龐偉斌，李 琴，趙鎖林，湯淑斌，王紅武（陜西省寶雞市婦幼保健院：．檢驗科；．兒科 7000）

肺炎鏈球菌是引起細菌性肺炎的主要病原菌。在發(fā)展中國家，每年有500萬5歲以下兒童死于肺炎鏈球菌感染引起的肺炎（肺炎鏈球菌肺炎）［1］。早期有效的抗菌藥物治療可明顯降低兒童肺炎鏈球菌肺炎的病死率。目前，實驗室主要以傳統(tǒng)的細菌培養(yǎng)法分離肺炎鏈球菌作為診斷肺炎鏈球菌肺炎的依據(jù)。然而，由于肺炎鏈球菌為苛養(yǎng)菌，培養(yǎng)營養(yǎng)條件要求高，生長所需時間長，鑒定程序繁瑣，且檢測陽性率較低，有研究報道其診斷肺炎鏈球菌肺炎的特異度為55%，靈敏度64%，不能滿足臨床快捷診斷的需要［2］。膠體金法是目前廣泛應(yīng)用于肺炎鏈球菌肺炎快速檢測的方法，通過檢測尿液中肺炎鏈球菌抗原（C多糖抗原）對肺炎鏈球菌肺炎進行診斷，具有較高的靈敏度和特異度。本研究通過檢測下呼吸道感染兒童尿標本中的肺炎鏈球菌抗原，以評價其在疾病臨床診斷中的應(yīng)用價值。

1 資料與方法

1．1 一般資料 2012年6～12月本院兒科收治的初診且未接受治療的下呼吸道感染患兒300例，男162例、女138例，年齡0～5歲，平均（2．37±0．58）歲；所有患兒均符合小兒下呼吸道感染診斷標準［2］。

1．2 試劑與儀器 血培養(yǎng)瓶和血培養(yǎng)儀采用美國BD公司產(chǎn)品；美國BINAX公司膠體金法肺炎鏈球菌抗原檢測試劑盒。

1．3 方法

1．3．1 痰標本檢測 留取吸引痰或自咳痰標本。留取痰標本前，囑患兒反復(fù)以清水漱口，用無菌痰杯收集患兒痰標本，立即送檢；在生物安全柜中將痰標本分別接種于血平板、麥康凱平板和巧克力平板，置37℃、5%二氧化碳孵育箱，連續(xù)培養(yǎng)12、24、48h后觀察結(jié)果。

1．3．2 外周血培養(yǎng) 無菌技術(shù)采集患兒靜脈外周血3～4 mL，注入 BACTEC PEDSPLUS／F培養(yǎng)瓶，置 BACTEC 9120血培養(yǎng)儀中自動培養(yǎng)與檢測，期間避免培養(yǎng)瓶通氣。血培養(yǎng)標本在血培養(yǎng)儀中培養(yǎng)至出現(xiàn)陽性報警，但最長培養(yǎng)時間不超過7d。所有陽性瓶均進行涂片鏡檢和傳代培養(yǎng)。如果涂片鏡檢為陰性結(jié)果，提示儀器培養(yǎng)陽性報警為假陽性，應(yīng)將相應(yīng)的培養(yǎng)瓶再次放入血培養(yǎng)儀中進行培養(yǎng)，直到傳代培養(yǎng)物生長或再次出現(xiàn)陽性報警。對于初次報警為假陽性，但出現(xiàn)第2次陽性報警的標本，應(yīng)進行第2次涂片和傳代培養(yǎng)。對培養(yǎng)儀培養(yǎng)7 d仍未出現(xiàn)陽性報警的標本，進行涂片鏡檢和（或）傳代培養(yǎng)，以排除假陰性結(jié)果。

1．3．3 尿標本檢測 采集患兒無菌中段尿標本，收集于無菌標準容器中，用于肺炎鏈球菌抗原檢測。檢測步驟及結(jié)果判讀嚴格參照BINAX檢測試劑說明書。

1．4 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS17．0統(tǒng)計學(xué)軟件進行數(shù)據(jù)分析；不同方法學(xué)檢測結(jié)果一致性分析采用Kappa檢驗；計數(shù)資料以百分率表示，組間比較采用卡方檢驗；P＜0．05為比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2．1 尿肺炎鏈球菌抗原與血培養(yǎng)檢測結(jié)果比較 尿肺炎鏈球菌抗原檢測陽性率為19．33%（58／300），58例尿肺炎鏈球菌抗原檢測陽性患兒中，血培養(yǎng)陽性39例，其中5例檢出的病原菌并非肺炎鏈球菌。血培養(yǎng)檢測陽性率為15．67%（47／300）。尿肺炎鏈球菌抗原檢測陽性率明顯高于血培養(yǎng)檢測（P＜0．05），但兩種方法檢測結(jié)果的一致性較強（K＝0．877，u＝19．38，P＜0．05）。以血培養(yǎng)檢測作為診斷兒童肺炎鏈球菌肺炎的臨床標準，計算尿肺炎鏈球菌抗原檢測診斷肺炎鏈球菌肺炎的靈敏度和特異度分別為82．98%（39／47）和92．49%（234／253）。血培養(yǎng)與尿肺炎鏈球菌抗原檢測結(jié)果見表1。

表1 血培養(yǎng)與尿肺炎鏈球菌抗原檢測結(jié)果（n）

2．2 尿肺炎鏈球菌抗原與痰培養(yǎng)檢測結(jié)果比較 痰培養(yǎng)檢測陽性率為10．33%（31／300），低于尿肺炎鏈球菌抗原檢測陽性率（P＜0．05），但兩種方法檢測結(jié)果的一致性較強（K＝0．767，u＝18．27，P＜0．05）。尿肺炎鏈球菌抗原與痰培養(yǎng)檢測結(jié)果見表2。

