利用高效液相色譜法同時測定土曲霉發(fā)酵液中衣康酸及殘?zhí)?/h1>
2014-09-08 03:34:53黃筱萍熊大維黃國昌
江西科學 2014年6期
劉 蘭，黃筱萍，熊大維，黃國昌，張 婷
(江西省科學院微生物研究所，330096，南昌)
利用高效液相色譜法同時測定土曲霉發(fā)酵液中衣康酸及殘?zhí)?/p>
劉 蘭，黃筱萍，熊大維，黃國昌，張 婷
(江西省科學院微生物研究所，330096，南昌)
建立了高效液相色譜(HPLC)快速測定土曲霉發(fā)酵液中衣康酸及殘?zhí)堑姆治龇椒?。使用TOSOH Tskgel oApak-A色譜柱，以0.75 mmol/L H2SO4為流動相，在柱溫45 ℃，流速1.0 mL/min的條件下，采用示差折光檢測器進行檢測。結果表明，該方法在20 min內可實現發(fā)酵液中衣康酸和葡萄糖的完全分離與定量。衣康酸在0～10.056 g/L范圍內的線性關系良好，相關系數為0.999 9，相對標準偏差(n=6)為0.33%，加標回收率100.88%～102.74%。葡萄糖在0～6.016 g/L范圍內的線性關系良好，相關系數為0.999 9，相對標準偏差(n=6)為0.12%，加標回收率101.26%～103.12%。該法適用于土黃霉發(fā)酵液中衣康酸和葡萄糖的快速、高效分離和定量測定。
高效液相色譜；衣康酸；葡萄糖；土曲霉；發(fā)酵液
0 引言
衣康酸(Itaconic acid)學名亞甲基丁二酸、甲叉丁二酸、亞甲基琥珀酸[1]，是世界上5大有機酸之一。由于其含不飽和雙鍵，具有活潑的化學性質，能進行各種加成反應，酯化反應和聚合反應，是化學合成和化工生產的重要工業(yè)原料，在化纖、合成樹脂、塑料、橡膠、醫(yī)藥、表面活性劑以及食品領域具有廣泛的應用，隨著衣康酸具有的獨特性能被認識及應用范圍的迅速擴大，衣康酸的生產技術也在不斷進步[2]。
發(fā)酵法生產衣康酸由于原料易得，工藝技術成熟，是目前國內外工業(yè)生產一致采用的方法[4]。測定衣康酸發(fā)酵液中殘?zhí)羌耙驴邓岬淖兓?，對揭示代謝途徑以及控制發(fā)酵過程，從而優(yōu)化發(fā)酵工藝條件意義重大。目前，衣康酸發(fā)酵液中的衣康酸采用Friedkin碘量法測定，還原糖采用DNS法(3,5-二硝基水楊酸比色法)或菲林試劑滴定法測定[3-5]。由于采用多種分析手段分析發(fā)酵液，過程繁瑣費時。因此針對衣康酸發(fā)酵工藝建立快速、準確地同時測定衣康酸和殘?zhí)堑姆治龇椒▽τ谝驴邓岚l(fā)酵技術的發(fā)展具有重要的意義。白冬梅等使用反相高效液相色譜法同時分析了發(fā)酵液中有機酸和葡萄糖[6-7]。馬瑞等使用離子排斥液相色譜法同時分析了6種有機酸和3種糖類物質[8]。
本研究采用HPLC法，利用TOSOH Tskgel oApak-A色譜柱，以示差折光檢測器(RID)檢測，建立了同時檢測土曲霉發(fā)酵液中葡萄糖和衣康酸的方法。該方法可以較準確地測定衣康酸發(fā)酵過程中糖的消耗量及衣康酸代謝產物的生成量，這對于控制發(fā)酵過程，優(yōu)化發(fā)酵工藝條件及操作參數，從而提高衣康酸產量具有重要的理論和現實指導意義。
1 實驗部分
1.1儀器與試劑
日本島津(Shimadzu)LC-20A高效液相色譜儀(配示差折光檢測器，島津LC電腦工作站)；Practum224-1CN電子天平(賽多利斯科學儀器(北京)有限公司)；FDY0501-UV-P超純水設備(青島富勒科技有限公司)；H2500R-2高速冷凍離心機(湖南湘儀)。
