齊亞靈 王偉群 楊廣民 陳玉強(qiáng) 王景霞 王淑英 李 堯 方艷秋

(佳木斯大學(xué)，黑龍江 佳木斯 154002)

pcIL-18/MAGE-1共表達(dá)基因疫苗免疫C57BL/6J小鼠可以提高其免疫功能〔1〕。用脂質(zhì)體介導(dǎo)方法，將MAGE-1基因轉(zhuǎn)染Hepal-6細(xì)胞，獲得穩(wěn)定表達(dá)MAGE-1基因的Hepal-6-MAGE-1細(xì)胞〔2〕。本實(shí)驗(yàn)觀察pcIL-18-MAGE-1疫苗對(duì)MAGE-1(+)及MAGE-1(-)荷瘤小鼠成瘤情況及生存情況的影響。

1 材料和方法

1.1材料 質(zhì)粒pcDNA3、pcIL-18-pcMAGE-1、肝癌細(xì)胞株Hepal-6以及穩(wěn)定表達(dá)Hepal-6-MAGE-1細(xì)胞株為吉林省人民醫(yī)院腫瘤生物治療中心提供。清潔級(jí)雌性C57BL/6J小鼠60只(中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所)，體重(20±2)g，自由食水，無(wú)菌動(dòng)物室飼養(yǎng)。IMDM 細(xì)胞培養(yǎng)液、胎牛血清(武漢博士德公司)。HF240二氧化碳培養(yǎng)箱(上海斯高勒生物科技有限公司)，游標(biāo)卡尺。

1.2實(shí)驗(yàn)分組 小鼠隨機(jī)分為6組各10只，見(jiàn)表1。

1.3免疫方法及模型制作 取100 μg質(zhì)粒(0.4 ml 3%氫氧化鋁膠)，小鼠大腿內(nèi)側(cè)肌群肌注。每隔10 d注射1次，共3次。陰性對(duì)照組與空白對(duì)照組分別注射等量pcDNA3與生理鹽水，末次注射7 d后，每只鼠取2×106個(gè)/0.1 ml對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期Hepal-6-MAGE-1細(xì)胞，接種于C57BL/6J小鼠腰肋部皮下，制作MAGE-1(+)荷瘤鼠；取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期Hepa1-6細(xì)胞，按照相同的量與部位接種于C57BL/6J小鼠，制作MAGE-1(-)荷瘤鼠。

表1 實(shí)驗(yàn)分組及免疫藥物

1.4檢測(cè)指標(biāo) 成瘤時(shí)間即最早捫及皮下結(jié)節(jié)時(shí)間(腫瘤直徑達(dá)3 mm時(shí)，可捫及皮下結(jié)節(jié))；腫瘤體積：每3天測(cè)量腫瘤的最大直徑a及最大橫徑b，共計(jì)測(cè)量6次，V=π/6×a×b2；腫瘤生長(zhǎng)速率：K=(InVt-InV0)/t〔3〕；荷瘤小鼠生存時(shí)間；HE染色法檢測(cè)瘤體病理結(jié)構(gòu)。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 使用SPSS19.0軟件進(jìn)行單因素方差分析和t檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1各組荷瘤小鼠成瘤情況 見(jiàn)表2。E組和F組成瘤后腫瘤體積、腫瘤生長(zhǎng)速率差異不顯著(P>0.05)。與B組比較，A組腫瘤生長(zhǎng)速率較低(P<0.05)，形成腫瘤時(shí)間較長(zhǎng)(P<0.05)，成瘤率較低(P<0.05)。A組生存時(shí)間雖然比B組長(zhǎng)，但差異不顯著(P>0.05)。A組和B組分別較C、E組與D、F組抑瘤效果顯著(P<0.05)。

表2 各組荷瘤小鼠腫瘤生長(zhǎng)相關(guān)指標(biāo)±s,n=10)

2.2荷瘤小鼠瘤體病理結(jié)構(gòu) 腫瘤外觀呈卵圓形，質(zhì)軟，A、B組未發(fā)現(xiàn)中央組織壞死。C、E、D、F組裸鼠自然死亡后解剖可見(jiàn)中央組織壞死，HE染色見(jiàn)腫瘤細(xì)胞大小不一，排列欠規(guī)則，多見(jiàn)病理性核分裂，血管豐富，間有少許淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)。見(jiàn)圖1。

圖1 各組小鼠成瘤情況(HE，×10)

3 討 論

MAGE-1基因、蛋白在多種惡性腫瘤組織中高表達(dá)，而在正常組織中不表達(dá)特性，表明MAGE可以作為抗原特異性抗腫瘤生物治療的靶點(diǎn)〔4〕。本文說(shuō)明用兩種方法制作的荷瘤小鼠腫瘤生長(zhǎng)相關(guān)指標(biāo)一致，可以進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。pcIL-18-pcMAGE-1基因疫苗對(duì)腫瘤的生成、生長(zhǎng)起到一定抑制作用。針對(duì)MAGE-1基因，可以有效防治腫瘤的發(fā)生發(fā)展〔5〕。

4 參考文獻(xiàn)

1時(shí) 陽(yáng)，楊廣民，李首慶，等.MAGE-1與IL-18共表達(dá)DNA疫苗的構(gòu)建與體外表達(dá)〔J〕. 中國(guó)老年學(xué)雜志，2007；27(19)：1865-8.

2楊廣民，齊亞靈，李首慶，等.pcDNA3-MAGE-1真核表達(dá)載體的構(gòu)建及其在Hepa1-6細(xì)胞中的穩(wěn)定表達(dá)〔J〕.吉林大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2010；36(1):49-53.

3畢允力，高解春，姚 明.腎母細(xì)胞瘤裸鼠移植瘤模型的建立及其生物學(xué)特性〔J〕.中華小兒外科雜志，2000；21(2): 115-8.

4梁 爽，王曉華，趙艷明，等.直腸癌中腫瘤/睪丸抗原相關(guān)基因的表達(dá)〔J〕. 中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，2011；15(1)：91-3.

5陳雪華，劉炳亞，張冬青，等.MAGE-1、MAGE-3基因在胃癌和胃活檢組織中的表達(dá)及意義〔J〕. 細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志，2004；20(3)：310-3.