陶 春 林 琳 宋葆華 強(qiáng) 欣 張 娟 湯文莉 劉月英

(內(nèi)蒙古民族大學(xué)醫(yī)學(xué)院，內(nèi)蒙古 通遼 028000)

蒙成藥扎沖十三味丸是蒙醫(yī)治療腦血管病的常用藥物，在蒙醫(yī)臨床腦梗死的治療中，發(fā)揮著極為重要的作用。本研究用大鼠大腦中動脈阻斷局灶性腦缺血(MCAO)模型，對模型行扎沖十三味丸預(yù)處理，比較模型組和扎沖十三味丸組大鼠神經(jīng)功能行為評分，比較腦組織梗死區(qū)重量及梗死區(qū)重量/全腦重量的大小，觀察腦缺血組織光鏡下病理結(jié)構(gòu)變化特點(diǎn)，探討蒙成藥扎沖十三味丸對腦缺血缺氧損傷的保護(hù)作用，進(jìn)一步明確其臨床療效，以指導(dǎo)臨床正確使用此藥。

1 材料與方法

1.1動物與分組 清潔級Wistar大鼠36只，體重220～260 g，雌雄不拘，由吉林大學(xué)實驗動物中心提供〔許可證：SCXK(吉)，2011-0004〕，動物分籠飼養(yǎng)(環(huán)境溫度24℃～26℃，濕度60%～70%)，自由飲水，術(shù)前12 h禁食。將大鼠隨機(jī)分為3組，即正常組、模型組、扎沖十三味丸組。

1.2試劑與儀器 扎沖十三味丸由內(nèi)蒙古民族大學(xué)附屬醫(yī)院提供，TTC溶液購于美國Sigma公司，水合氯醛為天津市河北區(qū)海晶精細(xì)化工廠產(chǎn)品。多聚甲醛購于上海凌風(fēng)化學(xué)試劑有限公司，PBS溶液購于博士德公司。

1.3方法

1.3.1給藥方法 扎沖十三味丸以蒸餾水配制成2%濃度，經(jīng)灌胃給藥，實驗前給藥，按5 ml/kg給藥。模型組均給予同量的蒸餾水。正常組在同一環(huán)境下飼養(yǎng)。

1.3.2模型建立 采用線栓法Zea-Longa〔1〕制備大鼠MCAO模型。將大鼠以10%水合氯醛腹腔注射麻醉后，40倍顯微鏡下手術(shù)，頸正中切口，分離右側(cè)胸鎖乳突肌，暴露右頸總動脈(CCA)和頸外動脈(ECA)顯露，沿著CCA向上分離，見分叉處，向內(nèi)行走分叉為ECA，向外下行走的為頸內(nèi)動脈(ICA)。結(jié)扎ECA，結(jié)扎CCA近心端，在距分叉處約1 cm的血管壁上剪一小口，沿切口插入栓線，將栓線送進(jìn)ICA。距離分叉處約2 cm，有阻力感，停止進(jìn)入?？p合皮膚，剪去暴露在外的栓線，術(shù)后注意保暖，大鼠麻醉清醒后進(jìn)行神經(jīng)行為學(xué)觀察。

1.3.3模型成功標(biāo)志 大鼠蘇醒后按Zea-Longa的5分評分標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行神經(jīng)功能缺失評分。0分：無明顯神經(jīng)損傷癥狀；1分：不能完全伸展對側(cè)前爪；2分：行走時向?qū)?cè)旋轉(zhuǎn)；3分：行走時向?qū)?cè)傾倒；4分：不能自發(fā)行走，意識喪失。

1.3.4指標(biāo)檢測 在造模清醒后，全部選擇行走時向?qū)?cè)旋轉(zhuǎn)的模型大鼠為有效模型，評分為2分的大鼠，觀察期內(nèi)，沒入選及死亡的大鼠予以剔除，剩余每組6只，在手術(shù)后24 h處死前再次評分。

1.3.5腦梗死體積測定 每組6只大鼠，在手術(shù)后24 h，麻醉后處死，快速取出腦組織，放入-20℃冰箱中冷凍15 min， 自額極向后冠狀面切成2 mm厚切片，放入1%TTC溶液中，避光，37℃水浴箱中孵育30 min，PBS液沖洗后置4%多聚甲醛固定。

1.3.6取腦組織做HE染色 取4%多聚甲醛中固定的腦組織，HE染色，光鏡下觀察其病理變化特點(diǎn)。

2 結(jié) 果

2.1扎沖十三味丸預(yù)處理對大鼠神經(jīng)功能缺損的影響 MCAO造模手術(shù)結(jié)束后， 除正常組外，選擇所有在術(shù)畢清醒后向?qū)?cè)旋轉(zhuǎn)的腦缺血大鼠，神經(jīng)功能缺損癥狀均為2分，造模成功，24 h后，處死前再次評分，結(jié)果如下：模型組：3分的有3只，4分的有2只，2分的有1只，平均神經(jīng)功能缺損為(3.167±0.408)分；扎沖十三味丸組，1分的有5只，2分的有1只，平均神經(jīng)功能缺損評分為(1.167±0.753)分。經(jīng)過預(yù)處理，扎沖十三味丸組神經(jīng)功能缺損癥有5只明顯好轉(zhuǎn)，有1只沒有明顯改變，模型組都有不同程度的嚴(yán)重，3只3分，2只4分，1只變化不明顯。

