譚小燕 李達(dá)斌 林中翔 黃 靜 賈 晗 王立青

1.重慶三峽醫(yī)藥高等專科學(xué)校，重慶 404020；2.重慶市巫溪縣人民醫(yī)院，重慶 405800；3.四川大學(xué)華西藥學(xué)院，四川成都 610041

野葛 Pueraria lobata （Willd.）Ohwi為豆科葛屬植物，莖葉可作飼料，根和花可入藥。野葛的干燥塊根為常見中藥，具有解肌退熱、生津止渴、透疹、升陽止瀉、通經(jīng)活絡(luò)、解酒毒的功能[1]。野葛根中富含的黃酮類成分具有多種藥理作用[2-5]，而葛粉又是很好的保健食品，暢銷國(guó)內(nèi)外[6-9]。野葛從根、藤到花、葉在工業(yè)、農(nóng)業(yè)、醫(yī)藥方面都有很高的研究利用價(jià)值。渝東北山區(qū)野葛資源豐富[10-11]，但從未被開發(fā)利用，因此本研究以渝東北山區(qū)的開縣城口巫溪交界地帶產(chǎn)野葛為樣本，采用組織搗碎水沉淀法和UV法測(cè)定一年中每月采收野葛根中葛粉和總黃酮含量，對(duì)含量動(dòng)態(tài)變化進(jìn)行分析，以期確定最佳采收時(shí)期，為該區(qū)野葛根的開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

METTLER TOLEDO PL1501-S電子秤 （梅特勒-托利多中國(guó)地區(qū)）、電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱DHG-9140A型（上海一恒科技有限公司）、高速中藥粉碎機(jī)HX-500A型（浙江省永康市溪岸五金藥具廠）、低速自動(dòng)離心機(jī) LD25-2、U-2800 分光光度計(jì)（UV2300）、特殊減壓抽濾裝置（四川大學(xué)華西藥學(xué)院天然藥物系自主設(shè)計(jì)）、水、95%乙醇（分析純）、葛根素對(duì)照品（批號(hào)：110753-200912，中國(guó)藥品生物制品檢定所）。

試驗(yàn)樣本采自重慶開縣譚家鄉(xiāng)。從2011年6月～2012年 5月，每月 9日（或前后 2日）選取生長(zhǎng)年限一致，粗細(xì)相近的野葛根采挖，然后洗凈泥沙，切成2～3 mm薄片，自然干燥。

1.2 方法

文獻(xiàn)報(bào)道一般利用組織搗碎水沉淀法[12]或酶解-蒽酮比色法[13]測(cè)定葛根中葛粉含量，而且酶解-蒽酮比色法是最常用的淀粉含量測(cè)定方法。但因本實(shí)驗(yàn)?zāi)康脑谟谕ㄟ^測(cè)定野葛中葛粉含量，從而確定野葛的最佳采集時(shí)間，再用于提取葛粉的工藝中，為與提取工藝相結(jié)合，故選取組織搗碎水沉淀法來測(cè)定葛粉含量。野葛中總黃酮的含量測(cè)定采用UV分光光度法[14-20]。

2 結(jié)果

2.1 野葛葛粉含量測(cè)定

將12份試驗(yàn)樣本各稱取1 kg，粉碎后過40目篩，將藥材用 1∶8倍量冷水（W/V）浸泡 1 h，然后物理攪拌，讓葛粉充分混入水液中，用紗布過濾，將濾渣加入7倍量水，攪拌均勻后再過濾，濾渣再重復(fù)清洗1遍，合并3次的濾液膠漿，再用細(xì)紗布過濾1遍，去除微粒雜質(zhì)。將葛粉漿液離心或放置沉降，待沉降完全（溶液變澄清）倒掉上清液，再加5倍量清水?dāng)噭蚋鸱?，再沉降，重?fù)3次后得葛粉，將其恒溫40℃減壓干燥葛粉。葛粉干燥后，用電子天平稱重。

根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果表明，1年12個(gè)月野葛葛粉含量從 11月～第 2年 2月最高，3、8～10月其次，4～7月最低，具體測(cè)定結(jié)果見表1。

