鄧琳瓊+趙菲菲+張以忠
摘要:用NBT光化還原法、Fenton反應(yīng)法、鉬酸銨顯色分光光度法對(duì)細(xì)野蕎莖、葉水提液清除羥基自由基(·OH)、超氧陰離子自由基( O-2· )、過氧化氫(H2O2)的能力進(jìn)行研究。結(jié)果表明:細(xì)野蕎莖、葉水提液對(duì)·OH的最高清除率分別為93.62%、76.63%,平均清除率分別68.38%、39.37%;細(xì)野蕎莖、葉水提液對(duì) O-2· 的最高清除率分別為98.45%、73.32%,平均清除率分別79.04%、48.25%;細(xì)野蕎莖、葉水提液對(duì)H2O2的清除作用相對(duì)較弱,最高清除率僅分別為31.44%、12.34%,平均清除率僅分別為20.19%、7.39%;且莖和葉對(duì)·OH、 O-2· 、H2O2的清除作用差異顯著。
關(guān)鍵詞:細(xì)野蕎;活性氧;·OH; O-2· ;H2O2
中圖分類號(hào):R284.1 文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A
文章編號(hào):1002-1302(2014)08-0298-03
活性氧(reactive oxygen species,ROS)是指生物體內(nèi)有氧代謝過程中或在外界物理、化學(xué)因素誘導(dǎo)下產(chǎn)生的含有氧原子且氧化能力很強(qiáng)的多種物質(zhì)總稱[1-3],主要有超氧陰離子自由基( O-2· )、羥基自由基(·OH)、過氧化氫(H2O2)等。它們?cè)谏顒?dòng)的代謝過程中不斷產(chǎn)生,與生物體衰老及許多疾病發(fā)生都有重要關(guān)系[4-9]?,F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究證明,衰老、癌癥、炎癥等疾病與體內(nèi)脂質(zhì)過氧化和自由基有直接關(guān)系,因此應(yīng)用抗氧化物質(zhì)來保持人體健康和預(yù)防疾病的研究越來越受到科學(xué)家關(guān)注[4,7,10]。蕎麥屬于蓼科(Polygonaceae)蕎麥屬(Fagopyrum),種植適應(yīng)性強(qiáng),屬于藥食兩用植物[11-12]。因蕎麥含有黃酮、蛋白質(zhì)、原花青素、膳食纖維等功效分子,具有降糖、抗缺血、抗氧化、抗菌、抗癌、助睡眠等保健功能[11,13]。目前,對(duì)蕎麥清除活性氧的研究較少,且主要集中在甜蕎(F. esculentum Moench)和苦蕎[F. tataricum(L.)Gaertn.]2個(gè)栽培種上。姚亞平等研究發(fā)現(xiàn),甜蕎和苦蕎的乙醇提取物對(duì)DPPH自由基和羥自由基均有顯著抗氧化作用,且呈劑量效應(yīng)關(guān)系[14]。何永艷等研究發(fā)現(xiàn),甜蕎和苦蕎的乙醇提取物均有較強(qiáng)的抗氧化活性和明顯的自由基清除效果[15]。而對(duì)野生蕎麥清除活性氧的研究還未見報(bào)道。本研究考察了野生蕎麥細(xì)野蕎[F. gracilipes (Hemsl) Dammer ex Diels]的莖、葉水提液對(duì)·OH、 O-2· 、H2O2等活性氧的清除作用,以期為蕎麥?zhǔn)称贰⒈=∑?、化妝品的開發(fā)利用提供理論依據(jù)。
1 材料與方法
1.1 材料
供試細(xì)野蕎于2012年7月采自貴州省畢節(jié)市七星關(guān)區(qū)鴨池鎮(zhèn)。
1.2 方法
1.2.1 樣品制備
取細(xì)野蕎植株的莖、葉,用蒸餾水洗凈,40 ℃ 下恒溫烘干至恒重,打粉,稱重。分別加干質(zhì)量40、45倍的蒸餾水,80 ℃、140 r/min振蕩1 h,過濾收集濾液,對(duì)殘?jiān)謩e再加25倍蒸餾水,80 ℃、140 r/min振蕩1 h,過濾收集濾液,合并2次濾液,即為細(xì)野蕎莖、葉的水提取液,莖、葉提取液濃度分別為80、61.5 g/L,將其儲(chǔ)存冰箱備用。
1.2.2 水提液對(duì)活性氧的清除試驗(yàn) 參照龔寧等的方法[16-17]并稍加改動(dòng),測(cè)定水提液對(duì)活性氧的清除效果。
1.2.2.1 細(xì)野蕎各器官水提液對(duì)·OH的清除試驗(yàn)
