過來，抗人體肝癌的抗體由軍醫(yī)院提供。

使用9 mL的單抗經(jīng)0.04 mol pL，PH值為7.6，在單抗經(jīng)中加速SPDP10L1，在常溫下進(jìn)行攪拌，攪拌的事件控制在0.5 h，然后使用PBS進(jìn)行洗脫。免疫毫粒選用29 mg，進(jìn)行超生均勻化，和單抗經(jīng)一樣加上同量的SPDP，并且進(jìn)行30 min的攪拌，然后用醋酸溶解液進(jìn)行清洗，清洗后留下的沉淀就是NP=PDP，把沉淀混入到醋酸液水中放于常溫下的室內(nèi)，這樣是為了還原NP-PDP。還原后使用離心洗滌劑進(jìn)行清洗剩余下來的NP-PDP-SH和Ab-PDP混合，在常溫下的室內(nèi)進(jìn)行振蕩，振蕩20 h左右后，使用PBS進(jìn)行多次洗滌，最后剩余的沉淀就是免疫毫微粒[3]。

1.3 主要儀器

制備免疫毫微粒的儀器主要是第二代LXJ離心機(jī)，該儀器是由上海某醫(yī)用工廠生產(chǎn)的；制備過程中使用的攪拌機(jī)時由浙江某儀表工產(chǎn)生產(chǎn)的D40-2F電動型攪拌機(jī)；觀察實(shí)驗(yàn)效果采用的顯微鏡是型號為PM-VBAD的熒光和倒置顯微鏡，該型號的顯微鏡是由日本公司生產(chǎn)的；自動定標(biāo)器是由我國北京某儀器廠生產(chǎn)的型號為FH463A；活度器由CII公司生產(chǎn)的型號為CRC-15R活度儀；最后使用的光度儀是由上海分析儀器廠生產(chǎn)的型號為751的紫外線外分光光度計[4]。

1.4 免疫毫微粒免疫性的鑒定

鑒定 HAb18-HSA （ADM）-NS 時使用的是間接凝結(jié)實(shí)驗(yàn)，具體做法如下：首先在選用的載波試驗(yàn)片上滴上濃度為505 μg/mL的 HAb18-HSA （ADM）-NS，然后加入選擇的裸鼠的抗血清，加入血清后要不間斷的進(jìn)行振蕩，同時在光鏡下觀察其變化情況；免疫熒光：使用502 μg/mL、101 μL的HAb18-HSAADM）-NS和IgGh混合，在30 min的4 ℃溫度下進(jìn)行染色，使用離心洗滌后觀察其變化，觀察時使用的是前面使用的PM-VBAD的熒光顯微鏡[5]；鑒定體外和細(xì)胞活性：在SMMC-7721 中加入HAb18-HAS （ADM）-NS和 HAS （ADM）-NS ，加入的兩種HAb18-HAS （ADM）-NS，HAS （ADM）-NS濃度均為 500 μg/mL，并且同上在4℃的室內(nèi)進(jìn)行30 min反應(yīng)，然后觀察變化；使用掃描電鏡觀察：取500 μg/mL的HAb18-HAS （ADM）-NS和 SMMC-7721，進(jìn)行混合，混合后的結(jié)合物使用掃描電鏡觀察。

1.5 統(tǒng)計方法

用統(tǒng)計學(xué)軟件 SPSS 13.0 對所得數(shù)據(jù)進(jìn)行處理分析，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）示，進(jìn)行 t 檢驗(yàn)，計數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

通過上述制備免疫毫微粒和鑒定其免疫性質(zhì)得出結(jié)果如下：

首先，對HAb18-HSA（ADM）-NS 的載藥量以及其微粒的直徑鑒定時發(fā)現(xiàn)HAb18-HSA（ADM）-NS 的載藥量達(dá)到了34%之多，而且在使用掃描電鏡觀察HAb18-HSA（ADM）-NS 形態(tài)時發(fā)現(xiàn)其表面十分光滑，形狀斯球體，而且各個大小很均勻。調(diào)查發(fā)現(xiàn)HAb18-HSA（ADM）-NS微粒的平均直徑為300 nm，圖一是其形態(tài)。

■

圖1 HAb18-HSA（ADM）-NS微粒形態(tài)

