薛芳芳　趙婷婷

[摘 要] 目的：對比酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）、電化學(xué)發(fā)光法（ECLIA）及時間分辨熒光分析法（TRFIA）檢驗乙型肝炎血清標志物（HBV-M）的結(jié)果，評價三種方法。方法：采集200例乙型肝炎病毒感染者及100名正常體檢者的血清，通過ELISA 法、ECLIA法、TRFIA法分別檢驗HBV-M。以ECLIA為參考，采用Kappa檢驗對不同方法學(xué)檢測結(jié)果間一致性進行評價，通過μ檢驗排除抽樣誤差可能造成的影響，通過Kappa系數(shù)大小來判定一致性強弱程度。結(jié)果：ELIAS與ECLIA比較，經(jīng)μ檢驗，所有項目P均<0.05，兩種方法具有一致性；TRFIA與ECLIA比較，經(jīng)μ檢驗，所有項目P均<0.05，兩種方法具有一致性。結(jié)論：三種方法檢驗乙型肝炎血清標志物結(jié)果具有高度一致性，可針對不同需要選擇合適檢測方法。

[關(guān)鍵詞] 乙型肝炎病毒；血清學(xué)標志物；酶聯(lián)免疫吸附試驗；電化學(xué)發(fā)光法；時間分辨免疫熒光法

中圖分類號：R446.11 文獻標識碼：B 文章編號：2095-5200（2014）05-073-03

乙型肝炎病毒（HBV）血清學(xué)標記物（HBV-M）[包括乙型肝炎表面抗原（HBsAg）、乙型肝炎表面抗體（抗HBs）、乙型肝炎e抗原（HBeAg）、乙型肝炎e抗體（抗HBe）、乙型肝炎核心抗體（抗HBc）]檢查是臨床診斷、治療及判斷HBV感染者病程及傳染性的重要指標[1]。檢驗HBV-M的方法較多，包括放射免疫法、酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），隨著科學(xué)技術(shù)不斷發(fā)展，化學(xué)發(fā)光法（CLIA）、電化學(xué)發(fā)光法（ECLIA）、時間分辨免疫熒光法（TRFIA）在臨床實驗室逐漸得到推廣和普及[2]。為了解不同方法的檢驗效果，我們采用ELISA、ECLIA、TRFIA3種方法對HBV-M進行檢測，對比不同方法的檢驗結(jié)果，探討檢驗結(jié)果的一致性，為臨床檢驗方法選擇提供參考。

1 資料和方法

1.1 標本來源

選擇2012年9月～2013年9月門診及住院患者共200例，所有患者均經(jīng)ECLIA證實為乙型肝炎病毒感染者，其中男121例，女79例，年齡7～59歲，平均年齡30.1±19.2歲，另選擇100名健康體檢患者血清，其中男46例，女54例，年齡20～43歲，平均31.2±9.6歲。

1.2 儀器和試劑

選用意大利ALISEI全自動酶標儀，北京萬泰生物工程股份有限公司生產(chǎn)HBV-M試劑盒；美國ABBOTT公司生產(chǎn)的ARCHI TECTi2000自動化免疫分析儀及配套測HBV-M全套試劑，德國Roche 公司生產(chǎn)的Elecsys 2010自動化免疫分析儀及配套測HBV-M全套試劑。

1.3 方法

ELISA檢測結(jié)果判定按廠家試劑說明書規(guī)定之Cut-off值作為判斷標準，夾心法檢測結(jié)果以>Cut-off值為陽性，競爭法檢測結(jié)果以

1.4 統(tǒng)計方法

采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，采用Kappa檢驗對三種檢測方法結(jié)果的一致性進行判斷，通過μ檢驗排除抽樣誤差可能造成的影響，以Kappa系數(shù)大小來判定一致性強弱程度，如：Kappa系數(shù)<0為差度一致性，0～0.2為微弱度一致性，0.21～0.4為弱度一致性，0.41～0.6為中度一致性，0.61～0.8為高度一致性；0.81～1.0為極強度一致性。

