許經(jīng)良，萬 寧，巨 佳，荊自偉，賈奕揚(yáng)，周四元，張邦樂（第四軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)院，西安 710032）

脂質(zhì)體具有類似生物膜的結(jié)構(gòu)，作為遞藥載體在藥物治療中發(fā)揮著越來越重要的作用，已成為國內(nèi)外新制劑技術(shù)研究的熱點(diǎn)。將藥物裝載于脂質(zhì)體后，可降低藥物毒性、提高藥物穩(wěn)定性，具有靶向性、緩釋性、組織相容性等特點(diǎn)［1－3］。普通脂質(zhì)體利用其粒徑特點(diǎn)及其在體內(nèi)的自然分布可濃集于特定組織器官，是一種被動(dòng)靶向給藥系統(tǒng)，存在對(duì)體內(nèi)有些組織的靶向性不理想、選擇性差、毒副作用強(qiáng)等缺點(diǎn)，也限制了其進(jìn)一步的臨床應(yīng)用［4］。為了克服普通脂質(zhì)體的局限性，醫(yī)藥學(xué)家致力于對(duì)脂質(zhì)體中脂質(zhì)材料進(jìn)行適當(dāng)修飾，在脂質(zhì)材料上連接特定識(shí)別配體（靶向基團(tuán)）［5－14］，通過配體分子特異性地與靶部位表面的互補(bǔ)分子相互作用，使脂質(zhì)體在靶區(qū)定位聚集后釋放藥物。因此，開發(fā)用于靶向脂質(zhì)體的新型脂質(zhì)材料是構(gòu)建靶向治療載體的關(guān)鍵，對(duì)進(jìn)行有效的藥物治療具有重要意義。

作者在分析靶向脂質(zhì)材料的研究現(xiàn)狀和課題組前期研究工作的基礎(chǔ)上，將天然脂質(zhì)材料膽固醇與乳糖酸或α－亞麻酸綴合［8－14］，以廉價(jià)易得的膽固醇（4）為起始原料，以6－氨基－1－己醇（1）為連接臂，合成中間體膽甾－5－烯－3β－6′－氨基己基醚（7）。在中間體膽甾－5－烯－3β－6′－氨基己基醚的基礎(chǔ)上，通過與乳糖酸或α－亞麻酸進(jìn)行縮合反應(yīng)，在膽固醇結(jié)構(gòu)中引入半乳糖殘基和α－亞麻酸殘基兩類不同的主動(dòng)靶向基團(tuán)，設(shè)計(jì)合成兩類新型的脂質(zhì)材料Ia－b，以達(dá)到肝靶向和腫瘤靶向的目的，為靶向脂質(zhì)體的制備提供載體材料。具體工藝路線如圖1所示。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 X－4數(shù)字顯示顯微熔點(diǎn)測定儀；FTIR－8400S紅外光譜儀；AC200核磁共振儀（CDCl3為溶劑，TMS為內(nèi)標(biāo)）；Waters Quatro－premier串聯(lián)四級(jí)桿質(zhì)譜儀。

1.2 試藥 膽固醇（德國 Merck公司，生物純）；對(duì)甲基苯磺酰氯（TsCl，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，化學(xué)純）；α－亞麻酸（美國Sigma公司，化學(xué)純）；乳糖酸（美國Sigma公司，化學(xué)純）；N－羥基丁二酰亞胺（NHS，百靈威化學(xué)技術(shù)有限公司，化學(xué)純）；二環(huán)己基碳二亞胺（DCC，成都御河化工廠，化學(xué)純）；6－氨基－1－己醇（百靈威化學(xué)技術(shù)有限公司，化學(xué)純）；三氟乙酸乙酯（南京天尊公司，工業(yè)純）；4－二甲氨基吡啶（DMAP，上海延長生化公司，分析純）；其他試劑為市售化學(xué)純。

2 方法

2.1 膽甾－5－烯－3β－6′－氨基己基醚（7）的制備

2.1.1 6－三氟乙酰胺基己醇（3）的合成 將13.19g（112.6mmol）6－氨基－1－己醇（1）溶解于100mL二氯甲烷中，攪拌下緩慢滴加18.42g（129.7mmol）三氟乙酸乙酯（2），室溫?cái)嚢?h后減壓蒸除溶劑，4℃放置過夜，得雪花狀白色固體24.8g，未經(jīng)純化直接用于下步反應(yīng)。收率99%。熔點(diǎn)：44～46℃。

