周洪興，趙文杰，張 平，孫穎昕，白 陽(yáng)，陳 磊，王 碩，周 韓，徐 哲（南京醫(yī)科大學(xué)附屬常州市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇常州 213003）

隨著各種介入性診療手段的應(yīng)用以及大量廣譜抗菌藥物的使用，臨床條件致病菌的感染率逐年增加。在各種條件致病菌所致感染性疾病中，泌尿系統(tǒng)感染占有重要地位［1］，且以革蘭陰性菌感染為主［2－4］。筆者對(duì)臨床藥敏試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行了分析，發(fā)現(xiàn)多藥耐藥革蘭陰性菌在臨床常見(jiàn)致病菌中的所占比例較大。因此，及時(shí)監(jiān)測(cè)革蘭陰性菌感染并在感染初期采取措施以控制感染顯得非常重要。常規(guī)尿液病原菌培養(yǎng)檢測(cè)耗時(shí)長(zhǎng)，且操作繁瑣，靈敏度也較低，無(wú)法用于易感患者的篩查。為此筆者根據(jù)革蘭陰性菌的特點(diǎn)，采用尿液內(nèi)毒素定量檢測(cè)的方法對(duì)易感患者進(jìn)行革蘭陰性菌感染的篩查，旨在探討尿液內(nèi)毒素定量檢測(cè)在革蘭陰性菌感染診斷中的應(yīng)用價(jià)值，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1．1 一般資料 本院2012年各病區(qū)送檢的尿液培養(yǎng)標(biāo)本100份，其中重癥監(jiān)護(hù)病房（ICU）標(biāo)本18份、腫瘤科標(biāo)本15份、呼吸科標(biāo)本16份、泌尿科標(biāo)本22份、婦科標(biāo)本10份、燒傷科標(biāo)本5份、其他病區(qū)標(biāo)本14份。

1．2 儀器與試劑 PhoenixTM－100全自動(dòng)細(xì)菌鑒定藥敏系統(tǒng)購(gòu)自美國(guó)BD公司；BET－24A內(nèi)毒素檢測(cè)儀購(gòu)自天津天大天發(fā)科技有限公司；鱟試劑動(dòng)態(tài)濁度法內(nèi)毒素檢測(cè)試劑盒及配套質(zhì)控品、校準(zhǔn)品購(gòu)自湛江博康海洋生物公司。各批次質(zhì)控品檢測(cè)結(jié)果均在控制范圍內(nèi)。

1．3 方法

1．3．1 尿液細(xì)菌培養(yǎng) 采用無(wú)菌移液器吸取尿液標(biāo)本20μL接種血平板，37℃培養(yǎng)18～24h，將可疑菌落接種至血平板進(jìn)行純培養(yǎng)，之后挑取1～3個(gè)菌落至2mL無(wú)菌生理鹽水中，校正濁度至0．5麥?zhǔn)媳葷岫龋缓蠼臃N至鑒定藥敏板，上機(jī)進(jìn)行細(xì)菌鑒定。以病原菌濃度不低于105CFU／mL作為尿液細(xì)菌培養(yǎng)陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)。

1．3．2 內(nèi)毒素測(cè)定 按內(nèi)毒素檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書的要求處理標(biāo)本后采用內(nèi)毒素檢測(cè)儀進(jìn)行內(nèi)毒素水平檢測(cè)，操作嚴(yán)格按照儀器說(shuō)明書進(jìn)行。

1．4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS13．0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料以中位數(shù)（下四分位數(shù)，上四分位數(shù)），即M（P25，P75）表示，組間比較采用 Kruskall－Wallis H 檢驗(yàn)，若比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，再采用Mann－Whitney U檢驗(yàn)進(jìn)行組間兩兩比較。內(nèi)毒素定量檢測(cè)對(duì)泌尿系統(tǒng)革蘭陰性菌感染的診斷效能分析采用受試者工作特征曲線（ROC曲線）。不同方法檢測(cè)結(jié)果的一致性分析采用Kappa檢驗(yàn)。顯著性檢驗(yàn)水準(zhǔn)α＝0．05，P＜0．05為比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2．1 含有不同致病菌的尿標(biāo)本內(nèi)毒素檢測(cè)結(jié)果比較 100份送檢尿標(biāo)本中，細(xì)菌培養(yǎng)陽(yáng)性36例，其中革蘭陰性菌陽(yáng)性18例，占50．0%，革蘭陽(yáng)性菌陽(yáng)性13例，占36．1%，真菌陽(yáng)性5例，占13．9%。含有不同致病菌的尿標(biāo)本內(nèi)毒素檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 含有不同致病菌的尿標(biāo)本內(nèi)毒素水平