表1 每月野葛葛粉含量表

2.2 野葛總黃酮含量測(cè)定

2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備 準(zhǔn)確稱取葛根素對(duì)照品0.0155 g，用70%乙醇溶解，于100 mL容量瓶中定容，得0.155 mg/mL濃度的葛根素對(duì)照品溶液。分別精密吸取該對(duì)照品溶液 0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL 于 10 mL 容量瓶中，加70%乙醇定容，得系列對(duì)照品溶液。用1.0 mL 70%乙醇溶液作空白對(duì)照，在250 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度。所得結(jié)果見表2和圖1。

表2 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備

圖1 對(duì)照品溶液標(biāo)準(zhǔn)曲線

根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線求回歸方程為A=74.288C+0.0091，r=0.9999。

2.2.2 供試樣品總黃酮含量測(cè)定 將每個(gè)月野葛樣本粉碎成粉末，分別精密稱取2 g置250 mL圓底燒瓶中，各加 70%乙醇 100 mL，稱量，恒溫 80℃回流 1.5 h，放冷，再稱量，并加70%乙醇補(bǔ)足減少重量，搖勻，濾過，用移液管精確量取濾液1 mL于25 mL容量瓶，加70%乙醇稀釋定容得待測(cè)液，用1.0 mL 70%乙醇溶液作空白對(duì)照，在250 nm波長(zhǎng)處連續(xù)3次測(cè)定吸收度，結(jié)果取3次之平均值，通過標(biāo)準(zhǔn)回歸方程即可計(jì)算出待測(cè)液濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，然后換算成總黃酮質(zhì)量，最后用質(zhì)量除以稱取的粉末重量可得該月野葛樣本的總黃酮含量。具體含量見表3，根據(jù)數(shù)據(jù)顯示11月～第 2年 3月總黃酮含量高于 9%，8～10月稍高，約6%，4～7月含量較低，在 2%左右。

2.3 全年野葛葛粉和總黃酮含量變化趨勢(shì)

根據(jù)“2.1”、“2.2”項(xiàng)下測(cè)定的一年中每月在渝東北山區(qū)采集野葛中葛粉和總黃酮含量結(jié)果 （即表1、表3中數(shù)據(jù)）制定葛粉和總黃酮含量隨時(shí)間變化的趨勢(shì)曲線圖，見圖2。

由圖2可見渝東北山區(qū)野葛的葛粉和總黃酮含量隨季節(jié)變化趨勢(shì)基本一致，從10月起開始呈含量上升趨勢(shì)，11月份達(dá)第一峰值，12月份略有下降，次年1月份達(dá)第二峰值，之后含量開始呈下降趨勢(shì)，到次年4月份含量降到最低，4～10月一直處于含量低水平時(shí)期?？傮w顯示在11月～次年3月期間葛粉和總黃酮含量都相對(duì)較高。

表3 野葛各月份總黃酮含量表

圖2 渝東北山區(qū)野葛葛時(shí)間粉與總黃酮含量隨時(shí)間變化曲線

3 討論

葛粉和總黃酮含量測(cè)定方法皆參考文獻(xiàn)報(bào)道并結(jié)合實(shí)際提取葛粉和總黃酮的工藝而確定，故未再做方法的穩(wěn)定性、重復(fù)性等考察。

根據(jù)圖2的渝東北山區(qū)野葛葛粉和總黃酮含量隨季節(jié)變化趨勢(shì)曲線顯示在11月～次年3月期間葛粉和總黃酮含量都相對(duì)較高。因此認(rèn)為最佳采集時(shí)間為11月～次年3月，采集時(shí)間段較長(zhǎng)，將有利于野葛的加工生產(chǎn)。

根據(jù)研究測(cè)定結(jié)果發(fā)現(xiàn)渝東北山區(qū)一帶所產(chǎn)野葛葛粉含量變化在8.9%～25.3%，總黃酮含量在2%～12%，總的來看，葛粉含量比粉葛類低，若利用其提取葛粉產(chǎn)率不及粉葛[21]，但總黃酮含量較高，異黃酮類成分豐富，藥用價(jià)值更高。如果能對(duì)該區(qū)野葛的葛粉和總黃酮進(jìn)行連續(xù)提取綜合利用，定能提高其利用價(jià)值和經(jīng)濟(jì)效益。此部分研究不但確定了該區(qū)野葛采收時(shí)間段，更為后續(xù)關(guān)于綜合連續(xù)提取野葛葛粉和總黃酮的工藝研究奠定了理論基礎(chǔ)。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典[S].一部.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：312-313.

