曹大春，余敏靈，周 筠

(1.四川省新津縣中醫(yī)醫(yī)院，四川 新津611430;2.四川省樂山食品藥品檢驗檢測中心，四川 樂山 614000;3.四川省樂山市第二人民醫(yī)院，四川 樂山 614000)

甲硝唑片為抗厭氧菌、抗滴蟲口服制劑，收載于《中國藥典》2010年版二部［1］。在實驗中我們發(fā)現(xiàn)甲硝唑片中含有微量亞硝酸鹽。由于亞硝酸鹽對人機體有一定的危害［2］，定量分析制劑中的亞硝酸鹽對控制甲硝唑片質(zhì)量有較為重要的意義。迄今還沒有采用離子色譜法測定甲硝唑中亞硝酸根的相關報道。參閱相關文獻［3，4］，我們采用離子色譜法對甲硝唑片中亞硝酸鹽進行了定量分析，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 儀器與試藥 ICS-90A離子色譜儀(美國DIONEX);ASRS_4MM淋洗液發(fā)生器(美國DIONEX);ASRS300(4-mm)陰離子抑制器;(美國DIONEX);DS5電導檢測器(美國DIONEX);Chromeleon色譜工作站;IonpacAS11-HC型分離柱(4×250 mm)(美國DIONEX);IonpacAG11-HC型保護柱(4 mm×50 mm)(美國DIONEX);XS205電子天平(德國mettler toledo公司)。標準亞硝酸根溶液(1 mg/mL)批號:12D409，廠家:國家有色金屬及電子材料分析測試中心);甲硝唑片［遠大醫(yī)藥(中國)有限公司，批號:121261、121245、130125，規(guī)格 0.2 g/片］。

1.2 方法 ①標準亞硝酸根儲備液和樣品溶液的制備:精密量取標準亞硝酸根溶液1 ml，置100 ml量瓶中，加水稀釋至刻度，作為標準亞硝酸根儲備液。取甲硝唑片［遠大醫(yī)藥(中國)有限公司，批號:121261］10片，置100 ml量瓶中，加水適量，超聲處理15 min，加水至刻度，搖勻，精密量取10 ml置25 ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，用0.2 μm微孔濾膜濾過，作為樣品溶液。②色譜條件:IonpacAS11-HC型分離柱(4×250 mm)(載體為大孔乙基乙烯苯和2-乙烯苯的聚合物，直徑9.0 μm，孔徑2000埃，功能基團為烷醇季胺，膠聯(lián)度55，柱容量高為290 μm/柱);柱溫:30℃;淋洗液:氫氧化鉀溶液(20 mmol/L);流速1.10 ml/min電導檢測法檢測(電導池有效容積:1 μl，信號范圍:0 ～ 500 μS，溫度:室溫);進樣體積:100 μl。③系統(tǒng)實用性:精密量取標準亞硝酸根儲備液2 ml置100 ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為亞硝酸根對照溶液;取亞硝酸根對照溶液和樣品溶液按②項下色譜條件分別進樣，結果繪制圖譜。④線性關系:精密量取標準亞硝酸根溶液0.1、1、2、3、4 及5 ml分別置100 ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，取溶液按②項下色譜條件分別進樣，以亞硝酸根峰面積(A)與亞硝酸根進樣量(C)作回歸曲線。⑤精密度試驗:精密量取標準亞硝酸根儲備液2 ml置100 ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，取溶液按②項下色譜條件重復進樣5次，以亞硝酸根色譜峰面積計算。⑥重復性試驗:取甲硝唑片［遠大醫(yī)藥(中國)有限公司，批號:121261］50片，分置5個100 ml量瓶(每個量瓶中10片)中，分別照①項下樣品溶液的制備方法制成樣品溶液;取樣品溶液按②項下色譜條件分別進樣，以亞硝酸根色譜峰面積計算。⑦最低檢出限和最低定量限:精密量取標準亞硝酸根儲備液0.2 ml，置100 ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為亞硝酸根對照溶液，用水做為空白溶液。取上述兩種溶液按②項下色譜條件進樣，以基線噪音計算最低檢出限和最低定量限。⑧穩(wěn)定性試驗:將樣品測定項下溶液放置0、2、4、8、12 h 后按②項下色譜條件分別進樣，按亞硝酸根色譜峰面積計算RSD。⑨加樣回收試驗:取甲硝唑片［遠大醫(yī)藥(中國)有限公司，批號121261，每1片含亞硝酸根2.015 μg］5片，分別置9個100 ml量瓶中，分別加標準亞硝酸根儲備液0.5、0.5、0.5、1、1 、1、1.5、1.5 和 1.5 ml，分別照①項下樣品溶液的制備方法制成樣品溶液;取樣品溶液按②項下色譜條件分別進樣，按線性回歸方程計算測得量。⑩樣品含量:分別取3個批次甲硝唑片［遠大醫(yī)藥(中國)有限公司，批號 121261、121245、130125］，分別置100 ml量瓶(每瓶10片)中，分別照①項下樣品溶液的制備方法制成樣品溶液，取樣品溶液按②項下色譜條件分別進樣，按線性回歸方程計算含量。