其次，是單抗體和免疫毫微粒的偶聯(lián)情況。我們選用的50只裸鼠中，采用裸鼠的抗血清加入到毫微粒后發(fā)現(xiàn)，原本分散的毫微粒在加入裸鼠的IgG血清后開始凝集，而沒有加入IgG的裸鼠抗血清則是均勻的分散。在加入FITC二抗后，原本光滑的免疫毫微粒的表面開始呈現(xiàn)色度明亮的黃綠色，而沒有加入FITC二抗的免疫毫微粒則沒有出現(xiàn)熒光色。由此可以看出使用單抗體和毫微粒進(jìn)行偶聯(lián)結(jié)果是成功的。endprint

另外，關(guān)于HAb18-HSA（ADM）-NS的免疫性反應(yīng)結(jié)果如下：在HAb18-HSA（ADM）-NS中加入裸鼠的血清后，HAb18-HSA（ADM）-NS形成顆粒。HAb18-HSA（ADM）-NS和肝癌細(xì)胞的結(jié)合則出現(xiàn)大量不可散離的HAb18-HSA（ADM）-NS，HAb18-HSA（ADM）-NS可以和肝癌靶細(xì)胞能夠結(jié)合。

最后，HAb18-HSA（ADM）-NS對肝癌體外靶細(xì)胞的殺傷性結(jié)果：從 SMMC-7721 細(xì)胞在使用各種藥物后的反應(yīng)變化來看，要?dú)话氲捏w外細(xì)胞必須使用濃度在55的ADM，而且 ，HAb18-HSA（ADM）-NS應(yīng)該控制在454μg/mL， HSA（ADM）-NS 為 345 μg/mL，ADM 為365 μg/mL?？梢?，HAb18-HSA（ADM）-NS對肝癌細(xì)胞的殺傷性是強(qiáng)大的。見表1。

表1 裸鼠腫瘤的抑制情況（x±s）

■

3 討論

通過藥物來殺傷腫瘤的研究發(fā)現(xiàn)，雖然藥物可以達(dá)到殺傷腫瘤的效果，但是這些藥物的不良反應(yīng)很大。那么對于怎么增加靶細(xì)胞藥物的濃度同時降低正常組織的藥物濃度是目前研究的熱點(diǎn)。

現(xiàn)在制備免疫毫微粒的材料也有很多。毫微粒是一種由天然或者合成的高分子形成的顆粒，這種顆?？梢杂擅?xì)血管來攜帶藥物進(jìn)行緩釋的作用[6]。人血清白蛋白毫微粒含有大量游離的羥基及氨基便于交聯(lián)， 且結(jié)構(gòu)清楚， 生物性能穩(wěn)定， 為人體自身白蛋白， 不會增加過敏反應(yīng)， 為人體理想的藥物載體[7]。通過人肝癌以及載阿霉素（ADR）和人血清蛋白微粒進(jìn)行偶聯(lián)是近幾年提出的效果顯著的方法。在該研究中通過使用SDPP制備免疫毫微粒的結(jié)果表明使用SDPP有利于實(shí)現(xiàn)單抗體和毫微粒的偶聯(lián)以制備出免疫的毫微粒[8]。如今已經(jīng)有專家在使用SDPP制備免疫毫微粒上取得了巨大的成功。而通過這種方法制備的免疫性毫微粒在殺傷腫瘤時不僅不會給患者帶來副作用或者過敏現(xiàn)象，而且能夠保證患者身體機(jī)能的穩(wěn)定在這個基礎(chǔ)上，使用SDPP的反應(yīng)來產(chǎn)生NP-PD，然后使用DTT來還原Ab-PDP。該研究在使用化療性的藥物治療癌癥時可以通過加大藥物的劑量達(dá)到該目的，然后大量的使用化療藥物來殺傷腫瘤以達(dá)到治療目的很容易給患者帶來不良反應(yīng)。那么如何在減少藥物的劑量的情況下實(shí)現(xiàn)腫瘤治療效果，很多專家都在進(jìn)行研究。

通過實(shí)驗(yàn)證明HAb18-HAS（ADM）-NS對靶細(xì)胞還具有選擇性的殺傷力這是ADM以及其他治療腫瘤藥物所不能比擬的。所以在今后治療肝癌中，可以采用以上制備免疫毫微粒的方法進(jìn)行，免疫毫微粒將是有效治療肝癌的藥劑，值得在臨床上推廣。

[參考文獻(xiàn)]

[1] Hart BA， Hintzeen RQ， Laman JD. Preparation of chitosan-polyaspartic acid-5-fluorouracil nanoparticles and its anti-carcinomaeffect on tumor growth in nude mice [J]. World J Gastroenterol，2008， 14（22）： 3554-3562

[2] 劉曉波，蔡美英，黎光，等. 抗體介導(dǎo)的阿霉素白蛋白免疫毫微粒的抗人肝癌作用研究[J]. 中華消化雜志，2009，32（1）：58-59.