衣康酸(純度為99%；CAS號97-65-4)；葡萄糖(純度為99.5%；CAS號：55-99-7)。
1.2色譜條件
色譜柱：TOSOH Tskgel oApak-A(300 mm×7.8mm，5 μm)；流動相：0.75 mmol/L H2SO4；流速：1.0 mL/min；柱溫：45 ℃；檢測器：RID；進樣量：10 μL；外標法定量。
1.3樣品溶液配制
1.3.1 標準溶液配制 準確稱取烘干至恒重的分析純葡萄糖5.013 4 g，用超純水溶解，定容至100 mL，配成50.13 4 g/L的標準溶液，作為儲備液。然后分別從儲備液中精密量取1.0 mL、2.0 mL、3.0 mL、4.0 mL、5.0 mL、6.0 mL至50 mL容量瓶中，加超純水定容至刻度，搖勻，即得質量濃度為1.002 7 g/L、2.005 4 g/L、3.008 0 g/L、4.010 7 g/L、5.013 4 g/L、6.016 1 g/L的標準工作溶液。
準確稱取衣康酸標準品2.031 5 g(純度為99%)，用超純水溶解，定容至100 mL，配成20.112 g/L的標準溶液，作為儲備液。然后分別從儲備液中精密量取1.0 mL、2.0 mL、3.0 mL、4.0 mL、5.0 mL至10 mL容量瓶中, 加超純水定容至刻度，搖勻，即得質量濃度為2.0112 g/L、4.022 4 g/L、6.033 6 g/L、8.044 8 g/L、10.056 0 g/L的標準工作溶液。
1.3.2 混合標準溶液配制 稱取衣康酸0.710 6 g及葡萄糖0.505 9 g，用超純水溶解至100 mL，配制含衣康酸和葡萄糖標準物質的混合溶液，2組份的質量濃度見表1。
表1 衣康酸及葡萄糖混合標準溶液的組成
1.4定性和定量
在相同色譜條件下，將樣品色譜圖與衣康酸以及葡萄糖標準液色譜圖對照，根據保留時間確定樣品中各組分的色譜峰；在標樣與樣品進樣量相同的情況下，應用外標法定量，計算樣品中各組分的含量。
2 結果與討論
2.1標準物質的確定
在1.2節(jié)的色譜條件下分別測定衣康酸和葡萄糖標準溶液，確定各組分的保留時間(衣康酸的色譜圖見圖1；葡萄糖的色譜圖見圖2)；再測定混合標準溶液，得到混合標準溶液的色譜圖(見圖3)，從圖3可以看出衣康酸和葡萄糖的分離效果很好，出峰順序為葡萄糖、衣康酸。
圖1 衣康酸標準溶液色譜圖
圖2 葡萄糖標準溶液色譜圖
圖3 葡萄糖和衣康酸混合標準溶液色譜圖
2.2色譜條件的選擇
本實驗根據色譜柱的特性對分析溫度及流速進行了考察，確定最佳分析條件。
2.2.1 柱溫的選擇 分別考察了柱溫為35 ℃、40 ℃、45 ℃時的分離情況，從圖4中可看出柱溫對葡萄糖和衣康酸的分離度影響不大，衣康酸保留時間稍提前，且柱壓降低。考慮柱壓低可延長分析柱的的壽命，本實驗將柱溫定為45 ℃。
2.2.2 流速的選擇 流動相的流速對液相色譜的分離有影響，流速分別設定為0.8 mL/min、1.0 mL/min、1.2 mL/min，進行考察。從圖4中可看出，隨著流速的增加，保留時間都有提前，但柱壓增大，峰面積減小，說明靈敏度下降，綜合考慮，本實驗選擇流速為1.0 mL/min。
圖4 柱溫及流速對葡萄糖和衣康酸混合溶液保留時間的影響
2.3標準工作曲線的制作