對(duì)樣品的莖、葉均設(shè)5個(gè)濃度梯度處理(0.094、0.188、0.282、0.376、0.470 g/L),分別測(cè)定各濃度梯度處理下的清除率。反應(yīng)體系總體積為3 mL,含pH值7.4的PBS 0.75 mL、2 mmol/L EDTA Na2-Fe(Ⅱ)1 mL、70 mg/L番紅花紅T 0.5 mL、不同濃度供試液0.25 mL、體積分?jǐn)?shù)0.33%的H2O2 0.5 mL。將其充分混勻,置于37 ℃恒溫水浴鍋中保溫 30 min,用723 N分光光度計(jì)于520 nm波長處測(cè)吸光度(D),加不同濃度供試液的體系吸光度為D樣品,以提取介質(zhì)代替供試液的體系吸光度為D空白,兩者均以未加EDTA Na2-Fe(Ⅱ)(用蒸餾水代替)作對(duì)照,各自與其對(duì)照之差分別記為ΔD樣品、ΔD空白。供試液對(duì)·OH的清除能力以清除率(E)表示:
點(diǎn)[15]。目前已在栽培蕎麥[12,14-15]、花葉開唇蘭[17]、南瓜[21]、少花龍葵[22]、葡萄[23]、拳參[24]、荔枝[25]等植物上進(jìn)行了相關(guān)研究,證明其提取物具有較強(qiáng)的清除活性氧作用,為尋找安全、清除活性氧的天然制劑提供了理論依據(jù)。
本研究首次對(duì)蕎麥屬野生蕎麥細(xì)野蕎不同器官清除活性氧(·OH、 O-2· 、H2O2)作用進(jìn)行研究,結(jié)果發(fā)現(xiàn),細(xì)野蕎莖、葉水提液對(duì)·OH、 O-2· 均具有較強(qiáng)的清除作用,最高清除率分別為93.62%、76.63%和73.32%、98.45%;而對(duì)H2O2的清除能力相對(duì)較低,最高清除率僅分別為31.44%、12.34%。另外,細(xì)野蕎不同器官水提液對(duì)自由基的清除能力不同。對(duì)于·OH和H2O2,細(xì)野蕎莖水提液的清除率均顯著高于葉;而對(duì)于 O-2· ,細(xì)野蕎葉水提液的清除率顯著高于莖。以往研究認(rèn)為,·OH、 O-2· 、H2O2等自由基中,·OH是對(duì)生物體毒性最強(qiáng)、危害最大的自由基,對(duì)·OH的清除率是反映藥物抗氧化作用的重要指標(biāo)[15,26],因此常用清除·OH的能力來評(píng)價(jià)一種物質(zhì)對(duì)自由基的清除效果。本研究中細(xì)野蕎莖、葉水提液對(duì)H2O2具有一定的清除作用,而對(duì)·OH和 O-2· 均具有較強(qiáng)的清除能力,表明細(xì)野蕎莖、葉對(duì)自由基具有很好的清除效果。endprint
細(xì)野蕎是蕎麥屬中一個(gè)野生種,廣泛分布于我國,作為一種潛在的天然抗氧化制劑原料,具有很大的開發(fā)應(yīng)用價(jià)值。本研究結(jié)果對(duì)于細(xì)野蕎在保健品、化妝品及其深加工等方面均有一定的理論和實(shí)際意義。
參考文獻(xiàn):
[1]楊 玲,許 速. 氧化應(yīng)激與疾病發(fā)生的相關(guān)性[J]. 西南國防醫(yī)藥,2012,22(11):1268-1270.
[2]Gill S S,Tuteja N. Reactive oxygen species and antioxidant machinery in abiotic stress tolerance in crop plants[J]. Plant Physiology and Biochemistry,2010,48(12):909-930.
[3]Chen Y,Azad M B,Gibson S B. Superoxide is the major reactive oxygen species regulating autophagy[J]. Cell Death and Differentiation,2009,16(7):1040-1052.
[4]方允中,鄭榮梁. 自由基生物學(xué)的理論與應(yīng)用[M]. 北京:科學(xué)出版社,2002:327-329.
[5]趙保路. 自由基、天然抗氧化劑與神經(jīng)退行性疾病[J]. 生物物理學(xué)報(bào),2010,26(4):263-274.
[6]Chen Y,Xie M Y,Nie S P,et al. Purification,composition analysis and antioxidant activity of a polysaccharide from the fruiting bodies of Ganoderma atrum[J]. Food Chemistry,2008,107(1):231-241.
