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新疆維吾爾自治區(qū)喀什地區(qū)藥品檢驗(yàn)所，新疆 喀什 844000

HPLC法測定維藥羅補(bǔ)甫克比日丸中高良姜素的含量

司馬義江·阿布都熱西提阿依努爾·阿木提

新疆維吾爾自治區(qū)喀什地區(qū)藥品檢驗(yàn)所，新疆 喀什 844000

目的：高效液相色譜法測定羅補(bǔ)甫克比日丸中高良姜素的含量。方法：甲醇-0.2%磷酸溶液(65∶35)；流速lml/min；檢測波長266nm；柱溫：25℃；進(jìn)樣量：l0μl；分析方法：外標(biāo)法。結(jié)果：高良姜素在0.19～9.76μg范圍內(nèi)線性良好(r=1.0)，方法精密度RSD為0.7%(n=5)，平均回收率為98.65%，RSD為1.6%(n=6)。結(jié)論：該方法簡便、準(zhǔn)確，測得結(jié)果穩(wěn)定性、重現(xiàn)性好，可作為該制劑中高良姜素的含量測定方法。

HPLC；高良姜素；羅補(bǔ)甫克比日丸；含量測定

〗羅補(bǔ)甫克比日丸是新疆維吾爾族名藥之一，具有溫補(bǔ)腦腎、益心填精的功效，主要用于陽痿、抑郁、早泄、滑精、體虛、消瘦、神經(jīng)衰弱。配方主要由牛鞭、肉桂、苜蓿子、洋蔥子、丁香、花椒、胡蘿卜子、甜瓜子、巴丹仁、韭菜子等30味藥材組成，屬部頒標(biāo)準(zhǔn)維吾爾藥分冊收錄品種[1]。多味藥材組成制劑的藥理作用，來自于每一味藥材藥理作用的互相協(xié)調(diào)的綜合結(jié)果。考查多味藥材組成的藥物制劑質(zhì)量的時(shí)候應(yīng)考慮每一味組分的質(zhì)量。研究測定高良姜素的含量測定方法可以為該制劑的質(zhì)量控制提供依據(jù)。

1 儀器和試藥

1.1 儀器 島津高效液相色譜系統(tǒng)：包括LC20AT型雙泵，SIL20AC型自動進(jìn)樣器，SPDM 20A型PDA檢測器； BP211D型分析天平(德國Sartorius公司)。

1.2 試藥 高良姜素對照品(批號：111699-200602)由中國食品藥品檢定院提供；羅補(bǔ)甫克比日丸(批號：20130830、20130836、20120419)由和田維吾爾藥業(yè)有限責(zé)任公司生產(chǎn);甲醇為色譜純(美國TEDIA試劑公司)；水為重蒸餾水；其它試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：島津VP-ODS(250×4.6mm，5μm)；流動相：甲醇-0.2%磷酸溶液(65∶35)；流速lml/min；檢測波長266nm；柱溫：25℃；進(jìn)樣量：l0μl；分析方法：外標(biāo)法[2]。

2.2 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn) 按照對照品溶液制備方法及供試品溶液配制方法配分別制成對照品溶液及供試品溶液，按預(yù)定的色譜條件，分別進(jìn)樣10μl，采集光譜數(shù)據(jù)。結(jié)果顯示，供試品溶液與對照品溶液的色譜峰一致。保留時(shí)間為10.3min。

2.3 對照品溶液的配制 精密稱取高良姜素對照品，加甲醇溶解，搖勻并稀釋制成97.60μg/ml的對照品溶液儲備液。

2.4 供試品溶液的配制 取樣品(批號：20130830、20130836、20120419)50粒，研碎，稱取1g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，稱定重量，加熱回流4h，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)過濾，取續(xù)濾液即得。

2.5 線性關(guān)系考察 精密量取對照品儲備液(97.6μg/ml)0.2、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、10.0ml，置100ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別取10μl，按“2.1”色譜條件下操作，以8次測定的峰面積平均值考察線性范圍。線性方程為：A=4.68×106C-3.49×104(r=1.0)，結(jié)果表明，高良姜素在0.1952～9.760μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.6 精密度實(shí)驗(yàn) 精密量取對照品溶液儲備液(97.6μg/ml)2ml置50ml量瓶中加甲醇稀釋至刻度，搖勻，取10μl，重復(fù)進(jìn)樣5次，以峰面積計(jì)算RSD(n=5) 為0.22%。證明本法有較高的精密度。