將1.3.1配制的葡萄糖及衣康酸標準工作溶液，按10 μL進樣量分別進行分析，記錄各質量濃度得到的峰面積A，將各峰面積A與對應的質量濃度C(g/L)進行線性回歸，結果見表2。
表2 衣康酸和葡萄糖的保留時間、線性關系
2.4重復性(精密度)和回收率(準確度)
2.4.1 重復性(精密度)實驗 將搖瓶發(fā)酵一定時間的發(fā)酵液進行適當稀釋，作為試驗樣品，按色譜條件，進樣分析得色譜圖5，可見葡萄糖出峰時間9.130 min，衣康酸出峰時間18.332 min，兩者分離效果好，其它雜質低。連續(xù)進樣6次，測得結果見表3，葡萄糖和衣康酸的相對標準偏差為0.11%、0.33%。
圖5 土曲霉搖瓶發(fā)酵液色譜圖
表3 土曲霉發(fā)酵液的重復性試驗結果
2.4.2 加標回收率(準確度)實驗 加標回收率的測定，是對所建立分析方法適用性及系統(tǒng)誤差的檢驗，也是分析質量控制的一種手段。本實驗以稀釋一定倍數的發(fā)酵液作為試驗樣品，平行取樣6次進行2個水平的加標回收試驗，結果見表4，得到葡萄糖和衣康酸的加標回收率在100.88%～103.12%之間。
表4土曲霉發(fā)酵液中葡萄糖和衣康酸的加標回收率(n=6)
CompoundBackground/g·L-1Added/g·L-1Found/g·L-1Recovery/%Glucose2．46711．50513．01024．09615．5463103．12101．26Itaconicacid3．0643．01686．03366．24769．1778102．74100．88
3 結論
1)采用HPLC對土曲霉發(fā)酵液中衣康酸及葡萄糖含量進行檢測，確定了最佳色譜條件：TOSOH Tskgel oApak-A色譜柱，示差檢測器(RID)，流動相0.75 mmol/L H2SO4，流速1.0 mL/min，柱溫45 ℃。
2)該方法前處理簡單、精密度好、靈敏度高，比常規(guī)化學滴定法省時、省力，為衣康酸發(fā)酵工藝改進的研究及適時監(jiān)控提供了方便。
[1] 劉建軍,姜魯燕,李丕武,等.衣康酸的性質、生產及應用[J].山東科學,2002,15(3):38-42.
[2]何敏超,張宇,許敬亮,等.衣康酸產業(yè)的現狀和展望[J].中國釀造,2012,31(11):8-11.
[3]賈士儒,王明霞,陳貴斌,等.衣康酸發(fā)酵工藝的初步研究[J].食品與發(fā)酵工業(yè),1999,25(2):39-42.
[4]劉建軍,姜魯燕,李丕武,等.發(fā)酵法生產衣康酸技術的研究-衣康酸發(fā)酵工藝條件的研究(Ⅱ)[J].食品與發(fā)酵工業(yè),2003,29(4):27-32.
[5]徐建春,李霞,王海英.發(fā)酵法生產衣康酸-高產菌株的選育[J].發(fā)酵科技通訊,2008,37(1):30-32.
[6]白冬梅,杜國民,沈菲,等.反相HPLC同時測定產琥珀酸放線桿菌發(fā)酵液中的有機酸與葡萄糖[J].分析試驗室,2004,23(3):15-18.
[7]白冬梅,趙學明,胡宗定,等.反相HPLC雙控檢測器法同時測定米根霉乳酸發(fā)酵液中的有機酸與葡萄糖[J].食品與發(fā)酵工業(yè),2000,27(11):13-17.
[8]馬瑞,歐陽嘉,李鑫,等.高效液相色譜法同時測定生物質乳酸發(fā)酵液中有機酸及糖類化合物[J].色譜,2012,30(1):62-66.
