徐強(qiáng)+謝秀麗

摘 要：目的：觀察4種復(fù)方抗菌藥物對常見細(xì)菌的抑菌作用。方法：配制不同濃度梯度的藥物溶液，通過藥敏紙片法測量藥物對細(xì)菌的抑菌圈直徑來確定該藥物的抑菌效果，評價其在實際生產(chǎn)中的應(yīng)用價值。結(jié)果：大腸桿菌、金黃色葡萄球菌對濃度為128μg/mL氟苯尼考高敏，大腸桿菌對濃度為64μg/mL氧氟沙星高敏，金黃色葡萄球菌對濃度為256μg/mL鹽酸多西環(huán)素高敏，大腸桿菌、金黃色葡萄球菌對氨芐西林敏感性不高。結(jié)論：氟苯尼考、氧氟沙星對大腸桿菌有較好的抑菌作用效果，氟苯尼考、鹽酸多西環(huán)素對金黃色葡萄球菌有較好的抑制效果。

關(guān)鍵詞：復(fù)方抗生素；大腸桿菌；金黃色葡萄球菌；抑菌性

中圖分類號R318 文獻(xiàn)標(biāo)識碼A 文章編號1007-7731（2014）14-33-02

Experiment on Several Kinds of Antibiotics in Vitro Bacteriostasis

Xu Qiang et al.

（Animal Husbandry and Veterinary Bureau of Guichi District in Chizhou City，Chizhou 247000，China）

Abstract:Objective: To observe the four kinds of compound antimicrobial agents against common bacteria inhibition. Methods: The preparation of the drug solution of different concentration gradient，measured by disk diffusion method of drug susceptibility of bacteria，to determine the inhibition zone diameter of the inhibitory effect of the drug.To evaluate its application in the actual production value. Results: E. coli and aureus have high sensitivity to florfenicol with the concentration of 128μg/mL；E. coli have high sensitivity to ofloxacin with the concentration of 64μg/mL；aureus have high sensitivity to doxycycline hydrochloride with the concentration of 256μg/mL；E. coli and aureus have low sensitivity to the ampicillin. Conclusions: Florfenicol and ofloxacin have good antibacterial effect on Escherichia coli；florfenicol and doxycycline hydrochloride have good antibacterial effect on aureus.

Key words:Compound antibiotics；Escherichia coli；Aureus；Antimicrobial activity

長期以來，在細(xì)菌性感染疾病的治療中，抗生素的應(yīng)用使人類許多嚴(yán)重的細(xì)菌感染性疾病得到了有效控制，尤其是在抗生素發(fā)現(xiàn)和應(yīng)用的早期，幾乎所有的細(xì)菌感染性疾病都能夠容易地被治愈，但是這種樂觀的局面由于耐藥菌的出現(xiàn)而很快改變[1]。由于抗菌藥物的廣泛應(yīng)用特別是濫用，使細(xì)菌對抗菌藥物的敏感性降低甚至消失，稱為耐藥性。細(xì)菌耐藥性的變化和抗菌藥物的應(yīng)用有關(guān)，細(xì)菌的廣泛耐藥性提示生產(chǎn)實踐中應(yīng)根據(jù)藥敏試驗選擇高敏感藥物[2]。本試驗選擇了幾種臨床上常用的復(fù)方藥物進(jìn)行抑菌試驗，檢測測定其抑菌圈直徑，探討其抑菌效果，為臨床用藥提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試材料

1.1.1 藥物 桿菌奇康、桿菌速滅、多西金剛、頭包桿康，均購于鳳陽縣某動物醫(yī)院。

1.1.2 菌種 大腸桿菌，金黃色葡萄球菌，由安徽科技學(xué)院動物醫(yī)學(xué)實驗驗室提供。

1.1.3 培養(yǎng)基 營養(yǎng)瓊脂（國產(chǎn)分析純）。

1.1.4 試劑 蒸餾水、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀。

1.1.5 儀器 隔水式恒溫培養(yǎng)箱，上海博訊實業(yè)有限公司生產(chǎn)；超凈工作臺，蘇凈集團(tuán)安泰公司生產(chǎn)；高壓蒸汽滅菌器，上海華線醫(yī)用核子儀器有限公司生產(chǎn)；電子分析天平，梅特勒-托利儀器上海有限公司生產(chǎn)。