2 結果

2.1 系統(tǒng)實用性 樣品溶液色譜圖中在亞硝酸根對照溶液色譜圖相同保留時間位置有相應的色譜峰，亞硝酸根色譜峰與其他相鄰色譜峰有較好的分離度，分離度大于2.5，理論塔板數(shù)按亞硝酸根色譜峰計算大于3000，見圖1。

圖1 離子色譜圖 a.對照品 b.樣品 1.亞硝酸根色譜峰

2.2 線性關系 線性關系回歸曲線:A=4.4623C-0.00003，r=0.9999，n=6。結果表明，亞硝酸根進樣量在0.001～0.05 μg呈良好的線性關系。

2.3 精密度 精密度試驗結果亞硝酸根平均峰面積為0.08923，RSD為0.5%。

2.4 重復性 重復性試驗結果亞硝酸根平均峰面積為0.036，RSD為0.8%。

2.5 最低檢出限和最低定量限 結果空白溶液色譜圖中未見色譜峰，基線噪音0.001 μS;亞硝酸根色譜峰峰高為0.0425 μS。按3倍噪音比計算，最低檢出限每1 ml被測定溶液中含亞硝酸根0.0014 μg。按10倍噪音比計算，最低定量線為每1 ml被測定溶液中含亞硝酸根0.0046 μg。

2.6 穩(wěn)定性 穩(wěn)定性試驗結果亞硝酸根色譜峰面積變化不大，RSD為0.7%。

2.7 加樣回收試驗結果 平均99.0%，RSD0.3%，見表1。

表1 亞硝酸根加樣回收試驗結果

2.8 樣品含量 測定結果見表2。

表2 3批樣品含量測定結果

3 討論

①該實驗方法結果準確、方便、快速、測定溶液穩(wěn)定，適用于甲硝唑片中亞硝酸根的定量分析。②檢測亞硝酸根可選擇安倍檢測器、紫外檢測器、電導檢測器。安倍檢測器雖然專屬性較強，但峰面積重現(xiàn)性較差;紫外檢測器在檢測亞硝酸根需要衍生顯色后測定，方法繁瑣，影響因素較多，且該方法檢測靈敏度低;電導檢測器對常見陰離子均有響應，靈敏度高，可測定樣品中痕量的亞硝酸根。③使用電導檢測器時，淋洗液有很高的檢測信號，抑制器可降低淋洗液的背景電導，增加被測定離子的電導值。④由于甲硝唑片中其他成分影響，為了達到符合測定要求的色譜條件，實驗中采用了稀釋樣品到較低濃度的方法。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部)［M］.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:153-154.

［2］何金奎，王丹丹.亞硝酸鹽中毒臨床分析［J］.中國社區(qū)醫(yī)師:2013，15(1):176.

［3］李良，王晴，江勇，等.離子色譜法同時測定奶粉中亞硝酸根、硝酸根、氯離子和磷酸跟［J］.理化檢驗-化學分冊，2007，43(10):836-837.

［4］張磊，劉肖，趙云峰，等.離子色譜法測定食品中硝酸鹽和亞硝酸鹽［J］.中國食品衛(wèi)生雜志，2008，20(4):294-295.