[3] 闞和平，譚永法，李春芳，等.泰素免疫毫微球的制備及其抗人肝癌效果的動物實(shí)驗(yàn)研究[J]. 現(xiàn)代消化及介入診療，2010，15（4）：227-229.

[4] 李云春，蔡美英，王仲瓊，等. 單抗F（ab′）_2段導(dǎo)向抗肝癌阿霉素免疫毫微球的制備及其體外殺傷癌細(xì)胞作用[J]. 華西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2008（1）：8-11，14.

[5] Reszka R， Beck P， Fichtner L， et al. Body distribution of free， lipo-somal and nanoparticle-associated mitoxantrone in B16-melanoma-bearing mice[J]. J Pharmacol Exp Ther， 2008， 28（1）：232-238.

[6] 朱明明，劉斌，李江. 人原發(fā)性肝癌中多藥耐藥相關(guān)蛋白MRP的表達(dá)、耐藥機(jī)制及逆轉(zhuǎn)的研究進(jìn)展[J]. 昆明醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2012（S1）：202-206.

[7] 趙飛蘭. 肝癌相關(guān)抗原KINECTIN基因的重組、表達(dá)及其致敏DC抗肝癌活性研究[D].南寧：廣西醫(yī)科大學(xué)，2010.

[8] Rolland A， Bourel D， Genetet B， et al. Monoclonal antibodies cova-lently coupled to polymethr： is nanoparticles： in vitro specifictarget-ing to human T lymphocytes[J]. Int J Pharm， 2009， 39（1-2）：173-179.

（收稿日期：2014-03-29）endprint

另外，關(guān)于HAb18-HSA（ADM）-NS的免疫性反應(yīng)結(jié)果如下：在HAb18-HSA（ADM）-NS中加入裸鼠的血清后，HAb18-HSA（ADM）-NS形成顆粒。HAb18-HSA（ADM）-NS和肝癌細(xì)胞的結(jié)合則出現(xiàn)大量不可散離的HAb18-HSA（ADM）-NS，HAb18-HSA（ADM）-NS可以和肝癌靶細(xì)胞能夠結(jié)合。

最后，HAb18-HSA（ADM）-NS對肝癌體外靶細(xì)胞的殺傷性結(jié)果：從 SMMC-7721 細(xì)胞在使用各種藥物后的反應(yīng)變化來看，要?dú)话氲捏w外細(xì)胞必須使用濃度在55的ADM，而且 ，HAb18-HSA（ADM）-NS應(yīng)該控制在454μg/mL， HSA（ADM）-NS 為 345 μg/mL，ADM 為365 μg/mL?？梢?，HAb18-HSA（ADM）-NS對肝癌細(xì)胞的殺傷性是強(qiáng)大的。見表1。

表1 裸鼠腫瘤的抑制情況（x±s）

■

3 討論

通過藥物來殺傷腫瘤的研究發(fā)現(xiàn)，雖然藥物可以達(dá)到殺傷腫瘤的效果，但是這些藥物的不良反應(yīng)很大。那么對于怎么增加靶細(xì)胞藥物的濃度同時降低正常組織的藥物濃度是目前研究的熱點(diǎn)。

現(xiàn)在制備免疫毫微粒的材料也有很多。毫微粒是一種由天然或者合成的高分子形成的顆粒，這種顆?？梢杂擅?xì)血管來攜帶藥物進(jìn)行緩釋的作用[6]。人血清白蛋白毫微粒含有大量游離的羥基及氨基便于交聯(lián)， 且結(jié)構(gòu)清楚， 生物性能穩(wěn)定， 為人體自身白蛋白， 不會增加過敏反應(yīng)， 為人體理想的藥物載體[7]。通過人肝癌以及載阿霉素（ADR）和人血清蛋白微粒進(jìn)行偶聯(lián)是近幾年提出的效果顯著的方法。在該研究中通過使用SDPP制備免疫毫微粒的結(jié)果表明使用SDPP有利于實(shí)現(xiàn)單抗體和毫微粒的偶聯(lián)以制備出免疫的毫微粒[8]。如今已經(jīng)有專家在使用SDPP制備免疫毫微粒上取得了巨大的成功。而通過這種方法制備的免疫性毫微粒在殺傷腫瘤時不僅不會給患者帶來副作用或者過敏現(xiàn)象，而且能夠保證患者身體機(jī)能的穩(wěn)定在這個基礎(chǔ)上，使用SDPP的反應(yīng)來產(chǎn)生NP-PD，然后使用DTT來還原Ab-PDP。該研究在使用化療性的藥物治療癌癥時可以通過加大藥物的劑量達(dá)到該目的，然后大量的使用化療藥物來殺傷腫瘤以達(dá)到治療目的很容易給患者帶來不良反應(yīng)。那么如何在減少藥物的劑量的情況下實(shí)現(xiàn)腫瘤治療效果，很多專家都在進(jìn)行研究。