1.2 試驗方法

1.2.1 培養(yǎng)基配制 在容量為1 000mL的三角燒瓶中加入蒸餾水1 000mL，放在電爐上加熱。用天平準(zhǔn)確稱取35.0g營養(yǎng)瓊脂，放入三角燒瓶中并不斷攪拌使瓊脂完全溶解，然后放入高壓滅菌鍋中經(jīng)121℃，20min高壓滅菌，取出趁熱倒入經(jīng)過高壓滅菌的培養(yǎng)皿中，厚度約3～5mm，冷卻凝固后備用。

1.2.2 藥液的制備 用分析天平分別精密稱取各藥適量（各藥均按有效成分的含量計算），置棕色容量瓶中。氧氟沙星、氟苯尼考用滅菌的蒸餾水溶解，鹽酸多西四環(huán)素用pH6.0磷酸鹽緩沖液溶解，氨芐西林用pH8.0磷酸鹽緩沖液溶解，配置成256μg/mL藥液，置4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3 藥敏紙片的制備 取新華定性濾紙，用打孔器打成直徑6mm的圓形小紙片。將上述紙片按100片分別裝入清潔干燥的青霉素小空瓶中，包扎，15磅高壓滅菌 15min后，置37℃溫箱中使其完全干燥。分別向裝有紙片的小瓶中加入配制成的藥液1mL，使濾紙將藥液均勻吸盡，放入37℃溫箱使其完全干燥，烘干后裝入無菌小瓶密封，4℃冰箱內(nèi)備用。

1.2.4 菌種活化 將大腸桿菌和金黃色葡萄球菌接種普通營養(yǎng)瓊脂斜面后，置37℃培養(yǎng)箱中過夜備用。

1.2.5 體外抑菌試驗 分別取已經(jīng)配置好的藥液配成256μg/mL的儲備液，過濾除菌后，將各藥物分裝于離心管中，于-20℃保存。操作方法：將儲備藥液作2倍稀釋，然后再將藥液倍比稀釋7個梯度。將儲備藥液加稀釋液進(jìn)行稀釋，即藥物的濃度依次為256、128、64、32、16、8、4μg/mL，加液完畢蓋上消毒膜，振蕩混勻，于37℃培養(yǎng)16～18h。

1.2.6 接種培養(yǎng)分別取上述菌株的新鮮培養(yǎng)物，在無菌操作條件下，用不同涂布棒均勻涂抹在接種過不同菌種的瓊脂培養(yǎng)基上，再用無菌鑷子將在各復(fù)方藥液中浸潤的紙片均勻間隔貼于各瓊脂培養(yǎng)基表面。各藥液對每種試驗菌均做3次重復(fù)，貼入時標(biāo)記起始位置，按順時針或逆時針方向?qū)V紙片順序貼入，輕壓紙片使接觸良好，放入37℃恒溫培養(yǎng)箱中，24h后取出，觀察抑菌圈，測量并記錄結(jié)果，取抑菌圈直徑平均值[3-4]。

1.2.7 判定標(biāo)準(zhǔn) 復(fù)方藥物抑菌效果的判定：參照《微生物和檢驗技術(shù)》判定結(jié)果，用抑菌圈的直徑表示，抑菌圈越大，抑菌效果越好[5]，即抑菌圈直徑（φ）≥20mm者為高度敏感；抑菌圈直徑16≤（φ）<20mm者為中度敏感；抑菌圈直徑10≤（φ）<16mm者為低度敏感；抑菌圈直徑（φ）<10mm者為耐藥。