2．2 內(nèi)毒素對(duì)泌尿系統(tǒng)革蘭陰性菌感染的診斷效能分析 經(jīng)ROC曲線分析可知，尿液內(nèi)毒素檢測(cè)診斷泌尿系統(tǒng)革蘭陰性菌感染的cut－off值為71．9EU／L時(shí)，其對(duì)革蘭陰性菌感染的診斷靈敏度為88．9%、特異度為85．4%、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為57．1%、陰性預(yù)測(cè)值為97．2%。Kappa分析顯示，細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果與內(nèi)毒素檢測(cè)結(jié)果的Kappa值為0．61，可以認(rèn)為兩種方法檢測(cè)結(jié)果的一致性好，見(jiàn)表2。

表2 內(nèi)毒素檢測(cè)結(jié)果與細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果一致性分析（n）

2．3 患者隨訪結(jié)果分析 尿液培養(yǎng)確診革蘭陰性菌感染患者18例，經(jīng)抗菌藥物治療1周后，有15例患者自覺(jué)癥狀顯著改善。尿液內(nèi)毒素定量檢測(cè)結(jié)果顯示，該15例患者尿液內(nèi)毒素水平均值為42．6EU／L，與治療前檢測(cè)結(jié)果比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（U＝77．0，P＜0．05）。

3 討 論

有調(diào)查研究顯示，泌尿系統(tǒng)感染約占感染性疾病的20%～30%［1－2］。目前，尿液細(xì)菌培養(yǎng)仍為診斷泌尿系統(tǒng)感染的金標(biāo)準(zhǔn)。然而，細(xì)菌培養(yǎng)檢測(cè)周期長(zhǎng)，且在標(biāo)本留取、轉(zhuǎn)運(yùn)、接收等環(huán)節(jié)存在較多的不確定因素，易造成雜菌污染而對(duì)檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生影響，導(dǎo)致尿液細(xì)菌培養(yǎng)檢測(cè)無(wú)法實(shí)現(xiàn)泌尿系統(tǒng)感染的早期診斷，不利于疾病的及時(shí)治療。內(nèi)毒素是革蘭陰性菌細(xì)胞壁的重要成分，當(dāng)發(fā)生革蘭陰性菌感染時(shí)，患者血液內(nèi)毒素水平即可顯著升高［5－6］。目前國(guó)外已開(kāi)展了尿液內(nèi)毒素定量檢測(cè)，且研究表明尿液內(nèi)毒素水平與泌尿系統(tǒng)革蘭陰性菌感染患者的病情存在一定的相關(guān)性［7－10］。

本研究對(duì)尿液細(xì)菌培養(yǎng)檢測(cè)結(jié)果與尿液內(nèi)毒素定量檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行了比較，結(jié)果顯示，泌尿系統(tǒng)革蘭陰性菌感染患者尿液內(nèi)毒素水平顯著高于革蘭陽(yáng)性菌、真菌感染患者，且尿液內(nèi)毒素定量檢測(cè)對(duì)革蘭陰性菌感染的診斷靈敏度與特異度均符合臨床要求；一致性檢驗(yàn)結(jié)果亦顯示，尿液內(nèi)毒素定量檢測(cè)結(jié)果與尿液培養(yǎng)檢測(cè)結(jié)果的一致性較好。由此可見(jiàn)，就泌尿系統(tǒng)革蘭陰性菌感染診斷而言，尿液內(nèi)毒素檢測(cè)可以部分代替尿液細(xì)菌培養(yǎng)。與尿液細(xì)菌培養(yǎng)檢測(cè)相比，尿液內(nèi)毒素檢測(cè)具有檢測(cè)速度更快、操作更簡(jiǎn)便的優(yōu)勢(shì)，一般標(biāo)本送檢數(shù)小時(shí)后即可獲得檢測(cè)結(jié)果，適用于易感患者的篩查。與此同時(shí)，本研究結(jié)果顯示，經(jīng)過(guò)治療后，泌尿系統(tǒng)革蘭陰性菌感染患者的尿液內(nèi)毒素水平較治療前顯著下降，且下降幅度與患者的臨床癥狀緩解程度相一致。因此，尿液內(nèi)毒素定量檢測(cè)還可用于泌尿系統(tǒng)革蘭陰性菌感染患者的療效評(píng)價(jià)。

另一方面，尿液內(nèi)毒素檢測(cè)對(duì)標(biāo)本的要求也較嚴(yán)格，例如需要使用無(wú)熱源的留樣杯，在標(biāo)本留取、運(yùn)送、接收和檢測(cè)的各個(gè)環(huán)節(jié)均需嚴(yán)格進(jìn)行無(wú)菌操作。因此，尿液內(nèi)毒素定量檢測(cè)需要使用專用的留樣杯，且需要對(duì)從事標(biāo)本轉(zhuǎn)運(yùn)、接收的操作員進(jìn)行相關(guān)培訓(xùn)。有理由相信，隨著檢測(cè)技術(shù)的不斷發(fā)展，尿液內(nèi)毒素定量檢測(cè)的臨床應(yīng)用將逐漸普及。

［1］ 賴燕燕，谷海瀛，符惠群，等．226例泌尿系感染病原菌分布及耐藥性分析［J］．中國(guó)熱帶醫(yī)學(xué)，2004，4（4）：567－568．

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