2 結(jié)果

3 討論

據(jù)流行病學(xué)調(diào)查顯示，全球無癥狀乙肝病毒攜帶者約2.8億，僅我國患者就有1.3億，乙肝病毒感染所致的乙型病毒性肝炎已經(jīng)成為嚴重威脅人類健康的重要傳染性疾病。臨床檢驗中檢測乙型肝炎血清標志物的方法較多，按照檢測技術(shù)不同可大致分為定性檢測和定量檢測兩大類。前者包括金標法和ELISA，后者包括CLIA、ECLIA、TRFIA等[3-4]。而檢測結(jié)果的有效報告是指導(dǎo)臨床診斷治療的重要環(huán)節(jié)，是檢驗界結(jié)果互認的重要依據(jù)，故及其有必要對各檢驗方法結(jié)果一致性進行評價及比較[5-6]。通常定性測定主要應(yīng)用于普通人群及乙肝患者進行的乙肝血清標志物檢測，常以ELISA法為主[7]。此種檢測方法操作簡單，經(jīng)濟實惠，通過在檢測過程中直接進行標準量化質(zhì)控，保證了檢測結(jié)果的相對有效性[8-10]。ECLIA是結(jié)合生物素及鏈霉親和素參與反應(yīng)的方法，將釕作為標記物，通過測定光電信號對結(jié)果進行判定，敏感度相對增高[11-12]。既往研究認為，ECLIA相比ELISA法主要優(yōu)勢在于方法簡便、自動快速、檢測結(jié)果特異性強、敏感度高，結(jié)果可定量，最重要的在于檢測時期分析敏感性為0.09ng/mL，最高濃度可達150萬IU/mL而不會出現(xiàn)前帶現(xiàn)象[13-15]。TRFIA法屬于新型熒光免疫標記技術(shù)，其以鑭系元素為標記物，相比傳統(tǒng)異硫氰酸熒光素所標記的熒光免疫分析，TRFIA法避免了因激發(fā)光譜和發(fā)射光譜由位移較小所指的部分重疊現(xiàn)象，降低了測量干擾程度。在正常情況下，其標記物銪可發(fā)出的信號極其微弱，當由外部加入某種酸性增強液后，免疫復(fù)合物中的銪就可以順利解離出，并再次形成新的螯合物，由激發(fā)光激發(fā)后便可產(chǎn)生非常強的熒光信號。由于TRFIA法是兩步法，儀器全自動檢測，實驗條件平穩(wěn)可靠，最大程度降低了主客觀因素造成的誤差，大大降低了誤診率[16-18]。

本研究中，對比ELISA法和ECLIA法可見，兩者在HBeAg項目上表現(xiàn)出極強一致性，其余項目則為高度一致性。有研究認為ELISA法在判斷結(jié)果時因存在檢測灰區(qū)而影響部分結(jié)果誤讀，故對結(jié)果要求嚴格的術(shù)前檢查不宜采用此法。原因在于該法通過酶進行檢測，對反應(yīng)后試劑顏色深淺用以判斷實驗結(jié)果，而抗原或抗體若同酶結(jié)合物的濃度較低時，由于反映出的吸光度值太小，故假陰性率較高，而當濃度較大時，吸光度值則變大，嚴重情況下可超出曲線敏感范圍平臺，檢驗結(jié)果準確性難以完全保證[19-21]。如本研究中在臨床最關(guān)注的HBsAg項目上ELISA法有18例漏檢，說明其敏感度的確不足。不過對于普通人群疾病篩查使用該手段較好，畢竟其費用低、操作簡單快速等優(yōu)點是其他檢測方法無法比擬的。

TRFIA法檢測結(jié)果同ECLIA法在抗HBs項目上具有高度一致性，在其他項目上則具有極強一致性，同既往研究結(jié)果類似[3]。正常人檢測時出現(xiàn)8例HBsAg結(jié)果差異，提示兩種方法在特異度上存在區(qū)別。有研究報道，相比ELISA法，TRFIA法檢出陽性率高，可定量檢測、特異性及靈敏度均較高，在檢驗醫(yī)學(xué)中具有廣闊發(fā)展?jié)摿22-23]。原因在于TRFIA采用波長和時間兩種分辨技術(shù)，通過時間延長，將非特異熒光干擾清除，并于固定時間對特異熒光檢測，使自然背景干擾問題得到了解決，靈敏度極大增加；同時激發(fā)光同發(fā)射光間的Stokes移位較大，便于對兩種光波長進行分別，非特異熒光干擾得到排除，光譜分辨率明顯提高，增強了檢測結(jié)果特異度[24-26]。ECLIA法可用于對診斷明確的乙型肝炎患者治療后療效進行判斷，，TRFIA法具有檢測病毒變異的能力，在其他檢測手段難以確定時用處更大[27-28]，其通過定量結(jié)果的回歸分析，可對溯源一致的項目進行一致性程度評價，結(jié)合基因檢測手段，還可對處于病毒復(fù)制期與可能發(fā)生病毒變異的患者進行相關(guān)性分析，體現(xiàn)出該檢測手段的臨床價值所在。

總之，幾種HBV-M檢測手段檢測結(jié)果具有較高一致性，可針對不同需要選擇合適檢測方法。

參 考 文 獻

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