李 光 金 寧 劉 明 曲立成 沈 騰 李 海 張 茁 那萬里

(吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院泌尿外科，吉林 長春 130033)

膀胱癌是泌尿系統(tǒng)中最常見的惡性腫瘤，并且是一個多因素、多基因作用的復(fù)雜過程，其發(fā)生、發(fā)展及惡性程度與癌基因的激活和抑癌基因的失活密切相關(guān)。由于關(guān)于多個基因在膀胱癌中表達(dá)意義的相關(guān)報(bào)道較少。本研究就P53、抑癌基因(PTEN)、增生性細(xì)胞核抗原(PCNA)基因在膀胱癌患者中的表達(dá)及病理分級的關(guān)系與正常膀胱組織中的表達(dá)進(jìn)行對比。

1 材料與方法

1.1一般資料 選擇我院2005～2013年手術(shù)切除的膀胱癌標(biāo)本，術(shù)前均未經(jīng)過任何抗腫瘤治療，共40例。其中男24例，女16例；年齡35～77〔平均(56±7.5)〕歲。病理分級按WHO分級標(biāo)準(zhǔn)，Ⅰ級10例，Ⅱ級16例，Ⅲ級14例。

1.2方法 P53、PTEN、PCNA基因均采用免疫組化(SP)法，全部標(biāo)本均經(jīng)10%甲醛常規(guī)固定，石蠟包埋，作4 μm厚連續(xù)切片，分別作蘇木素-伊紅(HE)染色和P53、PTEN、PCNA SP染色，染色后細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核呈棕黃色，輪廓清楚。所有試劑均購于福建福州邁新公司。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS13.0軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

40例膀胱癌中P53蛋白表達(dá)陽性22例(55.0%)，PTEN 17例(42.5%)，PCNA 25例(62.5%)。P53(本實(shí)驗(yàn)檢測的均為突變型P53)陽性反應(yīng)定位于細(xì)胞核，在正常組織中表達(dá)率為10%(1/10)。PTEN陽性反應(yīng)大多定位于細(xì)胞質(zhì)，在正常膀胱組織中的陽性表達(dá)率為90.0%(9/10)。PCNA陽性反應(yīng)定位于細(xì)胞核，在正常組織中的表達(dá)率為10%(1/10)。三者在膀胱癌和正常膀胱組織中的表達(dá)比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。見表1，圖1。

P53

PTEN

PCNA

表1 P53、PTEN、PCNA基因在不同級別的膀胱癌中的表達(dá)〔n(%)〕

3 討 論

膀胱癌發(fā)病率居泌尿系腫瘤的首位,且異型性很強(qiáng)。分子生物學(xué)的研究表明，腫瘤的發(fā)生與基因的改變，特別是原癌基因的激活及抑癌基因的失活有非常密切的關(guān)系。分離并鑒定這些癌基因與膀胱腫瘤惡性度的相關(guān)性，對于腫瘤的診斷和治療具有重要的價(jià)值。有研究〔1〕指出，至少有兩個或兩個以上功能不同的癌基因的激活，才可能引起細(xì)胞的癌變。與膀胱癌相關(guān)的基因有很多，包括P16、Rb基因、PCNA、ras基因、c-myc癌蛋白、P53、cyclinD1、PTEN、CDK4等等。其中P16基因在國內(nèi)外報(bào)道較多，均證實(shí)其與膀胱癌的惡性度密切相關(guān)。Rb基因的缺失、突變、甲基化表達(dá)失活與膀胱癌的發(fā)生亦聯(lián)系緊密。ras基因其活化方式以點(diǎn)突變?yōu)橹?，?dǎo)致細(xì)胞生長信號的傳遞發(fā)生異常，促使細(xì)胞惡變〔2〕。c-myc癌蛋白的表達(dá)與淺表膀胱癌的復(fù)發(fā)、 浸潤有關(guān)。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，c-myc癌基因的甲基化水平與膀胱癌的分期、分級相關(guān)〔3〕。cyclinD1和CDK4的過度表達(dá)可能引起細(xì)胞異常增殖和分化失控，最終致腫瘤的發(fā)生，其表達(dá)水平的變化，亦可作為膀胱癌生物學(xué)行為的指標(biāo)。

