進口橙汁中殺菌劑殘留一直受到廣泛關注，需要建立簡單快速的分析方法。一家私人公司向FDA報警稱，從巴西進口的橙汁中含有殺菌劑即多菌靈。在美國果汁中含有該物質(zhì)是違法的，故該機構(gòu)擴大了對進口產(chǎn)品中殘留物的檢測。為了應對日益增加的關注，我們已經(jīng)建立了一種快速的、簡單的定量分析方法，該方法可以測定多菌靈濃度低至10ppb。

我們建立的方法既能夠檢測目標分析物如多菌靈，同時也可以檢測非目標的化合物，該方法依靠帶有UltrasprayTM 2離子源的AxION？ 2時間飛行（TOF）質(zhì)譜儀（MS）提供全范圍，高質(zhì)量精度的數(shù)據(jù)，該離子源在飛行校準過程中具有質(zhì)量鎖定功能。與三重四級桿儀器需要預先設定目標物不同，TOF可以通過不降低分析靈敏度的全范圍掃描方式采集精確質(zhì)量和高分辨率的數(shù)據(jù)，該數(shù)據(jù)可鑒定無限制數(shù)量化合物的結(jié)構(gòu)。任何感興趣的目標化合物可以通過簡單檢索該分析物的精確質(zhì)量而被檢測到，且通過保留時間的匹配度進行快速確認。利用一根表面多孔顆粒（SPP）的色譜柱，使得稀釋-上樣的樣品前處理方式成為可能同時可以保證分離度且縮短傳統(tǒng)UHPLC色譜柱的分析時間。

試驗

目標分析物：多靈菌；

液相色譜條件：

泵類柱：FlexarTM FX-15；

色譜柱：PerkinElmer BrownleeTM SPP，C-18（2.1mm*100mm，2.7μm）

流動相：A：含有5mM甲酸和5mM甲酸銨的水溶液；B： 含有5mM甲酸和5mM甲酸銨的甲醇溶液；

流速：0.3mL/min；梯度條件：

進樣體積：10μL

MS條件：

PERKINELMER AxION 2 TOF MS；離子源：UltraysprayTM 2 Dual ESI源；掃描范圍捕及脈沖模式：100～400mz（D7：66，D8：80）；

毛細管出口電壓：+90V；干燥器溫度和流速：350℃，12L/min；鎖定質(zhì)量校準流速和離子：35μL/min，利用m/z 322.04812和622.02896。

制備：

高分辨率和精確質(zhì)量的AxION 2 TOF MS及堅實的大顆粒SPP色譜柱實現(xiàn)了樣品制備的簡化。橙汁樣品用水稀釋10倍后離心，取上清液，用0.2μmPTFE針式過濾器過濾后直接注入樣瓶中。

結(jié)果

利用提供的快速RP-LC條件，實驗發(fā)現(xiàn)多菌靈的保留時間僅為2.2min，計算橙汁中多菌靈的檢出限為0.75ppb。

通過精確質(zhì)量、保留時間匹配度及同位素峰確定化合物結(jié)構(gòu)。根據(jù)計算多菌靈同位素的自然豐度，預期比例與測定比例相比較見圖1所示。

稀釋和分析之前，在橙汁樣品中加入多菌靈的標準品，從而獲得校準曲線。線性范圍在1ppb至300ppb范圍內(nèi)，相關系數(shù)大于0.996。

重點提出的是，在每次運行時具有精確的質(zhì)量和高分辨率的AxION 2 TOF MS可以采集大量的信息。圖2顯示，在不理想的色譜條件下，仍有大量數(shù)據(jù)被采集，且可以如何輕松獲得高質(zhì)量的分析結(jié)果。利用提取窄范圍m/z的特異性離子色譜圖如5mDa，可以使分析時間保持很短。

非目標分析物的鑒定

多菌靈被定量分析后，橙汁樣品的數(shù)據(jù)被進一步用于檢測非目標的分析物，即在美國桔子中常見的農(nóng)藥。下列幾種農(nóng)藥是桔子常常使用的，也是橙汁中經(jīng)常被檢出的：涕滅威，除草定，西維因，毒死蜱，樂果，抑霉唑，鄰苯基苯酚，噻菌靈。

通過簡單的再次分析數(shù)據(jù)，保留時間4.76min的色譜峰被鑒定。該峰的EIC提供了同位素比率的質(zhì)譜圖（見圖3），因此鑒定該峰為西維因。

高精確質(zhì)量及同位素信息可用于色譜峰的鑒定，通過運行相應的標準品以保留時間進行確證（見圖4）。

結(jié)論

本文建立了一個少于5min稀釋——上樣的LC-TOF方法，用于定量測定橙汁中的多菌靈。結(jié)果表明該方法快速、高效，樣品通量可與那些已公開的方法相媲美，甚至更優(yōu)。此外采集的數(shù)據(jù)被用于篩查8種其它當前最有可能在橙汁中存在的農(nóng)藥。通過精確質(zhì)量鑒定，與標準物質(zhì)保留時間匹配確證，發(fā)現(xiàn)在該橙汁樣品中存在西維因，從而展示出全掃描質(zhì)量分析儀的優(yōu)勢。endprint