表2 尿肺炎鏈球菌抗原與痰培養(yǎng)檢測結(jié)果（n）

2．3 血培養(yǎng)與痰培養(yǎng)檢測結(jié)果比較 血培養(yǎng)檢測陽性率為15．67%（47／300），痰培養(yǎng)檢測陽性率為10．33%（31／300），血培養(yǎng)檢測陽性率明顯高于痰培養(yǎng)（P＜0．05），但兩種方法檢測結(jié)果的一致性較強（K＝0．796，u＝17．27，P＜0．05）。血培養(yǎng)與痰培養(yǎng)檢測結(jié)果見表3。

表3 血培養(yǎng)與痰培養(yǎng)檢測結(jié)果（n）

3 討 論

肺炎鏈球菌極易導(dǎo)致感染性疾病，尤其易導(dǎo)致兒童感染，是兒童社區(qū)獲得性肺炎、腦膜炎、鼻竇炎、敗血癥、中耳炎的主要病原菌［3－4］。世界衛(wèi)生組織2010年統(tǒng)計數(shù)據(jù)顯示，在發(fā)展中國家，每年有500萬5歲以下兒童死于肺炎鏈球菌肺炎，10～50萬兒童死于肺炎鏈球菌感染引起的腦膜炎。一項來自全球11個國家的報告數(shù)據(jù)顯示，2010年2～6月肺炎患兒臨床標本中肺炎鏈球菌檢出率僅為0．0%～6．7%［5］。肺炎鏈球菌肺炎的臨床診斷主要依據(jù)實驗室檢查、臨床癥狀、肺部X線片檢查和病史，而確診則必須依賴于呼吸道標本分離出病原菌。肺炎難以實現(xiàn)病原學(xué)確診，導(dǎo)致其病死率較高，一方面是受到目前診斷技術(shù)的限制，另一方面歸因于實驗室診斷結(jié)果報告延遲，導(dǎo)致病情未得到及時控制以及長期過度使用抗菌藥物導(dǎo)致的耐藥菌增加［6］。因此，建立快速、準確的兒童肺炎病原菌檢測方法極為重要。

目前，實驗室多以傳統(tǒng)細菌培養(yǎng)法分離出肺炎鏈球菌作為診斷肺炎鏈球菌肺炎的依據(jù)，如痰培養(yǎng)和血培養(yǎng)。然而，由于肺炎鏈球菌可產(chǎn)生自溶酶，且屬于苛養(yǎng)菌，對培養(yǎng)營養(yǎng)條件要求高，導(dǎo)致分離率不高［7］。全自動血液培養(yǎng)儀的應(yīng)用雖然提高了肺炎鏈球菌的檢測陽性率［2］，但分離、培養(yǎng)、鑒定步驟繁瑣，耗時長（需要2～3d），不能在最短的時間內(nèi)為臨床提供診斷依據(jù)［8－10］。本研究采用的膠體金法，主要檢測尿標本中肺炎鏈球菌特有的可溶性C多糖抗原，15min即可發(fā)出報告，檢測過程快速，國外文獻報道其診斷肺炎鏈球菌肺炎的靈敏度為86%、特異度為94%，可以彌補血、痰培養(yǎng)的局限性。膠體金法檢測尿抗原以尿標本作為檢測對象，在標本收集、儲存和運輸?shù)确矫婢哂休^大的優(yōu)勢，而且檢測結(jié)果不受接受抗菌藥物治療的影響，不僅能夠快速提供診斷依據(jù)，更在抗菌藥物使用方面具有指導(dǎo)意義，為診斷肺炎鏈球菌肺炎提供了快速、有效的輔助診斷方法。

本研究中，尿肺炎鏈球菌抗原檢測陽性率為19．33%，血培養(yǎng)檢測陽性率為15．67%，痰培養(yǎng)檢測陽性率為10．33%，尿肺炎鏈球菌抗原檢測陽性率高于痰培養(yǎng)及血培養(yǎng)，血培養(yǎng)檢測陽性率高于痰培養(yǎng)，且尿肺炎鏈球菌抗原檢測診斷肺炎鏈球菌肺炎的靈敏度和特異度分別達到了82．98%和92．49%，與國外文獻報道基本相符［11－12］。本研究結(jié)果顯示，相比傳統(tǒng)的肺炎鏈球菌肺炎病原學(xué)診斷方法，尿肺炎鏈球菌檢測陽性率高于傳統(tǒng)方法，且具有較高診斷靈敏度和特異度，檢測步驟簡便快捷，是行之有效的肺炎鏈球菌肺炎實驗室診斷方法。上述3種檢測方法中，痰培養(yǎng)檢測陽性率最低，一方面可能與部分患兒痰標本不合格有關(guān)，另一方面可能與肺炎鏈球菌生長條件較為苛刻有關(guān)。尿肺炎鏈球菌抗原檢測不受標本上述兩個因素的影響，若聯(lián)合血培養(yǎng)檢測，則可進一步提高肺炎鏈球菌的檢測陽性率。

綜上所述，相比傳統(tǒng)的痰、血培養(yǎng)檢測技術(shù)，尿肺炎鏈球菌抗原檢測在陽性率、診斷靈敏度和特異度方面均表現(xiàn)出一定的優(yōu)勢，是可用于診斷肺炎鏈球菌肺炎的快速、簡便、準確的檢測方法，值得臨床推廣應(yīng)用。

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