[7]Ali S,Choudhary M I,Rahman A U. Superoxide anion radical,an important target for the discovery of antioxidants[J]. Atherosclerosis Supplements,2008,9(1):268.
[8]左 玉. 自由基、活性氧與疾病[J]. 糧食與油脂,2011(9):9-11.
[9]張獻(xiàn)忠,黃海智,鐘烈洲,等. 植物提取物體外抗氧化活性評(píng)價(jià)方法研究進(jìn)展[J]. 中國糧油學(xué)報(bào),2012,27(11):122-128.
[10]劉微微,任 虹,曹學(xué)麗,等. 天然產(chǎn)物抗氧化活性體外評(píng)價(jià)方法研究進(jìn)展[J]. 食品科學(xué),2010,31(17):415-419.
[11]張以忠,陳慶富. 蕎麥研究的現(xiàn)狀與展望[J]. 種子,2004,23(3):39-42.
[12]任順成,孫軍濤. 蕎麥粉、皮、芽中黃酮類化合物抗氧化研究[J]. 河南工業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版,2008,29(2):15-17,21.
[13]趙秀玲. 蕎麥的功效因子與保健功能的研究進(jìn)展[J]. 食品工程,2011(3):16-18.
[14]姚亞平,曹 煒,陳衛(wèi)軍,等. 不同品種蕎麥提取物抗氧化作用的研究[J]. 食品科學(xué),2006,27(11):49-52.
[15]何永艷,馮佰利,鄧 濤,等. 蕎麥提取物抗氧化活性研究[J]. 西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2007,16(6):76-79,84.
[16]龔 寧,鄧琳瓊,曾 坤. 金線蘭各器官水提液清除·OH和 O-2· 的比較研究[J]. 食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào),2010,29(6):821-824.
[17]龔 寧,鄧琳瓊,唐蘭秀,等. 花葉開唇蘭清除活性氧作用研究[J]. 中藥藥理與臨床,2006,22(2):39-41.
[18]孫存普,張建中,段紹謹(jǐn). 自由基生物學(xué)導(dǎo)論[M]. 合肥:中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)出版社,1999:1-15.
[19]Kaliora A C,Dedoussis G V. Natural antioxidant compounds in risk factors for CVD[J]. Pharmacological Research,2007,56(2):99-109.
[20]Valko M,Leibfritz D,Moncol J,et al. Free radicals and antioxidants in normal physiological functions and human disease[J]. The International Journal of Biochemistry & Cell Biology,2007,39(1):44-84.
[21]柳 紅,張 靜. 不同南瓜多糖體外清除羥基自由基作用的研究[J]. 武漢植物學(xué)研究,2007,25(4):356-359.
[22]賢景春,鄭鑫源,陳明真. 少花龍葵多酚超聲提取工藝及其抗氧化性研究[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2012,40(8):275-277.
[23]張澤生,李博軒,王 冀. 葡萄皮中花色苷的體外抗氧化研究[J]. 食品研究與開發(fā),2007,28(2):148-151.
[24]吳璐璐,許劍鋒,趙 勇. 拳參乙醇提取物和水提取物體外抗菌和抗氧化活性[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2013,41(5):246-249.
[25]熊何健,鄭建華,吳國宏,等. 荔枝多酚的分離制備及清除DPPH活性[J]. 食品科學(xué),2006,27(7):86-88.
[26]鐘希瓊,謝嘉虹,張英慧. 野生薯蕷膳食纖維的提取及對(duì)自由基的清除作用[J]. 糧油食品科技,2012,20(6):16-18.endprint
細(xì)野蕎是蕎麥屬中一個(gè)野生種,廣泛分布于我國,作為一種潛在的天然抗氧化制劑原料,具有很大的開發(fā)應(yīng)用價(jià)值。本研究結(jié)果對(duì)于細(xì)野蕎在保健品、化妝品及其深加工等方面均有一定的理論和實(shí)際意義。
參考文獻(xiàn):
[1]楊 玲,許 速. 氧化應(yīng)激與疾病發(fā)生的相關(guān)性[J]. 西南國防醫(yī)藥,2012,22(11):1268-1270.
[2]Gill S S,Tuteja N. Reactive oxygen species and antioxidant machinery in abiotic stress tolerance in crop plants[J]. Plant Physiology and Biochemistry,2010,48(12):909-930.
[3]Chen Y,Azad M B,Gibson S B. Superoxide is the major reactive oxygen species regulating autophagy[J]. Cell Death and Differentiation,2009,16(7):1040-1052.
