陳 杰，李 展

(河南省食品藥品檢驗(yàn)所，河南 鄭州 450003)

利魯唑?yàn)楣劝彼猁}拮抗劑，可抑制腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)的釋放，對(duì)谷氨酸能神經(jīng)突觸傳遞有抑制作用，并抑制γ氨基丁酸(GABA)、多巴胺、谷氨酸的再攝取;還可明顯抑制興奮性氨基酸的活性;可穩(wěn)定電壓依賴(lài)性鈉通道的失活狀態(tài)，具有明顯的神經(jīng)保護(hù)作用。其主要用于運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元疾病的治療。目前，國(guó)內(nèi)共有3家企業(yè)生產(chǎn)利魯唑片，其有關(guān)物質(zhì)測(cè)定方法均為高效液相色譜(HPLC)法，色譜條件及測(cè)定方法有一定差異[1-3];含量測(cè)定方法均為紫外光光(UV)外標(biāo)法。筆者參照USP33[4]，以原研產(chǎn)品為基礎(chǔ)，征集這3家企業(yè)共9批樣品，在進(jìn)行質(zhì)量研究并比對(duì)質(zhì)量的基礎(chǔ)上，建立有關(guān)物質(zhì)及含量測(cè)定的HPLC測(cè)定方法。

1 儀器與試藥

Agilent 1200型高效液相色譜儀(美國(guó)Waters公司);AX205型電子天平(Metler公司)。利魯唑?qū)φ掌?含量99．1%，魯南制藥股份有限公司);力如太(規(guī)格為每片50 mg，AventisPharmas公司，批號(hào)為H112405);乙腈為色譜純。

2 方法與結(jié)果

2．1 有關(guān)物質(zhì)測(cè)定

2．1．1 色譜條件

色譜柱:用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，Agilent TC-C18柱(250 mm ×4．6 mm，5 μm);流動(dòng)相:乙腈 -水(9 ∶11);檢測(cè)波長(zhǎng):221 nm;流速:1．0 mL/min。理論板數(shù)按利魯唑峰計(jì)算不得低于2 000。

2．1．2 溶液制備

取本品研成細(xì)粉，精密稱(chēng)取細(xì)粉適量，加流動(dòng)相制成每1 mL中約含500 μg的溶液，作為供試品溶液。精密量取供試品溶液1 mL，置100 mL容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照溶液。

2．1．3 測(cè)定方法

取對(duì)照溶液10 μL，注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測(cè)靈敏度，使主峰高約為滿量程的20%，再精密量取供試品溶液和對(duì)照溶液各10 μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至供試品溶液主峰的保留時(shí)間的3倍。

2．1．4 方法學(xué)考察

專(zhuān)屬性試驗(yàn):取本品適量，分別進(jìn)行酸破壞(5 mol/L HCl)、堿破壞(0．5 mol/L NaOH)、氧化破壞(2%H2O2)、熱破壞(100 ℃水浴破壞)和光破壞(照度3 000 lx，7 d)試驗(yàn)。結(jié)果見(jiàn)圖1。表明擬訂的色譜條件能有效分離破壞后降解產(chǎn)物。

檢出限確定:取對(duì)照溶液，逐級(jí)稀釋?zhuān)磾M訂的色譜條件進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果檢出限為0．32 ng。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一供試品溶液，分別于 0，2，4，8，12 h時(shí)依法測(cè)定，有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)結(jié)果基本一致，表明用流動(dòng)相稀釋制備的供試品溶液穩(wěn)定性良好。

圖1 專(zhuān)屬性實(shí)驗(yàn)色譜圖

2．1．5 樣品檢測(cè)

取征集的各企業(yè)產(chǎn)品及原研產(chǎn)品，按擬訂的方法檢測(cè)。各企業(yè)產(chǎn)品原有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)方法見(jiàn)表1，檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表2。

表1 各廠家利魯唑片有關(guān)物質(zhì)測(cè)定方法比較

表2 各企業(yè)產(chǎn)品有關(guān)物質(zhì)測(cè)定結(jié)果(%)

2．2 含量測(cè)定

2．2．1 色譜條件

色譜柱及流動(dòng)相:同有關(guān)物質(zhì)測(cè)定方法;檢測(cè)波長(zhǎng):254 nm;流速:1．0 mL/min;進(jìn)樣量:10 μL。理論板數(shù)按利魯唑峰計(jì)算不得低于2 000。

2．2．2 溶液制備

取本品研成細(xì)粉，精密稱(chēng)取細(xì)粉適量，加流動(dòng)相制成每1 mL中約含50 μg的溶液，作為供試品溶液。取利魯唑?qū)φ掌愤m量，同法制成相同質(zhì)量濃度的對(duì)照品溶液。

2．2．3 方法學(xué)考察

加樣回收試驗(yàn):分別取利魯唑?qū)φ掌?，10，12 mg各3份，分別加適量的輔料(磷酸氫鈣、微晶纖維素、微粉硅膠、硬脂酸鎂、交聯(lián)聚維酮K30、羧甲淀粉鈉)，依法制成供試品溶液，測(cè)定含量，計(jì)算回收率。結(jié)果平均回收率為99．98%，RSD=0．35%(n=9)。

精密度試驗(yàn):取回收試驗(yàn)中由10 mg利魯唑?qū)φ掌啡芤褐苽涞耐环莨┰嚻啡芤海B續(xù)進(jìn)樣6次。結(jié)果峰面積的 RSD=0．41%(n=6)。

線性關(guān)系考察:取利魯唑?qū)φ掌?5，8，10，12，15 mg，依質(zhì)量法制成對(duì)照品溶液并測(cè)定，以利魯唑質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，回歸方程為 Y=28 439 X-796．55，R2=0．9998(n=5)。結(jié)果表明，利魯唑進(jìn)樣量線性范圍為0．25 ～0．75μg。

2．2．4 樣品含量測(cè)定

取各企業(yè)產(chǎn)品及原研產(chǎn)品，按擬訂方法進(jìn)樣測(cè)定，并與采用UV法測(cè)定結(jié)果比較。結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 各企業(yè)產(chǎn)品利魯唑含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

國(guó)內(nèi)3家生產(chǎn)利魯唑原料的企業(yè)，生產(chǎn)工藝各不相同，產(chǎn)品晶型和雜質(zhì)各不相同。本試驗(yàn)中統(tǒng)一了利魯唑片的有關(guān)物質(zhì)測(cè)定方法，經(jīng)試驗(yàn)比對(duì)，與其他3種色譜體系相比，擬訂方法對(duì)雜質(zhì)的分離度更好，與原方法相比增加了單雜的控制。由于檢測(cè)波長(zhǎng)改為221nm，加大了供試品溶液質(zhì)量濃度，因此雜質(zhì)峰檢出更多，總雜檢出值更大。

與原方法相比，含量測(cè)定改為HPLC法后含量測(cè)定結(jié)果下降約2%，分析原因可能是原方法受到來(lái)自輔料及雜質(zhì)的干擾所致。HPLC法測(cè)定含量，不僅提高了方法專(zhuān)屬性，且排除了原料中雜質(zhì)的干擾。

[1]YBH13482004，國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)[S]．

[2]YBH17352004，國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)[S]．

[3]YBH16452005，國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)[S]．

[4]The Vnited states Pharmacopeial convention．U．S．Pharmacopeial 33-NF28[S]．Washington:The Broad of Trusfees，2010:2 124-2 125．