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2 結(jié)果與分析

2.1 不同藥物及濃度對大腸桿菌抑菌試驗結(jié)果比較 由表1可知：（1）大腸桿菌對濃度為64μg/mL氧氟沙星高敏，隨濃度增高，其敏感性逐漸減弱；大腸桿菌對濃度為128μg/mL氟苯尼考高敏，隨藥物濃度降低，其敏感性逐漸減弱；大腸桿菌對濃度為256μg/mL鹽酸多西環(huán)素低敏，隨藥物濃度降低，其敏感性逐漸減弱，達(dá)32μg/mL時則呈耐藥性；大腸桿菌對氨芐西林低敏，藥物濃度對其抗菌作用不好。（2）在各濃度梯度下，氧氟沙星、氟苯尼考對大腸桿菌的抑菌效果好，鹽酸多西環(huán)素與氨芐西林對大腸桿菌抗菌效果不好。

表1 不同藥物及濃度下的大腸桿菌抑菌圈直徑（mm）

[藥物名稱&藥物濃度（μg/mL）&256&128&64&32&16&8&4&氧氟沙星&15.68&17.47&23.32&20.96&19.21&17.04&15.12&氟苯尼考&17.48&24.31&19.09&16.71&12.07&9.02&7.54&鹽酸多西環(huán)素&13.29&12.63&11.36&10.23&9.23&8.72&8.09&氨芐西林&14.03&12.17&14.80&12.54&10.71&10.25&9.4&]

2.2 不同藥物及濃度對金黃色葡萄球菌抑菌試驗結(jié)果比較 由表2可知：（1）金黃色葡萄球菌對濃度為256μg/mL氧氟沙星低敏，隨藥物濃度降低，其敏感性逐漸減弱，達(dá)64μg/mL時則呈耐藥性；金黃色葡萄球菌對濃度為256μg/mL、128μg/mL、64μg/mL、32μg/mL氟苯尼考高敏，隨藥物濃度降低，其敏感性逐漸減弱，達(dá)4μg/mL時則呈耐藥性；金黃色葡萄球菌對濃度為256μg/mL、128μg/mL時鹽酸多西環(huán)素高敏，隨藥物濃度降低，其敏感性逐漸減弱，達(dá)4μg/mL時則呈耐藥性；金黃色葡萄球菌對氨芐西林低敏，藥物濃度對其抗菌作用不好。（2）在各濃度梯度下，氟苯尼考對金黃色葡萄球菌抑菌效果很好；鹽酸多西環(huán)素對金黃色葡萄球菌的抑菌效果好；氨芐西林、氧氟沙星對金黃色葡萄球菌抑菌效果不好。

表2 不同藥物及濃度下的金黃色葡萄球菌抑菌圈直徑（mm）

[藥物名稱&藥物濃度（μg/mL）&256&128&64&32&16&8&4&氧氟沙星&13.51&11.32&9.82&6*&6*&6*&6*&氟苯尼考&30.04&33.27&29.06&22.37&15.08&12.07&9.54&鹽酸多西環(huán)素&23.46&20.53&19.21&17.50&13.50&11.52&8.10&氨芐西林&11.23&12.28&12.49&12.17&11.51&10.12&9.24&]

注：6*表示除藥敏紙片6mm外無抑菌圈出現(xiàn)。

3 結(jié)論與討論

由本次試驗可知，氟苯尼考、氧氟沙星對大腸桿菌有較好的抑菌作用效果，氟苯尼考、鹽酸多西環(huán)素對金黃色葡萄球菌有較好的抑制效果。

紙片瓊脂擴(kuò)散法具有操作簡便、容易掌握等特點(diǎn)，并且該法已經(jīng)在養(yǎng)殖業(yè)用藥指導(dǎo)中起到了巨大的作用，目前在臨床中也已經(jīng)被認(rèn)為是一種最具有權(quán)威的用藥指導(dǎo)依據(jù)[3]。然而，紙片瓊脂擴(kuò)散法藥物敏感性試驗只是一種藥物敏感性定性試驗，在試驗中容易受到諸多因素的影響，主要為抗菌藥物、培養(yǎng)基、細(xì)菌、藥敏紙片、培養(yǎng)條件以及操作質(zhì)量等因素。

參考文獻(xiàn)

[1]任祥友，蔣瑞芹，崔玉芹.抗生素的細(xì)菌耐藥性及應(yīng)對措施[J].中國民康醫(yī)學(xué)，2010，22（13）:36-37.