[4]方允中,鄭榮梁. 自由基生物學(xué)的理論與應(yīng)用[M]. 北京:科學(xué)出版社,2002:327-329.
[5]趙保路. 自由基、天然抗氧化劑與神經(jīng)退行性疾病[J]. 生物物理學(xué)報(bào),2010,26(4):263-274.
[6]Chen Y,Xie M Y,Nie S P,et al. Purification,composition analysis and antioxidant activity of a polysaccharide from the fruiting bodies of Ganoderma atrum[J]. Food Chemistry,2008,107(1):231-241.
[7]Ali S,Choudhary M I,Rahman A U. Superoxide anion radical,an important target for the discovery of antioxidants[J]. Atherosclerosis Supplements,2008,9(1):268.
[8]左 玉. 自由基、活性氧與疾病[J]. 糧食與油脂,2011(9):9-11.
[9]張獻(xiàn)忠,黃海智,鐘烈洲,等. 植物提取物體外抗氧化活性評(píng)價(jià)方法研究進(jìn)展[J]. 中國糧油學(xué)報(bào),2012,27(11):122-128.
[10]劉微微,任 虹,曹學(xué)麗,等. 天然產(chǎn)物抗氧化活性體外評(píng)價(jià)方法研究進(jìn)展[J]. 食品科學(xué),2010,31(17):415-419.
[11]張以忠,陳慶富. 蕎麥研究的現(xiàn)狀與展望[J]. 種子,2004,23(3):39-42.
[12]任順成,孫軍濤. 蕎麥粉、皮、芽中黃酮類化合物抗氧化研究[J]. 河南工業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版,2008,29(2):15-17,21.
[13]趙秀玲. 蕎麥的功效因子與保健功能的研究進(jìn)展[J]. 食品工程,2011(3):16-18.
[14]姚亞平,曹 煒,陳衛(wèi)軍,等. 不同品種蕎麥提取物抗氧化作用的研究[J]. 食品科學(xué),2006,27(11):49-52.
[15]何永艷,馮佰利,鄧 濤,等. 蕎麥提取物抗氧化活性研究[J]. 西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2007,16(6):76-79,84.
[16]龔 寧,鄧琳瓊,曾 坤. 金線蘭各器官水提液清除·OH和 O-2· 的比較研究[J]. 食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào),2010,29(6):821-824.
[17]龔 寧,鄧琳瓊,唐蘭秀,等. 花葉開唇蘭清除活性氧作用研究[J]. 中藥藥理與臨床,2006,22(2):39-41.
[18]孫存普,張建中,段紹謹(jǐn). 自由基生物學(xué)導(dǎo)論[M]. 合肥:中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)出版社,1999:1-15.
[19]Kaliora A C,Dedoussis G V. Natural antioxidant compounds in risk factors for CVD[J]. Pharmacological Research,2007,56(2):99-109.
[20]Valko M,Leibfritz D,Moncol J,et al. Free radicals and antioxidants in normal physiological functions and human disease[J]. The International Journal of Biochemistry & Cell Biology,2007,39(1):44-84.
[21]柳 紅,張 靜. 不同南瓜多糖體外清除羥基自由基作用的研究[J]. 武漢植物學(xué)研究,2007,25(4):356-359.
[22]賢景春,鄭鑫源,陳明真. 少花龍葵多酚超聲提取工藝及其抗氧化性研究[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2012,40(8):275-277.
[23]張澤生,李博軒,王 冀. 葡萄皮中花色苷的體外抗氧化研究[J]. 食品研究與開發(fā),2007,28(2):148-151.
[24]吳璐璐,許劍鋒,趙 勇. 拳參乙醇提取物和水提取物體外抗菌和抗氧化活性[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2013,41(5):246-249.
[25]熊何健,鄭建華,吳國宏,等. 荔枝多酚的分離制備及清除DPPH活性[J]. 食品科學(xué),2006,27(7):86-88.
[26]鐘希瓊,謝嘉虹,張英慧. 野生薯蕷膳食纖維的提取及對(duì)自由基的清除作用[J]. 糧油食品科技,2012,20(6):16-18.endprint
細(xì)野蕎是蕎麥屬中一個(gè)野生種,廣泛分布于我國,作為一種潛在的天然抗氧化制劑原料,具有很大的開發(fā)應(yīng)用價(jià)值。本研究結(jié)果對(duì)于細(xì)野蕎在保健品、化妝品及其深加工等方面均有一定的理論和實(shí)際意義。
參考文獻(xiàn):
[1]楊 玲,許 速. 氧化應(yīng)激與疾病發(fā)生的相關(guān)性[J]. 西南國防醫(yī)藥,2012,22(11):1268-1270.