SimultaneousdeterminationofItaconicAcidandSaccharidesinItaconicAcidFermentationBrothofAspergillusterreusbyHighPerformanceLiquidChromatography
LIU Lan,HUANG Xiaoping,XIONG Dawei,HUANG Guochang,ZHANG Ting
(Jiangxi Academy of Science. Institute of Microbiology,330096,Nanchang,PRC)
A high performance liquid chromatographic method for rapid determination of itaconic acid and saccharides in itaconic acid fermentation broth ofAspergillusterreuswas developed.A TOSOH Tskgel oApak-A column was used at 45 ℃ and the mobile phase was 0.75 mmol/L H2SO4at a flow rate of 1.0 mL/min.Under the optimized conditions.The itaconic acid and glucose in samples were determined and completely separated within 20 min by a refractive index detector (RID).The Linear correlation coefficient for itaconic acid was 0.999 9 in the range of 0～10.056 g/L.The Linear correlation coefficient for glucose was 0.999 9 in the range of 0～6.016 g/L.The relative standard deviation (RSD,n=6) of itaconic acid and glucose was 0.33% and 0.15% respectively.The recovery rate was 100.88%～102.74% and of 101.26%～103.12% separately.This method established is proved to be fast and accurate for the quantitative analysis of the itaconic acid and glucose in fermentation broth ofAspergillusterreus.
high performance liquid chromatography(HPLC);itaconic acid;glucose;Aspergillusterreus;fermentation broth
2014-10-13;
2014-11-17
劉 蘭(1969-)，女，本科，研究方向：有機酸發(fā)酵。
10.13990/j.issn1001-3679.2014.06.027
O658
A
1001-3679(2014)06-0865-04
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劉 蘭，黃筱萍，熊大維，黃國昌，張 婷
(江西省科學院微生物研究所，330096，南昌)
利用高效液相色譜法同時測定土曲霉發(fā)酵液中衣康酸及殘?zhí)?/p>
劉 蘭，黃筱萍，熊大維，黃國昌，張 婷
(江西省科學院微生物研究所，330096，南昌)