2.7 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取同一批號本品(20130830)，按“2.4”方法配制溶液，分別于0、1、2、4、6h進(jìn)樣，進(jìn)樣量為10μl，測定高良姜素的峰面積，RSD為1.42%。

2.8 重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn) 取同一批號本品(20130830)，按“2.4”方法平行制備5份樣品溶液，在按“2.2”的方法進(jìn)行測定，并對所得數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，結(jié)果測得高良姜素平均含量(n=6)為256.1μg/g，RSD為1.2%。結(jié)果表明方法的重復(fù)性較好。見圖1。

2.9 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 精密量取已知含量的樣品(批號：20130830，含量256.1μg/g)，稱取1g，精密稱定，精密加入對照品溶液儲備液2ml，再按“2.4” 方法平行制備6份樣品溶液，用微孔濾膜(0.45μm)過濾，取續(xù)濾液，作為加樣回收率樣品。按照樣品測定項(xiàng)下的方法測定含量，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.10 樣品測定 取3批樣品按“2.4”方法制備供試品溶液，按“2.1”色譜條件下測定，按外標(biāo)法計(jì)算高良姜素的含量。結(jié)果見表2。

表2 羅補(bǔ)甫克比日丸中高良姜素的含量測定結(jié)果(mg/g，n=3)

3 討論

3.1 檢測波長的驗(yàn)證 取高良姜素對照品儲備液(97.60μg/ml)用甲醇稀釋成9.760μg/ml溶液，用紫外可見分光光度計(jì)于240～300nm處進(jìn)行掃描，從其紫外圖譜中可見其在266nm處有比較強(qiáng)的最大吸收，與有關(guān)參考文獻(xiàn)[3]報(bào)道的266nm一致，故選擇266nm為檢測波長。

3.2 流動相的選擇 根據(jù)參考文獻(xiàn)報(bào)道的方法試驗(yàn)，流動相用甲醇-0.2%磷酸溶液(55∶45)[2]，甲醇-0.4%磷酸溶液(60∶40)[3]，在該制劑中高良姜素的分離效果均不佳，通過不斷改變甲醇與0.2%磷酸溶液的比例及流速，選定甲醇-0.2%磷酸溶液(65∶35)及流速lml/min比較合適，分離度好且保留時(shí)間適宜。

3.3 提取方法的選擇 根據(jù)參考文獻(xiàn)[2]甲醇作為溶劑采用加熱回流1、2、4h，結(jié)果加熱回流2h和4h的測定結(jié)果接近，為保證提取完全，確定加熱回流4h。

本實(shí)驗(yàn)測定了和田維吾爾藥業(yè)有限責(zé)任公司不同批號的羅補(bǔ)甫克比日丸中高良姜素的含量，結(jié)果表明所建立的方法簡單，可靠，重現(xiàn)性好，結(jié)果準(zhǔn)確，為羅補(bǔ)甫克比日丸的質(zhì)量控制提供了有效的依據(jù)。

[1] 國家藥典委員會．衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)(維吾爾藥分冊)[S]．1998：194．

[2]國家藥典委員會．中華人民共和國藥典(一部)[M]．北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：270-271，附錄36．

[3] 李智勇，孫冬梅．HPLC法測定高良姜中高良姜素和山奈素的含量[J].中華中醫(yī)藥雜志，2010，25(9)：1368-1370．

DeterminationofgalangalinUygurMedicinePreparationLuobupukebiriPillsbyHPLC

Simayijiang·Abudurexiti,Ayinuer·amuti

Kashi Institute for Drog Control，Kashi 844000，China

ObjectiveDetermination ofLuobupukebiri Pills solution of galangal.MethodsA Methanol-0.2% phosphoric acid(65:35); flow lml/min; detection wavelength 266 nm column temperature: 25℃; injection volume: l0μL; analysis methods: external standard method.ResultsIn 0.19～9.76μg. range of good linearity (r=1.0), method precision was RSD = 0.7% (n= 5), the average recovery was 98.65%,RSD was 1.6% (n= 6).ConclusionsThe method is simple, accurate, reproduciblemeasuredresults are stableand can be usedinthe preparationmethod for the determinationofgalangal.

HPLC；Galangin；Luobupukebiri Pills；content determination

司馬義江·阿布都熱西提(1973-)，男，本科，副主任藥師。

R284.1

A

1007-8517(2014)23-0008-02

2014.09.10)