圖1 基于膽固醇的主動(dòng)靶向脂質(zhì)材料的合成路線Fig.1 Synthetic route of the targeting lipid materials based on cholesterol

2.1.2 膽甾－5－烯－3β－對(duì)甲苯磺酸酯（5）的合成 將18.92g（48.93mmol）膽固醇（4）溶解于19mL吡啶和48mL三氯甲烷的混合溶液中，加入45.3mg（0.37mmol）的 DMAP，冰浴條件下緩慢加入14.52g（76.16mmol）的對(duì)甲基苯磺酰氯，室溫下攪拌24h，將反應(yīng)混合物減壓蒸除溶劑；再用300mL三氯甲烷和100mL水萃取，有機(jī)相用100mL 1mol·L－1鹽酸水溶液洗滌1次，再水洗3次，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥；減壓蒸除溶劑后用丙酮重結(jié)晶得到白色固體17.8g。收率67%。熔點(diǎn)：133～134℃。

2.1.3 膽甾－5－烯－3β－6′－三氟乙酰胺基己基醚（6）的合成 將17.8g（32.91mmol）膽甾－5－烯－3β－對(duì)甲苯磺酸酯（5）與8.42g（39.49mmol）6－三氟乙酰胺基己醇（3）溶于30mL的二氧六環(huán)中，氮?dú)獗Ｗo(hù)下回流24h；停止反應(yīng)，冷卻，抽濾，濾液減壓蒸除溶劑；殘余物加入200mL乙酸乙酯溶解，用50mL×3水洗滌，有機(jī)相加入無水硫酸鈉干燥；產(chǎn)物經(jīng)柱層析分離純化得5.40g淡黃色固體。收率28%。熔點(diǎn)：77～78℃。

2.1.4 膽甾－5－烯－3β－6′－氨基己基醚（7）的合成 將3.00g（5.15mmol）膽甾－5－烯－3β－6′－三氟乙酰胺基己基醚（6）溶于60mL甲醇中，加入7.11g（51.5mmol）碳酸鉀，加熱回流24h后停止反應(yīng)；將反應(yīng)液溶劑旋干后用200mL氯仿溶解，移入分液漏斗中，用100mL水洗滌，分液后有機(jī)相再用水洗至中性，加無水硫酸鈉干燥。產(chǎn)物經(jīng)柱層析分離純化得淡黃色固體2.07g。收率83%。熔點(diǎn)：73～74℃。

2.2 膽甾－5－烯－3β－6′－乳糖酰胺基己基醚（Ia）的制備

2.2.1 乳糖酸內(nèi)酯（8）的合成 參考文獻(xiàn)方法［15］合成。1.79g（5.00mmol）乳糖酸溶解于30mL甲醇中，冰浴條件下滴加濃硫酸1～2滴，回流24h后減壓旋干反應(yīng)液，用甲醇－乙醚（1∶2）體系沉淀，烘干得白色固體1.19g。熔點(diǎn)：48～49℃。

2.2.2 膽甾－5－烯－3β－6′－乳糖酰胺基己基醚（Ia）的合成 取乳糖酸內(nèi)酯413mg（1.21mmol）溶解于6mL甲醇中，向其中加入膽甾－5－烯－3β－6′－氨基己基醚（7）200mg（0.412mmol），攪拌回流24h后旋干反應(yīng)液。產(chǎn)物經(jīng)柱分離純化（洗脫劑氯仿－甲醇＝10∶1）得到白色固體54mg。收率16%，熔點(diǎn)70～72℃。

2.3 膽甾－5－烯－3β－6′－α－亞麻酰胺基己基醚（Ib）的制備 稱取α－亞麻酸110mg（395.1μmol）溶于5mL二氯甲烷，冰浴條件下加入92mg DCC和5.1mg DMAP，0.5h后移至室溫下，加入192mg（395.1μmol）膽甾－5－烯－3β－6′－氨基己基醚（7），避光攪拌反應(yīng)24h；旋干反應(yīng)液，柱層析分離純化（洗脫劑石油醚－乙酸乙酯＝15∶1），得到油狀物76mg，產(chǎn)率26%。

3 結(jié)果與討論

3.1 中間體膽甾－5－烯－3β－6′－氨基己基醚（7）的合成與表征

3.1.1 6－三氟乙酰胺基己醇（3）的合成與表征 參照文獻(xiàn)方法［16］進(jìn)行合成。MS得到的準(zhǔn)分子離子峰為m／z＝214［M＋H］＋。IR（KBr）：3 566，3 310，2 939，1 705，1 636，1 558，1 159cm－1。