通過實(shí)驗(yàn)證明HAb18-HAS（ADM）-NS對靶細(xì)胞還具有選擇性的殺傷力這是ADM以及其他治療腫瘤藥物所不能比擬的。所以在今后治療肝癌中，可以采用以上制備免疫毫微粒的方法進(jìn)行，免疫毫微粒將是有效治療肝癌的藥劑，值得在臨床上推廣。

[參考文獻(xiàn)]

[1] Hart BA， Hintzeen RQ， Laman JD. Preparation of chitosan-polyaspartic acid-5-fluorouracil nanoparticles and its anti-carcinomaeffect on tumor growth in nude mice [J]. World J Gastroenterol，2008， 14（22）： 3554-3562

[2] 劉曉波，蔡美英，黎光，等. 抗體介導(dǎo)的阿霉素白蛋白免疫毫微粒的抗人肝癌作用研究[J]. 中華消化雜志，2009，32（1）：58-59.

[3] 闞和平，譚永法，李春芳，等.泰素免疫毫微球的制備及其抗人肝癌效果的動物實(shí)驗(yàn)研究[J]. 現(xiàn)代消化及介入診療，2010，15（4）：227-229.

[4] 李云春，蔡美英，王仲瓊，等. 單抗F（ab′）_2段導(dǎo)向抗肝癌阿霉素免疫毫微球的制備及其體外殺傷癌細(xì)胞作用[J]. 華西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2008（1）：8-11，14.

[5] Reszka R， Beck P， Fichtner L， et al. Body distribution of free， lipo-somal and nanoparticle-associated mitoxantrone in B16-melanoma-bearing mice[J]. J Pharmacol Exp Ther， 2008， 28（1）：232-238.

[6] 朱明明，劉斌，李江. 人原發(fā)性肝癌中多藥耐藥相關(guān)蛋白MRP的表達(dá)、耐藥機(jī)制及逆轉(zhuǎn)的研究進(jìn)展[J]. 昆明醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2012（S1）：202-206.

[7] 趙飛蘭. 肝癌相關(guān)抗原KINECTIN基因的重組、表達(dá)及其致敏DC抗肝癌活性研究[D].南寧：廣西醫(yī)科大學(xué)，2010.

[8] Rolland A， Bourel D， Genetet B， et al. Monoclonal antibodies cova-lently coupled to polymethr： is nanoparticles： in vitro specifictarget-ing to human T lymphocytes[J]. Int J Pharm， 2009， 39（1-2）：173-179.

（收稿日期：2014-03-29）endprint

另外，關(guān)于HAb18-HSA（ADM）-NS的免疫性反應(yīng)結(jié)果如下：在HAb18-HSA（ADM）-NS中加入裸鼠的血清后，HAb18-HSA（ADM）-NS形成顆粒。HAb18-HSA（ADM）-NS和肝癌細(xì)胞的結(jié)合則出現(xiàn)大量不可散離的HAb18-HSA（ADM）-NS，HAb18-HSA（ADM）-NS可以和肝癌靶細(xì)胞能夠結(jié)合。

最后，HAb18-HSA（ADM）-NS對肝癌體外靶細(xì)胞的殺傷性結(jié)果：從 SMMC-7721 細(xì)胞在使用各種藥物后的反應(yīng)變化來看，要?dú)话氲捏w外細(xì)胞必須使用濃度在55的ADM，而且 ，HAb18-HSA（ADM）-NS應(yīng)該控制在454μg/mL， HSA（ADM）-NS 為 345 μg/mL，ADM 為365 μg/mL?？梢姡琀Ab18-HSA（ADM）-NS對肝癌細(xì)胞的殺傷性是強(qiáng)大的。見表1。

