周永蔚，鄧祿剛，王高島，張靜蓉，李玉春，陳 忠*

（1.熱帶動(dòng)植物生態(tài)學(xué)省部共建教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 海南師范大學(xué)，海南 海口 571158；2.山東大學(xué) 海洋學(xué)院，山東 威海 264209）

海南島位于熱帶北緣，其自然條件具有從熱帶向亞熱帶過渡的特征，島上有著豐富的野生動(dòng)物資源，其中翼手目種類數(shù)有7科33種[1-3]，海南島是我國翼手目種類數(shù)密度最高的省份之一，具有獨(dú)特的動(dòng)物地理學(xué)地位[4-5].

棕果蝠（Rousettus leschenaultii）屬翼手目（Chiroptera）狐蝠科（Pteropodidae），在東南亞地區(qū)有大量分布，國內(nèi)則大量分布于華南地區(qū)，是海南島常見的優(yōu)勢(shì)果蝠，分布廣且數(shù)量大.大長(zhǎng)翼蝠（Miniopterus magnate）隸屬翼手目蝙蝠科（Vespertilionidae），是我國廣域分布的翼手目物種[1，6-8].

在我們的取樣區(qū)域內(nèi)，棕果蝠和大長(zhǎng)翼蝠是同域分布的物種[9].棕果蝠為食果性蝙蝠，通常攝取野生植物的果實(shí)為食，取食的植物主要有14科21種[10].大長(zhǎng)翼蝠為食蟲性蝙蝠，取食的昆蟲主要為鱗翅目、雙翅目、鞘翅目[11].兩種蝙蝠雖然同域分布，但處于不同的生態(tài)位，繁殖策略上可能存在較大差異.已有研究發(fā)現(xiàn)，雌性棕果蝠具有與人類類似的月經(jīng)周期，且一年懷孕兩次，通常第一個(gè)分娩高峰在4月份，第二個(gè)分娩高峰在8月份，第一次哺乳時(shí)期與第二次懷孕期有部分重疊[12-13].普通長(zhǎng)翼蝠（Miniopterus schreibersii）具有胚胎延遲植入和延遲發(fā)育的特殊現(xiàn)象，且不同地區(qū)其胚胎延遲植入的時(shí)間也不同[14-16].

本文通過對(duì)海南島秋季棕果蝠和大長(zhǎng)翼蝠雄性生殖腺的形態(tài)、組織學(xué)進(jìn)行觀察研究，了解兩種蝙蝠雄性性腺的發(fā)育狀況，為探討同域分布但具有不同生態(tài)位的這兩種蝙蝠的繁殖策略上的差異提供基礎(chǔ)資料.

1 材料與方法

1.1 野外采樣地點(diǎn)

于2005年7—9月進(jìn)行樣本采集，樣本個(gè)體均為雄性健康成體.棕果蝠采集自?？谑行阌^(qū)西秀鎮(zhèn)榮山村廢棄的舊房子里，樣本數(shù)量為73只；大長(zhǎng)翼蝠采集自?？谑谢鹕降刭|(zhì)公園巖洞內(nèi)，樣本數(shù)量為18只.采樣地區(qū)平均海拔約在55 m，為熱帶島嶼季風(fēng)氣候，季節(jié)主要分為旱季和雨季，年降雨量1650 mm，年均溫23.7℃[10].

1.2 材料處理

野外采集的棕果蝠與大長(zhǎng)翼蝠于24 h內(nèi)處死，經(jīng)解剖取出睪丸、附睪，置于Bouin’s固定液中固定24 h，在75%的酒精中沖洗浸泡直至無色，最后對(duì)組織采用常規(guī)石蠟切片技術(shù)和HE染色[17]，中性樹膠封片，烘干后在Olympus顯微鏡下觀察并拍照.

2 結(jié)果

2.1 睪丸曲細(xì)精管發(fā)育狀況

曲細(xì)精管位于睪丸實(shí)質(zhì)內(nèi)，具有復(fù)層生精上皮的管壁.在大長(zhǎng)翼蝠的曲精細(xì)管內(nèi)，生精細(xì)胞不斷增殖和分化，具一定的分布規(guī)律，且與支持細(xì)胞呈高桶型排列組成.染色后，上皮基部的基膜呈明顯紅色，而在不同部位的上皮內(nèi)，生精細(xì)胞的組合并不完全一致，提示在生精上皮的不同部位中，生精細(xì)胞的增殖與分化是非同步進(jìn)行的.