[2]徐海花，牛鐘相，張萬福，等.細(xì)菌耐藥性的研究進(jìn)展[J].山東農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2010，41（1）:156-160.

[3]王新海，曹慧，李全紅.自制藥敏紙片與簡易培養(yǎng)法在禽病防制中的應(yīng)用[J].中國禽業(yè)導(dǎo)刊，2006，（11）:22.

[4]Hiramatsu K，Hanaki H，et al. Methicillin-resistant Staphylococcus aureus clinical strain with reduced vancomycin susceptibility. [J]Antimicrob Chemother，1997，40: 135.

[5]龔云登，姚茂佳，向承西.雞大腸桿菌體外藥敏試驗觀察[J].恩施職業(yè)技術(shù)學(xué)院學(xué)報（綜合版），2005，17（1）:77-79.

（責(zé)編：張宏民）

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2 結(jié)果與分析

2.1 不同藥物及濃度對大腸桿菌抑菌試驗結(jié)果比較 由表1可知：（1）大腸桿菌對濃度為64μg/mL氧氟沙星高敏，隨濃度增高，其敏感性逐漸減弱；大腸桿菌對濃度為128μg/mL氟苯尼考高敏，隨藥物濃度降低，其敏感性逐漸減弱；大腸桿菌對濃度為256μg/mL鹽酸多西環(huán)素低敏，隨藥物濃度降低，其敏感性逐漸減弱，達(dá)32μg/mL時則呈耐藥性；大腸桿菌對氨芐西林低敏，藥物濃度對其抗菌作用不好。（2）在各濃度梯度下，氧氟沙星、氟苯尼考對大腸桿菌的抑菌效果好，鹽酸多西環(huán)素與氨芐西林對大腸桿菌抗菌效果不好。

表1 不同藥物及濃度下的大腸桿菌抑菌圈直徑（mm）

[藥物名稱&藥物濃度（μg/mL）&256&128&64&32&16&8&4&氧氟沙星&15.68&17.47&23.32&20.96&19.21&17.04&15.12&氟苯尼考&17.48&24.31&19.09&16.71&12.07&9.02&7.54&鹽酸多西環(huán)素&13.29&12.63&11.36&10.23&9.23&8.72&8.09&氨芐西林&14.03&12.17&14.80&12.54&10.71&10.25&9.4&]

2.2 不同藥物及濃度對金黃色葡萄球菌抑菌試驗結(jié)果比較 由表2可知：（1）金黃色葡萄球菌對濃度為256μg/mL氧氟沙星低敏，隨藥物濃度降低，其敏感性逐漸減弱，達(dá)64μg/mL時則呈耐藥性；金黃色葡萄球菌對濃度為256μg/mL、128μg/mL、64μg/mL、32μg/mL氟苯尼考高敏，隨藥物濃度降低，其敏感性逐漸減弱，達(dá)4μg/mL時則呈耐藥性；金黃色葡萄球菌對濃度為256μg/mL、128μg/mL時鹽酸多西環(huán)素高敏，隨藥物濃度降低，其敏感性逐漸減弱，達(dá)4μg/mL時則呈耐藥性；金黃色葡萄球菌對氨芐西林低敏，藥物濃度對其抗菌作用不好。（2）在各濃度梯度下，氟苯尼考對金黃色葡萄球菌抑菌效果很好；鹽酸多西環(huán)素對金黃色葡萄球菌的抑菌效果好；氨芐西林、氧氟沙星對金黃色葡萄球菌抑菌效果不好。