建立了高效液相色譜(HPLC)快速測定土曲霉發(fā)酵液中衣康酸及殘?zhí)堑姆治龇椒?。使用TOSOH Tskgel oApak-A色譜柱，以0.75 mmol/L H2SO4為流動相，在柱溫45 ℃，流速1.0 mL/min的條件下，采用示差折光檢測器進行檢測。結果表明，該方法在20 min內可實現發(fā)酵液中衣康酸和葡萄糖的完全分離與定量。衣康酸在0～10.056 g/L范圍內的線性關系良好，相關系數為0.999 9，相對標準偏差(n=6)為0.33%，加標回收率100.88%～102.74%。葡萄糖在0～6.016 g/L范圍內的線性關系良好，相關系數為0.999 9，相對標準偏差(n=6)為0.12%，加標回收率101.26%～103.12%。該法適用于土黃霉發(fā)酵液中衣康酸和葡萄糖的快速、高效分離和定量測定。
高效液相色譜；衣康酸；葡萄糖；土曲霉；發(fā)酵液
0 引言
衣康酸(Itaconic acid)學名亞甲基丁二酸、甲叉丁二酸、亞甲基琥珀酸[1]，是世界上5大有機酸之一。由于其含不飽和雙鍵，具有活潑的化學性質，能進行各種加成反應，酯化反應和聚合反應，是化學合成和化工生產的重要工業(yè)原料，在化纖、合成樹脂、塑料、橡膠、醫(yī)藥、表面活性劑以及食品領域具有廣泛的應用，隨著衣康酸具有的獨特性能被認識及應用范圍的迅速擴大，衣康酸的生產技術也在不斷進步[2]。
發(fā)酵法生產衣康酸由于原料易得，工藝技術成熟，是目前國內外工業(yè)生產一致采用的方法[4]。測定衣康酸發(fā)酵液中殘?zhí)羌耙驴邓岬淖兓?，對揭示代謝途徑以及控制發(fā)酵過程，從而優(yōu)化發(fā)酵工藝條件意義重大。目前，衣康酸發(fā)酵液中的衣康酸采用Friedkin碘量法測定，還原糖采用DNS法(3,5-二硝基水楊酸比色法)或菲林試劑滴定法測定[3-5]。由于采用多種分析手段分析發(fā)酵液，過程繁瑣費時。因此針對衣康酸發(fā)酵工藝建立快速、準確地同時測定衣康酸和殘?zhí)堑姆治龇椒▽τ谝驴邓岚l(fā)酵技術的發(fā)展具有重要的意義。白冬梅等使用反相高效液相色譜法同時分析了發(fā)酵液中有機酸和葡萄糖[6-7]。馬瑞等使用離子排斥液相色譜法同時分析了6種有機酸和3種糖類物質[8]。
本研究采用HPLC法，利用TOSOH Tskgel oApak-A色譜柱，以示差折光檢測器(RID)檢測，建立了同時檢測土曲霉發(fā)酵液中葡萄糖和衣康酸的方法。該方法可以較準確地測定衣康酸發(fā)酵過程中糖的消耗量及衣康酸代謝產物的生成量，這對于控制發(fā)酵過程，優(yōu)化發(fā)酵工藝條件及操作參數，從而提高衣康酸產量具有重要的理論和現實指導意義。
1 實驗部分
1.1儀器與試劑
日本島津(Shimadzu)LC-20A高效液相色譜儀(配示差折光檢測器，島津LC電腦工作站)；Practum224-1CN電子天平(賽多利斯科學儀器(北京)有限公司)；FDY0501-UV-P超純水設備(青島富勒科技有限公司)；H2500R-2高速冷凍離心機(湖南湘儀)。
衣康酸(純度為99%；CAS號97-65-4)；葡萄糖(純度為99.5%；CAS號：55-99-7)。
1.2色譜條件
色譜柱：TOSOH Tskgel oApak-A(300 mm×7.8mm，5 μm)；流動相：0.75 mmol/L H2SO4；流速：1.0 mL/min；柱溫：45 ℃；檢測器：RID；進樣量：10 μL；外標法定量。
1.3樣品溶液配制
1.3.1 標準溶液配制 準確稱取烘干至恒重的分析純葡萄糖5.013 4 g，用超純水溶解，定容至100 mL，配成50.13 4 g/L的標準溶液，作為儲備液。然后分別從儲備液中精密量取1.0 mL、2.0 mL、3.0 mL、4.0 mL、5.0 mL、6.0 mL至50 mL容量瓶中，加超純水定容至刻度，搖勻，即得質量濃度為1.002 7 g/L、2.005 4 g/L、3.008 0 g/L、4.010 7 g/L、5.013 4 g/L、6.016 1 g/L的標準工作溶液。
準確稱取衣康酸標準品2.031 5 g(純度為99%)，用超純水溶解，定容至100 mL，配成20.112 g/L的標準溶液，作為儲備液。然后分別從儲備液中精密量取1.0 mL、2.0 mL、3.0 mL、4.0 mL、5.0 mL至10 mL容量瓶中, 加超純水定容至刻度，搖勻，即得質量濃度為2.0112 g/L、4.022 4 g/L、6.033 6 g/L、8.044 8 g/L、10.056 0 g/L的標準工作溶液。