3.1.2 膽甾－5－烯－3β－對(duì)甲苯磺酸酯（5）的合成與表征 參考文獻(xiàn)方法［17］進(jìn)行合成。反應(yīng)后采用重結(jié)晶的方法進(jìn)行純化。MS得到的準(zhǔn)分子離子峰為m／z＝542［M＋H］＋。IR（KBr）：2 948，1 356，1 190，861，814cm－1。

3.1.3 膽甾－5－烯－3β－6′－三氟乙酰胺基己基醚（6）的合成與表征 參考文獻(xiàn)方法［16］進(jìn)行合成，實(shí)驗(yàn)過程稍作改進(jìn)。后處理時(shí)先抽濾除去不溶性對(duì)甲苯磺酸再萃取比直接萃取效果要好，粗產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱層析分離可得目標(biāo)產(chǎn)物。MS得到的準(zhǔn)分子離子峰為m／z＝582［M－H］－。IR（KBr）：2 935，1 709，1 631，1 558，1 465，1 339，1 178，1 107cm－1。

3.1.4 膽甾－5－烯－3β－6′－氨基己基醚（7）的合成與表征 參照文獻(xiàn)方法［16］進(jìn)行反應(yīng)。通過柱層析純化得目標(biāo)產(chǎn)物。MS得到的準(zhǔn)分子離子峰為m／z＝487［M＋H］＋。IR（KBr）：3 409，3 000，1 377，1 109，750cm－1。經(jīng)質(zhì)譜、紅外鑒定，所得產(chǎn)物與目標(biāo)中間體結(jié)構(gòu)一致，可用于后續(xù)反應(yīng)。

3.2 脂質(zhì)材料Ia－b的合成與表征

3.2.1 膽甾－5－烯－3β－6′－乳糖酰胺基己基醚（Ia）的合成與表征 在選擇活化乳糖酸羧基時(shí)，采取了DCCDMAP、DCC－DMAP－NHS成活性酯和形成乳糖酸內(nèi)酯3種方法。但DCC－DMAP直接活化、NHS活性酯與膽甾－5－烯－3β－6′－氨基己基醚反應(yīng)時(shí)均未能順利生成目標(biāo)產(chǎn)物，而改用形成內(nèi)酯的方法則可順利地得到所需目標(biāo)產(chǎn)物。MS得到的準(zhǔn)分子離子峰為m／z＝827［M＋H］＋。IR（KRr）：3 383，3 447，1 630，1 107，770cm－1。1H NMR（CDCl3）：δ7.32（1H，m），5.34（1H，s，br），3.82～3.72（5H，m），3.45～3.43（2H，m），3.23（1H，m），3.14～2.98（4H，m），2.35～2.32（2H，m），2.19～2.14（2H，m），2.02～1.99（6H，m），1.71（2H，m），1.50～1.38（22H，m），1.06～1.05（11H，m），0.92～0.86（9H，m），0.67（3H，s）。經(jīng)質(zhì)譜、紅外、核磁共振鑒定，所得產(chǎn)物與目標(biāo)物結(jié)構(gòu)一致。

3.2.2 膽甾－5－烯－3β－6′－α－亞麻酰胺基己基醚（Ib）的合成與表征 采用DCC－DMAP直接活化α－亞麻酸的羧基，與膽甾－5－烯－3β－6′－氨基己基醚（7）進(jìn)行縮合反應(yīng)后可順利得到目標(biāo)產(chǎn)物。柱層析純化產(chǎn)物進(jìn)行檢測，MS得到的準(zhǔn)分子離子峰為m／z＝747［M＋H］＋。1H NMR（CDCl3）：δ7.00（1H，m），5.35（1 H，d，J＝6.4Hz），4.32～4.28（2H，t，J＝6.8 Hz），3.91～3.67（6H，m），2.39～2.38（7H，m），2.07～2.04（2H，m），1.96～1.94（8H，m），1.82～1.78（4H，m），1.62（12H，m），1.46～1.23（26 H，m），0.92～0.86（9H，m），0.68～0.65（9H，m）。經(jīng)質(zhì)譜、紅外、核磁共振鑒定，所得產(chǎn)物與目標(biāo)物結(jié)構(gòu)一致。

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