表2 不同藥物及濃度下的金黃色葡萄球菌抑菌圈直徑（mm）

[藥物名稱&藥物濃度（μg/mL）&256&128&64&32&16&8&4&氧氟沙星&13.51&11.32&9.82&6*&6*&6*&6*&氟苯尼考&30.04&33.27&29.06&22.37&15.08&12.07&9.54&鹽酸多西環(huán)素&23.46&20.53&19.21&17.50&13.50&11.52&8.10&氨芐西林&11.23&12.28&12.49&12.17&11.51&10.12&9.24&]

注：6*表示除藥敏紙片6mm外無抑菌圈出現(xiàn)。

3 結(jié)論與討論

由本次試驗可知，氟苯尼考、氧氟沙星對大腸桿菌有較好的抑菌作用效果，氟苯尼考、鹽酸多西環(huán)素對金黃色葡萄球菌有較好的抑制效果。

紙片瓊脂擴(kuò)散法具有操作簡便、容易掌握等特點(diǎn)，并且該法已經(jīng)在養(yǎng)殖業(yè)用藥指導(dǎo)中起到了巨大的作用，目前在臨床中也已經(jīng)被認(rèn)為是一種最具有權(quán)威的用藥指導(dǎo)依據(jù)[3]。然而，紙片瓊脂擴(kuò)散法藥物敏感性試驗只是一種藥物敏感性定性試驗，在試驗中容易受到諸多因素的影響，主要為抗菌藥物、培養(yǎng)基、細(xì)菌、藥敏紙片、培養(yǎng)條件以及操作質(zhì)量等因素。

參考文獻(xiàn)

[1]任祥友，蔣瑞芹，崔玉芹.抗生素的細(xì)菌耐藥性及應(yīng)對措施[J].中國民康醫(yī)學(xué)，2010，22（13）:36-37.

[2]徐?；ǎｇ娤?，張萬福，等.細(xì)菌耐藥性的研究進(jìn)展[J].山東農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2010，41（1）:156-160.

[3]王新海，曹慧，李全紅.自制藥敏紙片與簡易培養(yǎng)法在禽病防制中的應(yīng)用[J].中國禽業(yè)導(dǎo)刊，2006，（11）:22.

[4]Hiramatsu K，Hanaki H，et al. Methicillin-resistant Staphylococcus aureus clinical strain with reduced vancomycin susceptibility. [J]Antimicrob Chemother，1997，40: 135.

[5]龔云登，姚茂佳，向承西.雞大腸桿菌體外藥敏試驗觀察[J].恩施職業(yè)技術(shù)學(xué)院學(xué)報（綜合版），2005，17（1）:77-79.

（責(zé)編：張宏民）

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2 結(jié)果與分析

2.1 不同藥物及濃度對大腸桿菌抑菌試驗結(jié)果比較 由表1可知：（1）大腸桿菌對濃度為64μg/mL氧氟沙星高敏，隨濃度增高，其敏感性逐漸減弱；大腸桿菌對濃度為128μg/mL氟苯尼考高敏，隨藥物濃度降低，其敏感性逐漸減弱；大腸桿菌對濃度為256μg/mL鹽酸多西環(huán)素低敏，隨藥物濃度降低，其敏感性逐漸減弱，達(dá)32μg/mL時則呈耐藥性；大腸桿菌對氨芐西林低敏，藥物濃度對其抗菌作用不好。（2）在各濃度梯度下，氧氟沙星、氟苯尼考對大腸桿菌的抑菌效果好，鹽酸多西環(huán)素與氨芐西林對大腸桿菌抗菌效果不好。

表1 不同藥物及濃度下的大腸桿菌抑菌圈直徑（mm）

[藥物名稱&藥物濃度（μg/mL）&256&128&64&32&16&8&4&氧氟沙星&15.68&17.47&23.32&20.96&19.21&17.04&15.12&氟苯尼考&17.48&24.31&19.09&16.71&12.07&9.02&7.54&鹽酸多西環(huán)素&13.29&12.63&11.36&10.23&9.23&8.72&8.09&氨芐西林&14.03&12.17&14.80&12.54&10.71&10.25&9.4&]