2.2扎沖十三味丸對腦梗死重量的影響 正常組腦組織顯示為紅色，未現(xiàn)蒼白色區(qū)域；模型組右側(cè)半球見部分白色的梗死組織，左側(cè)為紅色，見圖1，扎沖十三味丸組雖然也出現(xiàn)梗死，但梗死體積明顯小于模型組，吸去標(biāo)本水分，分離白色區(qū)域和紅色區(qū)域，分別稱重，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)比較，扎沖十三味丸組腦梗死區(qū)重量及梗死區(qū)/全腦重量均較模型減少，與模型組比較，均存在顯著性差異(P<0.05)。見圖1，表1。

表1 扎沖十三味丸預(yù)處理后大鼠腦梗死重量

圖1 各組大鼠腦梗死組織

2.3扎沖十三味丸預(yù)處理對腦梗死病理學(xué)的影響 模型組大鼠腦組織水腫，結(jié)構(gòu)疏松，染色變淺，細(xì)胞稀疏，胞質(zhì)色淺，水腫空泡形成，大量神經(jīng)元變性，且見其內(nèi)有大小不等的圓形或類圓形空泡，可見較多的壞死神經(jīng)元，神經(jīng)元結(jié)構(gòu)模糊或破壞，細(xì)胞核結(jié)構(gòu)模糊、固縮、碎裂、扎沖十三味丸組上述癥狀均有明顯改善，神經(jīng)元存活的數(shù)量增多，結(jié)構(gòu)清晰且完整。正常組大鼠腦組織無病理學(xué)改變。見圖2。

圖2 各組大鼠腦梗死病理學(xué)觀察(HE，×100)

3 討 論

大腦中動脈是人類腦梗死最易發(fā)部位，大鼠的大腦中動脈的解剖分布與人類相似，因此我們采用線栓法制作大鼠局灶性大腦中動脈，阻斷血流，造成腦梗死模型，可模擬人類腦梗死的發(fā)病過程。線栓法因為無須開顱，創(chuàng)傷小，不影響缺血后腦水腫和顱內(nèi)壓變化等自然過程而成為應(yīng)用最廣泛的局灶性腦缺血模型〔2〕。

蒙成藥扎沖十三味丸(又名嘎日迪十三 )是蒙醫(yī)臨床常用的傳統(tǒng)方劑之一，此藥出自《蒙醫(yī)經(jīng)典》〔3〕,由訶子、制草烏、石菖蒲、木香、麝香、珊瑚(制)、珍珠(制)、丁香、沉香、禹糧土、磁石(煅)、甘草、肉豆蔻 13 味藥組成，主要功能為祛風(fēng)通竅、舒筋活血、鎮(zhèn)靜安神，在蒙醫(yī)臨床主治半身不遂、左癱右瘓、口眼歪斜、四肢麻木、腰腿不利、言語不清、筋骨疼痛、神經(jīng)麻痹等癥〔4〕。蒙醫(yī)臨床廣泛用于腦中風(fēng)、腦偏癱等多種腦血管疾病，據(jù)報道有減輕神經(jīng)和認(rèn)知功能障礙的功能的作用〔5，6〕，在以前的研究中我們發(fā)現(xiàn)，扎沖十三味丸能減少腦組織缺血大鼠細(xì)胞凋亡的作用〔7〕。本研究證實扎沖十三味丸可明顯促進(jìn)大鼠局灶性腦梗死后神經(jīng)功能恢復(fù)，減小腦梗死體積，改善腦梗死后的病理損傷。

4 參考文獻(xiàn)

1Zea Longa EZ，Weinstein PR，Carlson S，etal.Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats〔J〕.Stroke，1989；20(1)：84-91.

2張綦慧，張允嶺，陳志剛，等.腦缺血動物模型研究進(jìn)展〔J〕.遼寧中醫(yī)雜志，2010；(8)：1618-20.

3國家藥典委員會.中國藥典〔S〕.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：190.

4林 琳，陶 春，湯文麗，等.扎沖十三味丸的藥理與臨床研究概況〔J〕.內(nèi)蒙古民族大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版)，2010;25(1)：10-1.

5李月玲，楊玉梅，張 東，等.扎沖十三味片對大鼠局灶性腦缺血的保護(hù)作用〔J〕.中國民族醫(yī)藥雜志，2009；15(8) ：55-6.

6張浩楠，張 東，楊玉梅，等.扎沖十三味不同工藝處方對腦缺血的保護(hù)作用〔J〕.包頭醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2011；27(1) ：91-2.

7陶 春，翟景波，劉 鑫，等.蒙成藥扎沖十三味丸對大鼠腦缺血組織細(xì)胞凋亡的影響〔J〕.中風(fēng)與神經(jīng)疾病雜志，2013；7(30)：642-4.