張 毅 ，秦海軍 ，馬 玲 ，陳師農(nóng) ，任燕茹

(1．安徽省藥物研究所，安徽 合肥 230022;2．安徽省中藥研究與開發(fā)重點實驗室，安徽 合肥 230022;3．安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，安徽 合肥 230031)

木瓜為薔薇科植物貼梗海棠 Chaenomeles speciosa(Sweet)Nakai的干燥近成熟果實，主產(chǎn)于安徽宣城、重慶綦江以及湖北資丘，分別習(xí)稱為宣木瓜、川木瓜與資丘木瓜，歷代本草以宣木瓜為道地藥材。木瓜味酸、溫，歸肝、脾經(jīng)，具有平肝舒筋、和胃化濕的功效[1]。其化學(xué)成分有糖、氨基酸、黃酮、有機酸、三萜和皂苷等，其中黃酮類物質(zhì)具有穩(wěn)定血管、保持毛細血管彈性、降低血壓、抗?jié)兊乃幚碜饔肹2]。黃酮類化合物的提取，一般可用乙酸乙酯、丙酮、乙醇、甲醇、水等作為溶劑，因此筆者分別選用水、50%乙醇、70%乙醇和乙酸乙酯作為提取溶劑[3]，考察其對總黃硐提取率的影響。

1 儀器與試藥

LG-04型中藥材粉碎機(瑞安市百信藥機械廠);SHZ-D型循環(huán)水式真空泵(河南省鞏義市英峪儀器廠);As3120B型超聲清洗器(上海新芝生物技術(shù)研究所);可見-紫外分光光度計(UV-2550型，島津);電子天平(Mettter AE240);Anke TDL80-2B型離心機(上海安亭科學(xué)儀器廠);DHG-9123A型電熱鼓風(fēng)干燥箱(上海一恒科技有限公司)。蘆丁對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為100080-200306);乙醇為分析純，水為重蒸餾水;宣木瓜藥材購于宣城市開發(fā)區(qū)。

2 方法與結(jié)果

2．1 提取方法[4-6]

加水回流提取(方法1):稱取宣木瓜藥材(過40目篩)10 g，加10倍量水，提取3次，每次1 h，濾過，合并濾液，取樣測定含量。

加水索氏提取(方法2):稱取宣木瓜藥材(過40目篩)10 g，加300 mL水索氏提取至提取液無色，濾過，合并濾液，取樣測定含量。

加水超聲提取(方法3):稱取宣木瓜藥材(過40目篩)10 g，加10倍量水，超聲提取3次，每次30 min，濾過，合并濾液，取樣測定含量。

加50%乙醇回流提取(方法4):稱取宣木瓜藥材(過40目篩)10 g，加10倍量50%乙醇，回流提取3次，每次1 h，濾過，合并濾液，取樣測定含量。

加50%乙醇索氏提取(方法5):稱取宣木瓜藥材(過40目篩)10 g，加300 mL 50%乙醇索氏提取至提取液無色，濾過，取樣測定含量。

加50%乙醇超聲提取(方法6):稱取宣木瓜藥材(過40目篩)10 g，加10倍量50%乙醇，超聲提取3次，每次30 min，濾過，合并濾液，取樣測定含量。

加70%乙醇回流提取(方法7):稱取宣木瓜藥材(過40目篩)10 g，加10倍量70%乙醇，回流提取3次，每次1 h，濾過，合并濾液，取樣測定含量。

加70%乙醇索氏提取(方法8):稱取宣木瓜藥材(過40目篩)10 g，加300 mL 70%乙醇索氏提取至提取液無色，濾過，取樣測定含量。

加70%乙醇超聲提取(方法9):稱取宣木瓜藥材(過40目篩)10 g，加10倍量70%乙醇，超聲提取3次，每次30 min，濾過，合并濾液，取樣測定含量。

加乙酸乙酯回流提取(方法10):稱取宣木瓜藥材(過40目篩)10 g，加10倍量乙酸乙酯，回流提取3次，每次1 h，濾過，合并濾液，取樣測定含量。

加乙酸乙酯索氏提取(方法11):稱取宣木瓜藥材(過40目篩)10 g，加300 mL乙酸乙酯索氏提取至提取液無色，濾過，取樣測定含量。

加乙酸乙酯超聲提取(方法12):稱取宣木瓜藥材(過40目篩)10 g，加10倍量乙酸乙酯，超聲提取3次，每次30 min，濾過，合并濾液，取樣測定宣木瓜總黃酮含量。

2．2 總黃酮含量測定[7-9]

2．2．1 溶液制備

精密稱取蘆丁對照品5．0 mg，以70%乙醇為溶劑，定容至10 mL容量瓶中，配制成0．50 g/L蘆丁對照品溶液。精密稱取2．0 g宣木瓜粗粉，至具塞錐形瓶中，加入70%乙醇25 mL，超聲30 min，過濾，續(xù)濾液定容置100 mL容量瓶中，搖勻，備用，即得供試品溶液。

