宋玉光 葉蜀新 林 海

(宜賓市第二人民醫(yī)院骨科,四川 宜賓 644000)

膝骨性關(guān)節(jié)炎是中老年較為常見的慢性關(guān)節(jié)炎，發(fā)病因素復(fù)雜，引起患者的關(guān)節(jié)退化、軟骨組織破壞以及周圍軟組織損傷〔1〕。相關(guān)的研究已經(jīng)表明炎性介質(zhì)與該疾病的發(fā)生有著緊密的聯(lián)系，多種細胞因子參與膝骨性關(guān)節(jié)炎的發(fā)生〔2〕。研究證實，臭氧能夠改善膝骨性關(guān)節(jié)炎患者的臨床癥狀，具有抗炎、止痛療效，改善患者的臨床癥狀〔3,4〕。但是，還沒有臭氧治療膝骨性關(guān)節(jié)炎相關(guān)機制的報道。本研究探討臭氧對兔膝骨性關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)沖洗液中細胞因子白介素(IL-1β)、腫瘤壞死因子(TNF)-α和一氧化氮(NO)含量的影響，為膝骨性關(guān)節(jié)炎的臨床治療提供參考依據(jù)。

1 資料和方法

1.1一般資料 選取40只膝骨性關(guān)節(jié)炎模型新西蘭兔8～15月齡，體重2.4～2.7 kg，雌雄不限。隨機將其分為模型對照組和觀察組，各20只，同時選取20只健康新西蘭兔設(shè)為健康對照組。三組兔月齡、體重以及性別等一般資料比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2研究方法 采用石膏將新西蘭兔的左膝關(guān)節(jié)固定于伸直位，范圍為踝關(guān)節(jié)下3 cm到腹股溝1.5 cm。建立模型的新西蘭兔均為單籠喂養(yǎng)，并強迫其活動。6 w后，隨機處死1只新西蘭兔，病理檢查膝骨性關(guān)節(jié)炎的模型是否建立成功。確認模型建立成功后，去除固定，并剃毛。健康對照組新西蘭兔不采取任何處理〔5〕。

觀察組采用1 ml(20 μg/ml)臭氧關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射治療〔6〕，健康對照組和模型對照組兔注射空氣作對照，三組均治療1次/w，共治療2 w。分別于治療前和治療后48 h采用穿刺方法收集所有動物的膝關(guān)節(jié)沖洗液約0.8 ml，將采集的樣本保存于-20℃低溫冰箱以備檢測。

1.3觀察指標 分別檢測所有實驗動物關(guān)節(jié)沖洗液樣本中IL-1β、TNF-α和NO的含量。 IL-1β和TNF-α的檢測采用酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法，檢測試劑盒購于上海逸峰生物科技有限公司，每個樣本設(shè)5個復(fù)孔，結(jié)果取平均值。NO的檢測采用熒光法，試劑盒購于艾美捷科技有限公司。

2 結(jié) 果

模型對照組和觀察組兔治療前膝關(guān)節(jié)沖洗液中IL-1β、TNF-α和NO的含量明顯高于健康對照組(P<0.05)；觀察組兔治療后膝關(guān)節(jié)沖洗液中IL-1β、TNF-α和NO的含量明顯低于模型對照組(P<0.05)；健康對照組和模型對照組兔治療前后膝關(guān)節(jié)沖洗液中IL-1β、TNF-α和NO的含量變化無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 三組兔治療前后膝關(guān)節(jié)沖洗液中IL-1β、TNF-α和NO的含量變化

3 討 論

膝骨性關(guān)節(jié)炎稱為增生性、肥大性或退行性骨關(guān)節(jié)炎，嚴重者甚至可能導(dǎo)致患者殘疾〔7〕。目前，臨床治療膝骨性關(guān)節(jié)炎的主要措施以緩解患者疼痛為主，但無法阻止或者逆轉(zhuǎn)膝骨性關(guān)節(jié)炎的進展。相關(guān)研究表明臭氧治療能夠明顯改善膝骨性關(guān)節(jié)炎患者的臨床癥狀，減少炎癥組織充血、促進水腫消散以及降低局部溫度〔8〕。但是對于其治療機制尚不完全清楚。