2.2 不同藥物及濃度對金黃色葡萄球菌抑菌試驗結(jié)果比較 由表2可知：（1）金黃色葡萄球菌對濃度為256μg/mL氧氟沙星低敏，隨藥物濃度降低，其敏感性逐漸減弱，達(dá)64μg/mL時則呈耐藥性；金黃色葡萄球菌對濃度為256μg/mL、128μg/mL、64μg/mL、32μg/mL氟苯尼考高敏，隨藥物濃度降低，其敏感性逐漸減弱，達(dá)4μg/mL時則呈耐藥性；金黃色葡萄球菌對濃度為256μg/mL、128μg/mL時鹽酸多西環(huán)素高敏，隨藥物濃度降低，其敏感性逐漸減弱，達(dá)4μg/mL時則呈耐藥性；金黃色葡萄球菌對氨芐西林低敏，藥物濃度對其抗菌作用不好。（2）在各濃度梯度下，氟苯尼考對金黃色葡萄球菌抑菌效果很好；鹽酸多西環(huán)素對金黃色葡萄球菌的抑菌效果好；氨芐西林、氧氟沙星對金黃色葡萄球菌抑菌效果不好。

表2 不同藥物及濃度下的金黃色葡萄球菌抑菌圈直徑（mm）

[藥物名稱&藥物濃度（μg/mL）&256&128&64&32&16&8&4&氧氟沙星&13.51&11.32&9.82&6*&6*&6*&6*&氟苯尼考&30.04&33.27&29.06&22.37&15.08&12.07&9.54&鹽酸多西環(huán)素&23.46&20.53&19.21&17.50&13.50&11.52&8.10&氨芐西林&11.23&12.28&12.49&12.17&11.51&10.12&9.24&]

注：6*表示除藥敏紙片6mm外無抑菌圈出現(xiàn)。

3 結(jié)論與討論

由本次試驗可知，氟苯尼考、氧氟沙星對大腸桿菌有較好的抑菌作用效果，氟苯尼考、鹽酸多西環(huán)素對金黃色葡萄球菌有較好的抑制效果。

紙片瓊脂擴(kuò)散法具有操作簡便、容易掌握等特點(diǎn)，并且該法已經(jīng)在養(yǎng)殖業(yè)用藥指導(dǎo)中起到了巨大的作用，目前在臨床中也已經(jīng)被認(rèn)為是一種最具有權(quán)威的用藥指導(dǎo)依據(jù)[3]。然而，紙片瓊脂擴(kuò)散法藥物敏感性試驗只是一種藥物敏感性定性試驗，在試驗中容易受到諸多因素的影響，主要為抗菌藥物、培養(yǎng)基、細(xì)菌、藥敏紙片、培養(yǎng)條件以及操作質(zhì)量等因素。

參考文獻(xiàn)

[1]任祥友，蔣瑞芹，崔玉芹.抗生素的細(xì)菌耐藥性及應(yīng)對措施[J].中國民康醫(yī)學(xué)，2010，22（13）:36-37.

[2]徐?；?，牛鐘相，張萬福，等.細(xì)菌耐藥性的研究進(jìn)展[J].山東農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2010，41（1）:156-160.

[3]王新海，曹慧，李全紅.自制藥敏紙片與簡易培養(yǎng)法在禽病防制中的應(yīng)用[J].中國禽業(yè)導(dǎo)刊，2006，（11）:22.

[4]Hiramatsu K，Hanaki H，et al. Methicillin-resistant Staphylococcus aureus clinical strain with reduced vancomycin susceptibility. [J]Antimicrob Chemother，1997，40: 135.

[5]龔云登，姚茂佳，向承西.雞大腸桿菌體外藥敏試驗觀察[J].恩施職業(yè)技術(shù)學(xué)院學(xué)報（綜合版），2005，17（1）:77-79.

（責(zé)編：張宏民）

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