河南省桐柏縣油田雙河醫(yī)院，河南 桐柏 474780

HPLC法測(cè)定首烏延壽片中大黃素的含量

吳紅

河南省桐柏縣油田雙河醫(yī)院，河南 桐柏 474780

目的：建立高效液相色譜法測(cè)定首烏延壽片中大黃素含量的方法。方法：采用Ulitimate 3000檢測(cè)，安捷倫反相C18柱(250mm×4.6mm)，流動(dòng)相:甲醇-0.2%磷酸溶液(82:18)；流速：1ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng):254nm；柱溫：25℃。結(jié)果：在0.03736～0.5136μg/ml的檢測(cè)范圍內(nèi)，對(duì)照品的濃度與峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系，回歸方程Y=3887X-1687(r=0.9997)，方法學(xué)考察符合要求。結(jié)論：本方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可用于該制劑的質(zhì)量控制和評(píng)價(jià)。

HPLC;首烏延壽片；大黃素；含量測(cè)定

首烏延壽片為制何首烏的單味浸膏片劑，具有補(bǔ)肝腎、養(yǎng)精血的功效[1]，主要用于肝腎兩虛，精血不足而致的頭暈?zāi)垦?、耳鳴健忘、腰膝酸軟等癥。此藥物在現(xiàn)行《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中并無含量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)。已有文獻(xiàn)報(bào)道對(duì)制何首烏中的2,3,5,4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷進(jìn)行測(cè)定[2]。大黃素作為其主要成分之一，目前在此類物質(zhì)中沒有相關(guān)報(bào)道，故提出建立高效液相色譜法測(cè)定首烏延壽片中大黃素含量測(cè)定的方法，以期為此藥物的含量測(cè)定、質(zhì)量控制提供一定參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 梅特勒XS-105型型電子分析天平(梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司)；Synergy UV型超純水儀(密理博(上海)貿(mào)易有限公司)；DZF-6050型真空干燥箱(上海一恒科技有限公司)； Dionex UltiMate3000型液相色譜儀(Dionex(中國(guó))有限公司)。

1.2 試藥 大黃素對(duì)照品(批號(hào)：20140308-20140708，國(guó)家藥品生物制品檢定所)；首烏延壽片(批號(hào)：130702、130308、130401);甲醇為色譜純;水為超純水;其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 對(duì)照品和供試品制備

2.1.1 對(duì)照品溶液的制備 取大黃素對(duì)照品，精密稱定10.15mg，置100ml容量瓶中，加甲醇置刻度，搖勻后精密量取5ml置25ml量瓶中，加甲醇稀釋置刻度，搖勻，同法稀釋若干次即得(每1ml含大黃素21.38μg)。

2.1.2 供試品溶液的制備 取本品1.50g，精密稱定，轉(zhuǎn)移置具塞錐形瓶中，用50ml移液管轉(zhuǎn)移甲醇50ml，稱重，置水浴中加熱回流3h，放置室溫后，再稱定重量，補(bǔ)足失重，搖勻，濾過，精密吸取續(xù)濾液5.0 ml，于50ml圓底燒瓶中，加鹽酸溶液(1→10)10ml，加兩倍體積氯仿，置水浴中加熱回流1h，放置至室溫，分液漏斗萃取若干次，取氯仿層，酸液再用氯仿提取2次，每次加兩倍體積氯仿，合并氯仿液，以無水硫酸鈉2g脫水，再用少量的氯仿洗滌容器及濾器，洗液并入氯仿液中，揮去氯仿，殘?jiān)眉状既芙獠⒍哭D(zhuǎn)移至25ml容量瓶中，補(bǔ)足甲醇至刻度，搖勻后用0.45μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，做供試品溶液。

2.2 色譜條件 采用安捷倫反相C18柱；流動(dòng)相：甲醇-0.2%磷酸溶液(82∶18)；流速：1.0ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)： 254nm；柱溫：25℃。理論板數(shù)符合標(biāo)準(zhǔn)，且主峰分離明顯，分離度R>1.5。見圖譜1。

2.3 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)

2.3.1 線性關(guān)系考察 將上述大黃素對(duì)照品溶液按一定比例稀釋，共得不同濃度對(duì)照品五份，按上述色譜條件分別進(jìn)樣測(cè)定，縱坐標(biāo)為峰面積，橫坐標(biāo)為大黃素的濃度(μg/ml)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為：Y=3887X-1687(r=0.9997)。結(jié)果表明在0.03736～0.5136μg范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。

2.3.2 方法學(xué)考察 根據(jù)藥典標(biāo)準(zhǔn)以及本品供試品制備過程，得到精密度RSD為0.56%，重復(fù)性RSD為1.69%，12h的穩(wěn)定性RSD為0.54%，且陰性對(duì)照實(shí)驗(yàn)顯示其他成分對(duì)本方法測(cè)定大黃素的含量無干擾。結(jié)果提示，此方法符合要求。

2.3.3 加樣回收率試驗(yàn) 參考“2.1.2”，取供試品1.5 g，精密稱定，按照高中低濃度加入大黃素對(duì)照品溶液，依法測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

表1 樣品回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.4 樣品測(cè)定 取3批樣品，按上述測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定，以外標(biāo)標(biāo)峰面積法計(jì)算樣品的含量，結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測(cè)定

3 討論

本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，本法線性關(guān)系好、回收率高、精密度準(zhǔn)確率等均符合藥典標(biāo)準(zhǔn)，操作簡(jiǎn)便，可作為首烏延壽片中大黃素的含量測(cè)定方法，用于該制劑的質(zhì)量控制。

[1] 李濤，王天志．HPLC測(cè)定制首烏及首烏延壽片中二苯乙烯苷的含量[J]．華西藥學(xué)雜志，2005，20(5)：436-438．

[2] 張國(guó)躍，羅定強(qiáng)，吳芳，等．HPLC法測(cè)定不同產(chǎn)地首烏延壽片中2,3,5,4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量[J]．西北藥學(xué)雜志，2007，22(5)：245-246．

R284.1

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1007-8517(2014)23-0013-01

2014.09.10)