王逢春，王 敏，張瑞麟

0 引言

復(fù)方呋喃西林滴鼻液收載于2002年版《中國人民解放軍醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑規(guī)范》(下簡稱《規(guī)范》)，具有消炎、收縮血管的作用，主要用于急、慢性鼻炎，鼻竇炎等。按照《規(guī)范》質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，含量測定方法為分光光度法和旋光法，本品中鹽酸麻黃堿應(yīng)為標(biāo)示量的0.90% ～1.10%(g/mL)［1］。但在實際工作中，不同批號制劑中的鹽酸麻黃堿含量測定結(jié)果相差較大，考慮可能是制劑中其他物質(zhì)對鹽酸麻黃堿的紫外吸收有影響。本試驗采用高效液相色譜法測定復(fù)方呋喃西林滴鼻液中鹽酸麻黃堿的含量，可提高含量測定的準(zhǔn)確度，方法簡便快捷，為評價和控制復(fù)方呋喃西林滴鼻液的質(zhì)量提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent 1200型高效液相色譜儀(包括四元泵，VWD檢測器，自動進(jìn)樣器，ChemStation化學(xué)工作站);Mettler AE240電子天平(梅特勒公司)。

1.2 試藥 鹽酸麻黃堿對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號:171241-200506);復(fù)方呋喃西林滴鼻液(批號:130107、130108、130109)。甲醇為色譜純，水為重蒸餾水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱:Agilent Zorbax SB-C18(4.6 mm ×250 mm，5 μm);流動相:甲醇-0.05%磷酸(35∶65)(每100 mL加十二烷基磺酸鈉0.1 g);流速:1.0 mL/min;檢測波長:210 nm;柱溫:30℃。

2.2 對照品溶液的制備 精密稱取鹽酸麻黃堿對照品10.00 mg，置于10 mL量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度，即得對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備 精密量取復(fù)方呋喃西林滴鼻液供試品1 mL，置于100 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。精密吸取對照品溶液和供試品溶液分別注入液相色譜儀，測定，即得液相色譜圖，見圖1。

圖1 復(fù)方呋喃西林滴鼻液HPLC色譜圖

2.4 線性關(guān)系考察 精密量取混合對照品儲備液0.1、0.2、0.5、1.0、1.5、2.0mL，置于10mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得不同濃度的系列對照品溶液。按“2.1”項下色譜條件分別進(jìn)樣，測定峰面積。以鹽酸麻黃堿的濃度(μg/mL)為橫坐標(biāo)(X)，以其峰面積積分值為縱坐標(biāo)(Y)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得回歸方程為鹽酸麻黃堿Y=6.287 X+0.735 8(r=0.999 9，n=6)。結(jié)果表明，鹽酸麻黃堿在10.00～200.0 μg/mL范圍內(nèi)與其峰面積線性關(guān)系良好。

2.5 精密度試驗 精密吸取100.0 μg/mL混合對照品溶液，按“2.1”項下色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6次，測定峰面積。結(jié)果鹽酸麻黃堿峰面積RSD為0.33%(n=6)，表明儀器的精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗 取批號為130107的供試品溶液，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件，分別在0、2、4、8、10、12 h 各進(jìn)樣1 次，測定峰面積。結(jié)果鹽酸麻黃堿峰面積的RSD為0.75%(n=6)，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7 重復(fù)性試驗 取批號為130107的樣品6份，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件，分別進(jìn)樣測定。結(jié)果鹽酸麻黃堿的平均含量為0.96%，RSD為0.26%(n=6)，表明方法的重復(fù)性良好。

2.8 回收率試驗 精密量取鹽酸麻黃堿對照品，按復(fù)方呋喃西林滴鼻液處方配成80、100、120 μg/mL等3個濃度水平的樣品溶液，每個濃度各分別制備3份供試品溶液，分別進(jìn)樣測定，記錄峰面積，計算鹽酸麻黃堿的含量回收率，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗結(jié)果(n=9)

2.9 樣品含量測定 取批號為130107、130108、130109的3份樣品，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件，分別進(jìn)樣測定，測定結(jié)果與《規(guī)范》中所采用的分光光度法比較，結(jié)果見表2。

表2 鹽酸麻黃堿含量測定結(jié)果

3 討論

通過比較《規(guī)范》中分光光度法與改進(jìn)后的高效液相色譜法的測定結(jié)果，發(fā)現(xiàn)前者測定結(jié)果均偏高。分析其原因可能是因為鹽酸麻黃堿與鹽酸偽麻黃堿為同分異構(gòu)體，紫外吸收接近，在《規(guī)范》的分光光度法測定中，很難使兩者有效分離，造成鹽酸麻黃堿檢測含量較高。同時，其他可能存在的雜質(zhì)也會使樣品的吸收產(chǎn)生變化，從而影響分光光度法的測定結(jié)果。在高效液相色譜法中，因為鹽酸麻黃堿的水溶性稍大于鹽酸偽麻黃堿，故兩者在保留時間上存在差異，可以達(dá)到分離檢測的目的和效果。

通過對流動相的優(yōu)化可以發(fā)現(xiàn)，采用甲醇-水或乙腈-水體系時，色譜圖中鹽酸麻黃堿拖尾嚴(yán)重，系統(tǒng)適應(yīng)性較差。在體系中添加酸或磷酸鹽緩沖液后，仍然無法得到令人滿意的色譜峰型，無法進(jìn)行準(zhǔn)確的含量測定。最后通過添加離子對試劑十二烷基磺酸鈉，改變色譜對化合物的分離機(jī)制后，可以克服鹽酸麻黃堿色譜峰的拖尾現(xiàn)象，符合系統(tǒng)適應(yīng)性的要求。

選用甲醇作為流動相體系中的有機(jī)相較乙腈更為經(jīng)濟(jì)，可以降低試驗的運(yùn)行成本。盡管甲醇的末端吸收在210 nm處，但通過在流動相中添加離子對試劑十二烷基磺酸鈉后，可以顯著延長鹽酸麻黃堿的保留時間，避免溶劑峰對含量測定的影響。另外，通過采用流動相提前平衡色譜柱，可以減少基線的波動，保證含量測定的順利進(jìn)行。

本試驗改進(jìn)了樣品含量測定的方法，方法簡便，操作性強(qiáng)，能有效提高復(fù)方呋喃西林滴鼻液中鹽酸麻黃堿含量測定結(jié)果的準(zhǔn)確性。

［1］中國人民解放軍總后勤部.中國人民解放軍醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑規(guī)范［M］.北京:人民軍醫(yī)出版社，2002:174-175.