P53基因是在ST40大T抗原基因轉(zhuǎn)移的細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的，F(xiàn)inlay等〔4〕在研究轉(zhuǎn)化時(shí)發(fā)現(xiàn)野生型P53基因能抑制細(xì)胞的轉(zhuǎn)化，突變型P53基因則能促進(jìn)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化。因?yàn)橐吧蚉53蛋白半衰期短，在細(xì)胞中含量低，一般方法難以檢出，而突變型P53能與一些蛋白形成穩(wěn)定復(fù)合物，使半衰期大為延長，在細(xì)胞核內(nèi)聚焦而被檢出〔5〕。本研究結(jié)果與國內(nèi)外報(bào)道相似，P53基因與膀胱癌分化程度呈負(fù)相關(guān)〔6〕。

PTEN是第一個被發(fā)現(xiàn)具有磷酸酶活性的抑癌基因，參與氨酸磷酸酶和絲氨酸/蘇氨酸磷酸酶介導(dǎo)的信號傳導(dǎo)過程，使第二信使PIP3去磷酸化，從而抑制細(xì)胞生長和凋亡，其異常表達(dá)已證實(shí)與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)〔7〕，F(xiàn)isher等〔8〕研究顯示，PTEN基因失表達(dá)與膀胱癌的惡性程度相關(guān)，在腫瘤演變中起重要作用。本研究提示PTEN基因表達(dá)缺失是在膀胱癌發(fā)生過程的早期事件，在腫瘤進(jìn)展過程中也發(fā)揮重要作用。

PCNA是一種與細(xì)胞周期相關(guān)的蛋白，是從細(xì)胞核內(nèi)分離純化的一種多肽鏈，能與DNA多聚酶輔助蛋白腫瘤的惡性程度結(jié)合，是細(xì)胞核內(nèi)合成DNA所必需的一種核蛋白，參與細(xì)胞DNA的復(fù)制，其表達(dá)水平反應(yīng)腫瘤細(xì)胞增殖分?jǐn)?shù)和所處周期的客觀指標(biāo)，也可以判定腫瘤的惡性程度〔9,10〕。

綜上，P53、PTEN、PCNA基因與膀胱癌的發(fā)生發(fā)展有密切關(guān)系，PTEN 失活是膀胱癌發(fā)生的早期事件，可作為早期診斷的標(biāo)記物，隨著腫瘤惡性度的增高，表達(dá)明顯下降；P53，PCNA基因的過度表達(dá)是膀胱癌高度惡性的標(biāo)志之一。多種癌基因異常表達(dá)作為膀胱癌惡性程度的評價(jià)指標(biāo)更具價(jià)值。

4 參考文獻(xiàn)

1Kantoff PW. Bladder cancer〔J〕. Curr Prob Cancer，1990；14(5):233-92.

2Masters JR，Vesey SG，Munn CF，etal.C-myc concoprotein levels in bladder cancer 〔J〕. Urol Res，1988;16(5):341-4.

3Moriyama M，Akiyama T，Yamamoto T，etal.Expression of c-erbB-2 gene product in urinary bladder cancer 〔J〕. J Urol，1991；145(2):423.

4Finlay CA，Hinds PW，Lerine AJ,etal.The P53 protooncogene can act as suppressor of transformation〔J〕.Cell,1989;57:1083.

5Carlos CC,Sazz MR,Oliva ZFZ,etal.P53 mutations in human bladder cancer:genotypic versus phenotypic patterns〔J〕.Int Cancer,1994;56:347.

6齊艷麗,朱大勇，姜麗紅，等.PCNA與P53、P16、Rb基因在膀胱癌中的表達(dá)意義〔J〕.中國實(shí)用醫(yī)藥,2010;5(27):40.

7Kpksal IT,Yasar D,Dirice E,etal.Differential PTEN protein expression profiles in superficial versus invasive bladder cancers〔J〕.Urol Int,2005;75(2):102-6.

8Fisher CA,Kampmann M,Zlobec I.P16 expression in poropharyngeal cancer:its impact on staging and prognosis compared with the conventional clinical staging parameters〔J〕.Ann Oncol,2010;21(10):1961-6.

9孔垂?jié)桑瑒⑼?腎盂輸尿管癌中P53基因突變及增殖細(xì)胞核抗原表達(dá)的臨床意義〔J〕.中華腫瘤雜志，1996;35(6):436.

10居紅格，沈淑萍，耿 紅，等.P16、P53、PCNA在膀胱癌中的表達(dá)及意義〔J〕.包頭醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2009;25(6):12.