廣西醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，廣西 南寧 530021

白木通醇提取物體外抗腫瘤活性研究

唐燕霞孫悅文梁鋼*

廣西醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，廣西 南寧 530021

目的研究白木通乙醇提取物的體外抗腫瘤活性。方法采用乙醇回流提取制備白木通醇提取物，以MTT法檢測白木通醇提取物對人肝癌細(xì)胞SMMC-7721、BEL-7404，人鼻咽癌細(xì)胞CNE-1的生長抑制情況。結(jié)果白木通醇提取物體外對人肝癌細(xì)胞SMMC-7721、BEL-7404，人鼻咽癌細(xì)胞CNE-1有抑制增殖作用。結(jié)論白木通醇提取物具有一定的體外抗腫瘤活性。

白木通醇提取物體；抗腫瘤；肝癌；鼻咽癌

白木通Akebia trifoliata (Thunb.) Koidz. var. australis (Diels) Rehd.為木通科木通屬植物，其根、藤莖、葉、種子、果實(shí)皆可入藥，其主要藥用部位為藤莖和果實(shí)[1]。白木通的藤莖作為木通入藥，其味苦，性微寒，入心、小腸、膀胱經(jīng)，具清心火、利小便和通經(jīng)下乳之功效[2]。國內(nèi)外學(xué)者對木通屬植物的化學(xué)成分進(jìn)行了很多研究，并分離出了單體成分，但有關(guān)其藥效學(xué)，尤其是抗腫瘤作用方面的報(bào)道卻相對較少。本實(shí)驗(yàn)對白木通醇提取物在體外對人肝癌細(xì)胞SMMC-7721、BEL-7404，人鼻咽癌細(xì)胞CNE-1增殖的作用進(jìn)行研究，為白木通的進(jìn)一步開發(fā)利用提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料

白木通(藤莖)購自廣西桂林市騰龍?zhí)盟帢I(yè)有限責(zé)任公司同心園藥店；索拉菲尼購自拜耳公司；人肝癌細(xì)胞SMMC-7721、BEL-7404，人鼻咽癌細(xì)胞CNE-1購自中國科學(xué)院細(xì)胞庫，由本實(shí)驗(yàn)室傳代培養(yǎng)；1640培養(yǎng)基，美國Gibco公司；DMSO、胰蛋白酶，美國Sigma公司；胎牛血清，杭州四季青生物工程材料有限公司；噻唑藍(lán)(MTT)，美國AMRESCO公司。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 白木通醇提物的制備 將白木通干藥材粉碎后，用6倍體積的75%乙醇溶液回流提取2次，每次2h，抽濾，合并濾液。減壓回收溶劑，將藥液濃縮至浸膏，置于60℃烘箱烘干備用。

2.2 MTT法[3]檢測白木通醇提物對不同腫瘤細(xì)胞的抑制作用 選取對數(shù)生長期的人肝癌細(xì)胞SMMC-7721、BEL-7404，人鼻咽癌細(xì)胞CNE-1，用0.5%胰蛋白酶消化后，配成2×105個(gè)/ml的細(xì)胞懸液，96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中每孔加入100 μl細(xì)胞懸液。置于37℃，5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12 h，每孔加入100 μl不同濃度的含藥培養(yǎng)基，每個(gè)濃度設(shè)4個(gè)平行孔，同時(shí)設(shè)立空白對照組，索拉菲尼為陽性對照組。加藥后培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)24 h后，每孔加入20 μl 5 mg/ml的MTT溶液，繼續(xù)培養(yǎng)4 h。吸去上清液，每孔加入150 μl DMSO，用酶標(biāo)儀在490 nm波長處測OD值。計(jì)算細(xì)胞增殖抑制率和半數(shù)抑制濃度IC50。

抑制率(%)=(空白對照組OD值-加藥組OD值)/空白對照組OD值×100%。

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。

3 結(jié)果

白木通醇提物有抑制人肝癌細(xì)胞SMMC-7721、BEL-7404，人鼻咽癌細(xì)胞CNE-1增殖的作用，半數(shù)抑制濃度IC50分別為0.393 mg/ml、0.348 mg/ml、0.205 mg/ml。結(jié)果見表1。