[2]Gill S S,Tuteja N. Reactive oxygen species and antioxidant machinery in abiotic stress tolerance in crop plants[J]. Plant Physiology and Biochemistry,2010,48(12):909-930.
[3]Chen Y,Azad M B,Gibson S B. Superoxide is the major reactive oxygen species regulating autophagy[J]. Cell Death and Differentiation,2009,16(7):1040-1052.
[4]方允中,鄭榮梁. 自由基生物學(xué)的理論與應(yīng)用[M]. 北京:科學(xué)出版社,2002:327-329.
[5]趙保路. 自由基、天然抗氧化劑與神經(jīng)退行性疾病[J]. 生物物理學(xué)報(bào),2010,26(4):263-274.
[6]Chen Y,Xie M Y,Nie S P,et al. Purification,composition analysis and antioxidant activity of a polysaccharide from the fruiting bodies of Ganoderma atrum[J]. Food Chemistry,2008,107(1):231-241.
[7]Ali S,Choudhary M I,Rahman A U. Superoxide anion radical,an important target for the discovery of antioxidants[J]. Atherosclerosis Supplements,2008,9(1):268.
[8]左 玉. 自由基、活性氧與疾病[J]. 糧食與油脂,2011(9):9-11.
[9]張獻(xiàn)忠,黃海智,鐘烈洲,等. 植物提取物體外抗氧化活性評(píng)價(jià)方法研究進(jìn)展[J]. 中國糧油學(xué)報(bào),2012,27(11):122-128.
[10]劉微微,任 虹,曹學(xué)麗,等. 天然產(chǎn)物抗氧化活性體外評(píng)價(jià)方法研究進(jìn)展[J]. 食品科學(xué),2010,31(17):415-419.
[11]張以忠,陳慶富. 蕎麥研究的現(xiàn)狀與展望[J]. 種子,2004,23(3):39-42.
[12]任順成,孫軍濤. 蕎麥粉、皮、芽中黃酮類化合物抗氧化研究[J]. 河南工業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版,2008,29(2):15-17,21.
[13]趙秀玲. 蕎麥的功效因子與保健功能的研究進(jìn)展[J]. 食品工程,2011(3):16-18.
[14]姚亞平,曹 煒,陳衛(wèi)軍,等. 不同品種蕎麥提取物抗氧化作用的研究[J]. 食品科學(xué),2006,27(11):49-52.
[15]何永艷,馮佰利,鄧 濤,等. 蕎麥提取物抗氧化活性研究[J]. 西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2007,16(6):76-79,84.
[16]龔 寧,鄧琳瓊,曾 坤. 金線蘭各器官水提液清除·OH和 O-2· 的比較研究[J]. 食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào),2010,29(6):821-824.
[17]龔 寧,鄧琳瓊,唐蘭秀,等. 花葉開唇蘭清除活性氧作用研究[J]. 中藥藥理與臨床,2006,22(2):39-41.
[18]孫存普,張建中,段紹謹(jǐn). 自由基生物學(xué)導(dǎo)論[M]. 合肥:中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)出版社,1999:1-15.
[19]Kaliora A C,Dedoussis G V. Natural antioxidant compounds in risk factors for CVD[J]. Pharmacological Research,2007,56(2):99-109.
[20]Valko M,Leibfritz D,Moncol J,et al. Free radicals and antioxidants in normal physiological functions and human disease[J]. The International Journal of Biochemistry & Cell Biology,2007,39(1):44-84.
[21]柳 紅,張 靜. 不同南瓜多糖體外清除羥基自由基作用的研究[J]. 武漢植物學(xué)研究,2007,25(4):356-359.
[22]賢景春,鄭鑫源,陳明真. 少花龍葵多酚超聲提取工藝及其抗氧化性研究[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2012,40(8):275-277.
[23]張澤生,李博軒,王 冀. 葡萄皮中花色苷的體外抗氧化研究[J]. 食品研究與開發(fā),2007,28(2):148-151.
[24]吳璐璐,許劍鋒,趙 勇. 拳參乙醇提取物和水提取物體外抗菌和抗氧化活性[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2013,41(5):246-249.
[25]熊何健,鄭建華,吳國宏,等. 荔枝多酚的分離制備及清除DPPH活性[J]. 食品科學(xué),2006,27(7):86-88.
[26]鐘希瓊,謝嘉虹,張英慧. 野生薯蕷膳食纖維的提取及對(duì)自由基的清除作用[J]. 糧油食品科技,2012,20(6):16-18.endprint