表1 裸鼠腫瘤的抑制情況（x±s）

■

3 討論

通過藥物來殺傷腫瘤的研究發(fā)現(xiàn)，雖然藥物可以達(dá)到殺傷腫瘤的效果，但是這些藥物的不良反應(yīng)很大。那么對于怎么增加靶細(xì)胞藥物的濃度同時降低正常組織的藥物濃度是目前研究的熱點(diǎn)。

現(xiàn)在制備免疫毫微粒的材料也有很多。毫微粒是一種由天然或者合成的高分子形成的顆粒，這種顆粒可以由毛細(xì)血管來攜帶藥物進(jìn)行緩釋的作用[6]。人血清白蛋白毫微粒含有大量游離的羥基及氨基便于交聯(lián)， 且結(jié)構(gòu)清楚， 生物性能穩(wěn)定， 為人體自身白蛋白， 不會增加過敏反應(yīng)， 為人體理想的藥物載體[7]。通過人肝癌以及載阿霉素（ADR）和人血清蛋白微粒進(jìn)行偶聯(lián)是近幾年提出的效果顯著的方法。在該研究中通過使用SDPP制備免疫毫微粒的結(jié)果表明使用SDPP有利于實(shí)現(xiàn)單抗體和毫微粒的偶聯(lián)以制備出免疫的毫微粒[8]。如今已經(jīng)有專家在使用SDPP制備免疫毫微粒上取得了巨大的成功。而通過這種方法制備的免疫性毫微粒在殺傷腫瘤時不僅不會給患者帶來副作用或者過敏現(xiàn)象，而且能夠保證患者身體機(jī)能的穩(wěn)定在這個基礎(chǔ)上，使用SDPP的反應(yīng)來產(chǎn)生NP-PD，然后使用DTT來還原Ab-PDP。該研究在使用化療性的藥物治療癌癥時可以通過加大藥物的劑量達(dá)到該目的，然后大量的使用化療藥物來殺傷腫瘤以達(dá)到治療目的很容易給患者帶來不良反應(yīng)。那么如何在減少藥物的劑量的情況下實(shí)現(xiàn)腫瘤治療效果，很多專家都在進(jìn)行研究。

通過實(shí)驗(yàn)證明HAb18-HAS（ADM）-NS對靶細(xì)胞還具有選擇性的殺傷力這是ADM以及其他治療腫瘤藥物所不能比擬的。所以在今后治療肝癌中，可以采用以上制備免疫毫微粒的方法進(jìn)行，免疫毫微粒將是有效治療肝癌的藥劑，值得在臨床上推廣。

[參考文獻(xiàn)]

[1] Hart BA， Hintzeen RQ， Laman JD. Preparation of chitosan-polyaspartic acid-5-fluorouracil nanoparticles and its anti-carcinomaeffect on tumor growth in nude mice [J]. World J Gastroenterol，2008， 14（22）： 3554-3562

[2] 劉曉波，蔡美英，黎光，等. 抗體介導(dǎo)的阿霉素白蛋白免疫毫微粒的抗人肝癌作用研究[J]. 中華消化雜志，2009，32（1）：58-59.

[3] 闞和平，譚永法，李春芳，等.泰素免疫毫微球的制備及其抗人肝癌效果的動物實(shí)驗(yàn)研究[J]. 現(xiàn)代消化及介入診療，2010，15（4）：227-229.

[4] 李云春，蔡美英，王仲瓊，等. 單抗F（ab′）_2段導(dǎo)向抗肝癌阿霉素免疫毫微球的制備及其體外殺傷癌細(xì)胞作用[J]. 華西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2008（1）：8-11，14.

[5] Reszka R， Beck P， Fichtner L， et al. Body distribution of free， lipo-somal and nanoparticle-associated mitoxantrone in B16-melanoma-bearing mice[J]. J Pharmacol Exp Ther， 2008， 28（1）：232-238.

[6] 朱明明，劉斌，李江. 人原發(fā)性肝癌中多藥耐藥相關(guān)蛋白MRP的表達(dá)、耐藥機(jī)制及逆轉(zhuǎn)的研究進(jìn)展[J]. 昆明醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2012（S1）：202-206.

[7] 趙飛蘭. 肝癌相關(guān)抗原KINECTIN基因的重組、表達(dá)及其致敏DC抗肝癌活性研究[D].南寧：廣西醫(yī)科大學(xué)，2010.

[8] Rolland A， Bourel D， Genetet B， et al. Monoclonal antibodies cova-lently coupled to polymethr： is nanoparticles： in vitro specifictarget-ing to human T lymphocytes[J]. Int J Pharm， 2009， 39（1-2）：173-179.

（收稿日期：2014-03-29）endprint