棕果蝠睪丸曲細(xì)精管管壁基膜明顯且完整，管壁清晰，橫截面積增長(zhǎng)明顯，7月的樣本管壁基膜較薄，內(nèi)有脂肪充盈，管腔不明顯（見圖1A）；8、9月管壁逐漸加厚，管腔逐漸清晰可見（見圖1B、C）.大長(zhǎng)翼蝠睪丸7—8月的曲細(xì)精管具有完整的管壁基膜，管內(nèi)充盈著大量脂肪，但這一時(shí)期其管徑及橫截面積變化不明顯（見圖1a、b）；9月曲細(xì)精管比7—8月管壁基膜增厚（見圖1c），可見清晰的管腔，曲細(xì)精管管徑及橫截面積增長(zhǎng)明顯.

比較兩種蝙蝠結(jié)果可發(fā)現(xiàn)，7—9月樣本，大長(zhǎng)翼蝠睪丸的曲細(xì)精管管壁厚度均小于棕果蝠睪丸的曲細(xì)精管管壁，且直到9月其曲細(xì)精管管腔才清晰可見（見圖1c），其組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)與8月棕果蝠睪丸曲細(xì)精管相類似（見圖1B），這一現(xiàn)象揭示了大長(zhǎng)翼蝠秋季睪丸曲細(xì)精管變化周期晚于棕果蝠.

2.2 附睪發(fā)育狀況

附睪由輸出小管和附睪管組成，位于睪丸的背部外側(cè).由圖1（D-F、d-f）所見，兩種蝙蝠附睪管形態(tài)規(guī)則，結(jié)構(gòu)清晰完整，管腔完整，小管之間有各種填充物和間質(zhì).比較兩種蝙蝠結(jié)果可發(fā)現(xiàn)，7—9月樣本中，大長(zhǎng)翼蝠附睪管管壁假復(fù)層柱狀上皮的厚度、橫截面積、管腔大小均低于棕果蝠，9月大長(zhǎng)翼蝠附睪管的形態(tài)結(jié)構(gòu)（f）與8月棕果蝠附睪管（E）的形態(tài)結(jié)構(gòu)近似，亦說明大長(zhǎng)翼蝠秋季睪丸曲細(xì)精管變化周期晚于棕果蝠.

2.3 睪丸各級(jí)生殖細(xì)胞變化規(guī)律

在曲細(xì)精管的管壁上，處于不同發(fā)育階段的生精細(xì)胞與支持細(xì)胞由外向內(nèi)分布著.精原細(xì)胞位于上皮基膜處，呈圓球形，偶見絲狀分裂.體積大，并具有較大的核的細(xì)胞為初級(jí)精母細(xì)胞，其核內(nèi)染色體變粗且交織成球狀.核多呈分裂相為處于第一次成熟分裂時(shí)期的細(xì)胞，較易辨認(rèn).上皮內(nèi)可見位于基膜上的支持細(xì)胞，夾雜在生精細(xì)胞之間，其輪廓不明顯，核呈卵圓形，染色淺而明顯.

棕果蝠的曲細(xì)精管上皮光滑完整，各級(jí)生精細(xì)胞排列有序，層次5～8層（見圖1）.7月曲細(xì)精管內(nèi)可見大量支持細(xì)胞緊靠基底，其上分布少量精原細(xì)胞，初級(jí)精母細(xì)胞數(shù)量多且明顯，管腔中未見游離或成熟的精子（見圖1A）；8月曲細(xì)精管內(nèi)支持細(xì)胞減少，精原細(xì)胞大量沿基膜分布，層次2～3層，初級(jí)精母細(xì)胞數(shù)量進(jìn)一步增加，層次2～3層，間或可見次級(jí)精母細(xì)胞，層次1～2層，可見少量成熟精子（見圖1B）；9月曲細(xì)精管管內(nèi)支持細(xì)胞進(jìn)一步減少，精原細(xì)胞大量且明顯，層次3～4層，初級(jí)精母細(xì)胞數(shù)量沒有太大變化，靠近管腔可見2～3層精子細(xì)胞，且管腔內(nèi)已出現(xiàn)少量游離精子（見圖1C）.精原細(xì)胞及精子細(xì)胞的大量出現(xiàn)，說明此時(shí)期睪丸已經(jīng)進(jìn)入大量產(chǎn)生精子的階段，提示了棕果蝠交配高峰期的到來.