[2]趙新芳，邊文貴，張俊卿.葛根素治療心血管疾病的藥理和臨床研究[J].陜西中醫(yī)，2006，27（8）：1018-1020.

[3]吳慧軒.葛根素注射液治療高血壓（肝陽上亢癥）臨床研究[J].天津中醫(yī)藥，2004，21（2）：15-17.

[4]秦文，董興兵，楊勤.葛根素的臨床應(yīng)用新進(jìn)展[J].中國(guó)藥業(yè)，2004，13（7）：75-76.

[5]王林麗，向明鳳.葛根及其制劑的藥理作用及臨床應(yīng)用[J].中國(guó)藥業(yè)，2004，13（8）：78-79.

[6]中國(guó)預(yù)防醫(yī)學(xué)科學(xué)院營(yíng)養(yǎng)與食品研究所.食物成分表[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1992：45.

[7]杜先鋒.葛根的開發(fā)研究和綜合利用[J].食品研究與開發(fā)，1998，（1）：49-50.

[8]毛富春，趙伯善.野生葛藤的研究利用現(xiàn)狀及其開發(fā)前景[J].西北林學(xué)院學(xué)報(bào)，1995，10（3）：88-92.

[9]邵蘭蘭，趙燕.葛根異黃酮、淀粉的提取及葛產(chǎn)品開發(fā)研究進(jìn)展[J].食品工業(yè)科技，2012，33（6）：452-455.

[10]《萬縣中草藥》編寫組.萬縣中草藥[M].萬縣：四川省萬縣地區(qū)衛(wèi)生局，四川省萬縣地區(qū)科委，內(nèi)部發(fā)行，1977：928-929.

[11]沈力.三峽中草藥資源[M].北京：中國(guó)中醫(yī)藥出版社，2012：445.

[12]陶家蘭，朱蕓初.關(guān)于甘薯干率-淀粉率測(cè)定方法的探討[J].浙江農(nóng)業(yè)科學(xué)，1988，（6）：296-299.

[13]田曉燕，王文芹.淀粉含量快速測(cè)定法的探討[J].發(fā)酵科技通訊，2004，33（2）：14-15.

[14]李青坡，王永圣，游劍，等.葛根總異黃酮提取工藝的研究[J].中國(guó)藥業(yè)，2004，13（5）：46-47.

[15]潘玲玲，任江劍.野葛葛根素積累動(dòng)態(tài)研究[J].中國(guó)現(xiàn)代中藥，2011，13（9）：15-17.

[16]范淑英，吳才君.野葛主要營(yíng)養(yǎng)和藥用成分的分析[J].江西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，1998，20（4）：460-462.

[17]勵(lì)娜，楊榮平，王賓豪，等.紫外分光光度法測(cè)定腫節(jié)風(fēng)不同部位總黃酮的含量[J].中國(guó)藥業(yè)，2010，19（21）：14-15.

[18]蘇本華，蘇春英.分光光度法測(cè)定蓮須中總黃酮的含量[J].中醫(yī)藥信息，2011，28（3）：81-82.

[19]曾明，張漢明.野葛中活性成分動(dòng)態(tài)研究[J].第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，1997，18（2）：150-152.

[20]楊榮平，王賓豪，張小梅，等.紫外分光光度法測(cè)定補(bǔ)骨脂中總黃酮含量[J].中國(guó)藥業(yè)，2007，16（1）：22-23.

[21]吳艷芳，王新勝.野葛與粉葛總黃酮提取方法的比較[J].中國(guó)現(xiàn)代中藥，2011，13（3）：38-39.