4 討論

從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出白木通醇提物對人肝癌細(xì)胞SMMC-7721、BEL-7404、鼻咽癌細(xì)胞CNE-1都有抑制增殖作用，并且呈一定的劑量依賴性，其對人肝癌細(xì)胞SMMC-7721、BEL-7404的作用比較接近，而對鼻咽癌細(xì)胞CNE-1的體外抑制增殖作用則相對較強(qiáng)。本課題組對白木通醇提物進(jìn)行了初步的化學(xué)成分預(yù)試，發(fā)現(xiàn)其主要成分為非還原性糖、苷，可能含有少量黃酮。據(jù)國內(nèi)外學(xué)者發(fā)表的大量研究表明，木通屬植物富含三萜皂苷[4]。有文獻(xiàn)報(bào)道從木通中分離的五種三萜皂苷對試驗(yàn)細(xì)胞A549，SK-OV-3，SK-MEL-2，XF498，HCT15均表現(xiàn)顯著的細(xì)胞毒活性[5]。本實(shí)驗(yàn)中白木通醇提物對腫瘤細(xì)胞具有抑制增殖作用。綜上所述，我們認(rèn)為白木通醇提物中的有效成分很可能是皂苷類物質(zhì)。本課題組后期將進(jìn)一步分離純化白木通，明確其藥效成分，并深入研究其抗腫瘤的機(jī)制。

表1 白木通醇提物對腫瘤細(xì)胞的抑制作用

[1]江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典(上)[M].上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1977：19-20.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：59，278.

[3]孫延芳，梁宗鎖，劉文婷，等.刺五加皂苷抗乳腺癌細(xì)胞活性研究[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥，2012，23(4)：926-927.

[4]劉巖庭，侯雄軍，謝月，等.木通屬植物化學(xué)成分及藥理作用研究進(jìn)展[J].江西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2012，25(4)：87-93.

[5]Jung H，Lee C，Lee K，et al.Structure-activity relationship of oleanane disaccharides isolated form Akebia quinata versus cytotoxicity against cancer cells and NO inhibition[J].Biol Pharm Bul，2004，27(5)：744-750.

Anti-tumorActiveoftheEthanolExtractfromAkebiatrifoliatainVitro

TANG Yan-xia,SUN Yue-wen,LIANG Gang*

Parmaceutical College of Guangxi Medical University,Nanning 530021,China

To investigate the anti-tumor active of the ethanol extract from Akebia trifoliata (Thunb.) Koidz. var. australis (Diels) Rehd. in vitro.Methods：Akebia trifoliata (Thunb.) Koidz. var. australis (Diels) Rehd. was extracted by reflux in 70% alcohol .MTT assay was used to investigate inhibitory growth effect of the ethanol extract from Akebia trifoliata (Thunb.) Koidz. var. australis (Diels) Rehd. on human hepatic cancer cells SMMC-7721、BEL-7404 and Nasopharyngeal cancer cell CNE-1 cancer .Results：The ethanol extract from Akebia trifoliata (Thunb.) Koidz. var. australis (Diels) Rehd.inhibited the proliferation of human hepatic cancer cells SMMC-7721、BEL-7404 and Nasopharyngeal cancer cell CNE-1 in vitro.Conclusion：The ethanol extract from Akebia trifoliata (Thunb.) Koidz. var. australis (Diels) Rehd.have certain anti-tumor effect in vitro.

Akebia trifoliata(Thunb.)Koidz.var.australis(Diels)Rehd.;Anti-tumor;Hepatic cancer;Nasopharyngeal cancer

廣西自然科學(xué)基金項(xiàng)目(編號：2010GXNSFD013043)。

唐燕霞(1987-)，女，廣西合浦人，在讀碩士研究生，主要從事抗腫瘤藥理學(xué)研究。

梁鋼(1957-)，男，博士，教授，博士研究生導(dǎo)師。主要從事抗腫瘤分子藥理學(xué)及其新藥研究工作。

R 285.5

A

1007-8517(2014)10-0017-02

2014.03.10)