圖1 不同月份棕果蝠和大長(zhǎng)翼蝠曲細(xì)精管及附睪的組織結(jié)構(gòu)圖Fig.1 The organizational structure of seminiferous tubule and epididymis of Rousettus leschenaultii and Miniopterus magnate in different months

大長(zhǎng)翼蝠曲細(xì)精管上皮在7月份的曲細(xì)精管內(nèi)出現(xiàn)大量支持細(xì)胞，生精細(xì)胞在基底膜內(nèi)具有較大的空隙，精原細(xì)胞與初級(jí)精母細(xì)胞較少見（見圖1a）；8月曲細(xì)精管內(nèi)支持細(xì)胞仍舊較多，精原細(xì)胞分布于基底膜附近，初級(jí)精母細(xì)胞數(shù)量略有增加（見圖1b）；9月曲細(xì)精管管腔明顯，其內(nèi)各級(jí)生精細(xì)胞排列有序，層次4～6層，支持細(xì)胞貼基膜均勻分布，未見明顯的精原細(xì)胞，初級(jí)精母細(xì)胞大量分布層次3～4層，間或可見次級(jí)精母細(xì)胞，未觀察到精子細(xì)胞以及精子（見圖1c）.精原細(xì)胞數(shù)目較少，可見較多的初級(jí)精母細(xì)胞，說明精原細(xì)胞在這一時(shí)期大量分裂成為初級(jí)精母細(xì)胞，睪丸開始進(jìn)入生精階段，提示后期曲細(xì)精管將產(chǎn)生大量精子細(xì)胞與精子.

比較兩種蝙蝠睪丸生殖細(xì)胞變化規(guī)律可發(fā)現(xiàn)，棕果蝠的睪丸在9月已經(jīng)進(jìn)入大量產(chǎn)生精子的階段，提示了其繁殖交配高峰期的到來，而與此同時(shí)，大長(zhǎng)翼蝠的睪丸才剛剛開始產(chǎn)生精子，尚未進(jìn)入大量產(chǎn)生精子的階段，這說明，兩種蝙蝠的交配期可能并不是同一時(shí)期，而是具有季節(jié)性差異，棕果蝠在8—9月達(dá)到繁殖高峰期，大長(zhǎng)翼蝠則不在這一季節(jié)段，繁殖高峰期可能在9月以后.

3 討論

在季節(jié)性繁殖的哺乳類動(dòng)物中，精子發(fā)生只在發(fā)情期進(jìn)行，曲細(xì)精管在非發(fā)情期即皺縮而逐漸變?yōu)橹缓С旨?xì)胞和少量精原細(xì)胞[18].已有文獻(xiàn)報(bào)道，棕果蝠每年3月中旬至4月中下旬進(jìn)行交配活動(dòng)，7—8月為產(chǎn)仔期[12-13].我們所采集的性成熟雄性棕果蝠，在8—9月大量產(chǎn)生精子（見圖1）.而由于海南島獨(dú)特的地理氣候環(huán)境，秋冬季棕果蝠可食果實(shí)種類也較豐富[10]，因而，有理由推測(cè)棕果蝠具有在秋冬季完成交配的可能性.

而在海南島的秋冬季節(jié)，大長(zhǎng)翼蝠所食昆蟲活動(dòng)較不頻繁，因此可能由于食物來源少，大長(zhǎng)翼蝠不選擇在秋冬季進(jìn)行繁殖活動(dòng).我們?cè)诖箝L(zhǎng)翼蝠睪丸曲細(xì)精管及生精細(xì)胞的組織學(xué)觀察中發(fā)現(xiàn)，7—9月曲細(xì)精管中未產(chǎn)生大量精子；由此可知，大長(zhǎng)翼蝠的繁殖季節(jié)并不在7—9月，并提示了這樣一種可能性，即雄性蝙蝠曲細(xì)精管將在隨后月份產(chǎn)生大量精子細(xì)胞以及精子.

通過比較兩種蝙蝠曲細(xì)精管橫截面積及生精細(xì)胞的變化，發(fā)現(xiàn)大長(zhǎng)翼蝠睪丸及生精細(xì)胞的變化時(shí)間軸晚于棕果蝠，由此說明，這兩種同域但生態(tài)位不同的蝙蝠有著不同的繁殖周期.這究竟是由于海南地處熱帶地區(qū)，冬季平均溫度較高，蝙蝠冬眠時(shí)間較短引起的適應(yīng)性生殖策略的改變，還是由于二者食性不同（棕果蝠取食的植物果實(shí)先成熟）導(dǎo)致生殖時(shí)間軸不同，抑或這僅僅是由于活動(dòng)范圍重疊造成的特殊現(xiàn)象，還有待于進(jìn)一步的探究.

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