2．2．2 測定波長確定

吸取2．0 mL對照品溶液和供試品溶液，分別置10 mL容量瓶中，加入5%亞硝酸鈉1 mL放置6 min后，加5%三氯化鋁1 mL放置6 min，再加4%的氫氧化鈉5 mL，靜置15 min，以70%乙醇定容，搖勻，離心(2 500 r/min，10 min)，取上清液，對照管以相應(yīng)試劑做空白，樣品管以未經(jīng)顯色的供試品溶液為空白，在400～700 nm波長范圍內(nèi)掃描，結(jié)果見圖1。結(jié)果表明，兩種溶液均在500nm波長處有最大吸收，故選擇500nm為測定波長。

圖1 紫外光譜掃描圖

2．2．3 方法學(xué)考察

標(biāo)準(zhǔn)曲線制備:取 0．25，0．50，1．00，1．20，1．50 mL 對照品溶液，分別置10 mL容量瓶中，加入5%亞硝酸鈉1 mL，放置6 min后，加5%三氯化鋁1 mL放置6 min，再加4%的氫氧化鈉5 mL，靜置15 min，以70%乙醇定容，搖勻，離心(2 500 r/min，10 min)，取上清液，在500 nm處測定吸光度。以吸光度A為縱坐標(biāo)、蘆丁質(zhì)量濃度 C(g/L)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為 A=11．123 C+0．006 8，r=0．997 7(n=5)。結(jié)果表明，蘆丁質(zhì)量濃度在0．0125～0．075 g/L范圍內(nèi)與吸光度呈良好的線性關(guān)系。

精密度試驗:取宣木瓜粗粉，按2．2．1項下方法制備供試品溶液6份，分別精密吸取2 mL，按標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項下方法操作，測定吸光度，計算含量。結(jié)果含量的 RSD為1．15%，表明方法精密度良好。

重復(fù)性試驗:精密吸取2．2．1項下蘆丁對照品溶液1 mL，共6份，按標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項下方法操作，分別測定吸光度，計算含量。結(jié)果的 RSD為0．18%，表明方法重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性試驗:精密吸取2．2．1項下供試品溶液2 mL，按標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項下方法操作，每隔10 min測定1次吸光度，計算含量。結(jié)果1 h內(nèi)測得含量的 RSD為1．45%，表明供試品溶液在1 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

加樣回收試驗:取已知含量的樣品，精密稱定，平行9份，再分別精密加入蘆丁對照品溶液適量，按2．2．1項下方法制備供試品溶液，分別從中精密吸取2 mL，按標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項下方法操作，測定吸光度，計算回收率。結(jié)果見表1。

表1 蘆丁加樣回收試驗結(jié)果(n=9)

2．3 樣品測定結(jié)果

以標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計算宣木瓜總黃酮質(zhì)量濃度 C(以蘆丁計)，計算出總黃酮含量 Y=(C×N/宣木瓜質(zhì)量)×100%(N為稀釋倍數(shù))。結(jié)果見表2?？梢?，在相同提取方法下，以70%乙醇作為溶劑，宣木瓜總黃酮含量較高，提取率較高;在相同溶劑下，超聲和回流時宣木瓜總黃酮提取率較高，并相差不大。因此，選用70%乙醇作為溶劑，超聲和回流都能使宣木瓜總黃酮有很高的提取率。

表2 不同的溶劑和提取方法時宣木瓜總黃酮的含量(%)

3 討論

從試驗結(jié)果可以看出，回流提取法的宣木瓜總黃酮提取率與超聲提取法相差不大，各有優(yōu)缺點:回流提取法提取時間長，能耗高，可用于工業(yè)化大生產(chǎn);超聲提取法作用時間短，提取溫度低，操作簡單，可用于實驗室少量的提取和含量測定。

木瓜為藥食兩用的佳品，具有“百益之果”的美稱，藥理研究表明其具有抗炎、鎮(zhèn)痛、調(diào)節(jié)免疫的作用[10]。利用木瓜提取黃酮類化合物，不僅可為黃酮類物質(zhì)的提取提供新的材料，也可為木瓜產(chǎn)業(yè)尋找到新的開發(fā)點。

[1]謝海偉，文 冰．木瓜藥理成分及產(chǎn)品開發(fā)研究進展[J]．生命科學(xué)研究，2012，16(1):79-84．

[2]鄒傳宗．木瓜活性成分及藥理作用研究概述[J]．園藝與種苗，2012(3):55-58．

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[4]李華榮，孫 鑫．木瓜中總黃酮提取方法研究進展[J]．中國藥業(yè)，2010，19(16):85．

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