相關(guān)研究證實，膝骨性關(guān)節(jié)炎患者關(guān)節(jié)液中的IL-1β、TNF-α和NO的含量明顯升高〔9,10〕。在膝骨性關(guān)節(jié)炎的病情發(fā)展過程中，IL-1β可能會通過促進蛋白溶解液的合成，以進一步加速軟骨基質(zhì)的降解，并影響其他細胞因子在軟骨和滑膜修復(fù)和代謝中的功能〔11〕。此外，TNF-α還可以促進滑膜成纖維樣細胞的增殖，從而誘導(dǎo)滑膜組織纖維化，進而改變關(guān)節(jié)軟骨的微環(huán)境，促進膝骨性關(guān)節(jié)炎病情的進展〔12〕。相關(guān)學者認為，過量的NO能夠抑制蛋白聚糖的合成，促進軟骨細胞的凋亡和軟骨的分解，導(dǎo)致軟骨基質(zhì)的降解〔13〕。因此，NO也被認為是膝骨性關(guān)節(jié)炎發(fā)生中的重要影響因素。

相關(guān)研究表明，臭氧能夠促進IL-1β、TNF-α和NO等細胞因子拮抗劑的釋放，從而起到降低IL-1β、TNF-α和NO等細胞因子含量的功能；此外，臭氧自身也可以直接抑制IL-1β、TNF-α和NO等細胞因子的釋放，促進超氧化物歧化酶以及谷胱甘肽超氧化物酶等抗氧化酶的產(chǎn)生，促進間質(zhì)細胞和關(guān)節(jié)軟骨合成，刺激軟骨和纖維原細胞增殖，修復(fù)受損組織〔14〕。

4 參考文獻

1Morgan TG,Rowan AD,Dickinson SC,etal. Human nasal cartilage responds to oncostatin M in combination with interleukin 1 or tumour necrosis factor alpha by the release of collagen fragments via collagenases〔J〕. Ann Rheum Dis,2006;65(2):184-90.

2覃瑜芳,金先躍,唐四桂,等.老年性膝骨性關(guān)節(jié)炎等離子刀手術(shù)的圍術(shù)期護理〔J〕.廣西醫(yī)學,2008;30(5):757-8.

3周 鈺,楊曉嬡,張政軍,等.銀質(zhì)針結(jié)合關(guān)節(jié)腔臭氧注射治療膝骨關(guān)節(jié)炎的近期臨床觀察〔J〕.寧夏醫(yī)科大學學報,2010;32(5):622-4.

4任 芹,趙序利,萬燕杰.醫(yī)用臭氧治療膝骨性關(guān)節(jié)炎的療效觀察〔J〕.實用疼痛學雜志,2006;2(2): 67-9.

5陳 波，謝西梅，李佳霖,等.艾灸治療對兔KOA軟骨損傷及TNF-α、TGF-β1和IGF-1表達調(diào)節(jié)作用的實驗研究〔J〕.江蘇中醫(yī)藥,2009;41(6):69-71.

6畢 勝,王福根,侯京山,等.細胞因子在髕下脂肪墊損傷動物模型中的變化〔J〕.中國疼痛醫(yī)學雜志,2000;6(2): 86-8.

7李卓東,曹烈虎,王思成,等.艾灸治療膝骨性關(guān)節(jié)炎療效與血清和關(guān)節(jié)液中透明質(zhì)酸含量關(guān)系的臨床研究〔J〕.中國中西醫(yī)結(jié)合雜志,2009;29(10):883-5.

8田豐瑋,宋 軍,楊金蓉.艾葉油乳膏劑對兔膝骨性關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)沖洗液中細胞因子含量的影響〔J〕.中醫(yī)正骨,2005;17(12): 15-6.

9Schwab W,Schulze-Tanzil G,Mobasheri A,etal. Interleukin-1beta induced expression of the urokinase-type plasminogen activator receptor and its co-localization with MMPs in human articular chondrocytes〔J〕. Histol Histopathol,2004;19(1):105-12.

10Fernandes JC,Martel-Pelletier J,Pelletier JP. The role of cytokines in osteoarthritis pathophysiology〔J〕. Biorheology,2002;39(1):237-46.

11Kobayashi M,Squires GR,Mousa A,etal. Role of interleukin-1 and tumor necrosis factor alpha in matrix degradation of human osteoarthritic cartilage〔J〕. Arthritis Rheum,2005;52(1-2):128-35.

12Rowan AD,Hui W,Cawston TE,etal. Adenoviral gene transfer of interleukin-1 in combination with oncostatin M induces significant joint damage in a murine model〔J〕. Am J Pathol,2003;162(6):1975-84.

13Kay JD,Gouze E,Oligino TJ,etal. Intra-articular gene delivery and expression of interleukin-1Ra mediated by self-complementary adeno-associated virus〔J〕. J Gene Med,2009;11(7):605-14.

14Bocci V.Does ozone therapy normalize the cellular redox balance. Implications for the therapy of human immunodeficiency virus infection and several other diseases〔J〕.Med Hypotheses,1996;46(2):150-4.