1.3.2 混合標準溶液配制 稱取衣康酸0.710 6 g及葡萄糖0.505 9 g，用超純水溶解至100 mL，配制含衣康酸和葡萄糖標準物質的混合溶液，2組份的質量濃度見表1。
表1 衣康酸及葡萄糖混合標準溶液的組成
1.4定性和定量
在相同色譜條件下，將樣品色譜圖與衣康酸以及葡萄糖標準液色譜圖對照，根據保留時間確定樣品中各組分的色譜峰；在標樣與樣品進樣量相同的情況下，應用外標法定量，計算樣品中各組分的含量。
2 結果與討論
2.1標準物質的確定
在1.2節(jié)的色譜條件下分別測定衣康酸和葡萄糖標準溶液，確定各組分的保留時間(衣康酸的色譜圖見圖1；葡萄糖的色譜圖見圖2)；再測定混合標準溶液，得到混合標準溶液的色譜圖(見圖3)，從圖3可以看出衣康酸和葡萄糖的分離效果很好，出峰順序為葡萄糖、衣康酸。
圖1 衣康酸標準溶液色譜圖
圖2 葡萄糖標準溶液色譜圖
圖3 葡萄糖和衣康酸混合標準溶液色譜圖
2.2色譜條件的選擇
本實驗根據色譜柱的特性對分析溫度及流速進行了考察，確定最佳分析條件。
2.2.1 柱溫的選擇 分別考察了柱溫為35 ℃、40 ℃、45 ℃時的分離情況，從圖4中可看出柱溫對葡萄糖和衣康酸的分離度影響不大，衣康酸保留時間稍提前，且柱壓降低。考慮柱壓低可延長分析柱的的壽命，本實驗將柱溫定為45 ℃。
2.2.2 流速的選擇 流動相的流速對液相色譜的分離有影響，流速分別設定為0.8 mL/min、1.0 mL/min、1.2 mL/min，進行考察。從圖4中可看出，隨著流速的增加，保留時間都有提前，但柱壓增大，峰面積減小，說明靈敏度下降，綜合考慮，本實驗選擇流速為1.0 mL/min。
圖4 柱溫及流速對葡萄糖和衣康酸混合溶液保留時間的影響
2.3標準工作曲線的制作
將1.3.1配制的葡萄糖及衣康酸標準工作溶液，按10 μL進樣量分別進行分析，記錄各質量濃度得到的峰面積A，將各峰面積A與對應的質量濃度C(g/L)進行線性回歸，結果見表2。
表2 衣康酸和葡萄糖的保留時間、線性關系
2.4重復性(精密度)和回收率(準確度)
2.4.1 重復性(精密度)實驗 將搖瓶發(fā)酵一定時間的發(fā)酵液進行適當稀釋，作為試驗樣品，按色譜條件，進樣分析得色譜圖5，可見葡萄糖出峰時間9.130 min，衣康酸出峰時間18.332 min，兩者分離效果好，其它雜質低。連續(xù)進樣6次，測得結果見表3，葡萄糖和衣康酸的相對標準偏差為0.11%、0.33%。
圖5 土曲霉搖瓶發(fā)酵液色譜圖
表3 土曲霉發(fā)酵液的重復性試驗結果
2.4.2 加標回收率(準確度)實驗 加標回收率的測定，是對所建立分析方法適用性及系統(tǒng)誤差的檢驗，也是分析質量控制的一種手段。本實驗以稀釋一定倍數的發(fā)酵液作為試驗樣品，平行取樣6次進行2個水平的加標回收試驗，結果見表4，得到葡萄糖和衣康酸的加標回收率在100.88%～103.12%之間。
表4土曲霉發(fā)酵液中葡萄糖和衣康酸的加標回收率(n=6)
CompoundBackground/g·L-1Added/g·L-1Found/g·L-1Recovery/%Glucose2．46711．50513．01024．09615．5463103．12101．26Itaconicacid3．0643．01686．03366．24769．1778102．74100．88
3 結論
1)采用HPLC對土曲霉發(fā)酵液中衣康酸及葡萄糖含量進行檢測，確定了最佳色譜條件：TOSOH Tskgel oApak-A色譜柱，示差檢測器(RID)，流動相0.75 mmol/L H2SO4，流速1.0 mL/min，柱溫45 ℃。
2)該方法前處理簡單、精密度好、靈敏度高，比常規(guī)化學滴定法省時、省力，為衣康酸發(fā)酵工藝改進的研究及適時監(jiān)控提供了方便。
[1] 劉建軍,姜魯燕,李丕武,等.衣康酸的性質、生產及應用[J].山東科學,2002,15(3):38-42.
[2]何敏超,張宇,許敬亮,等.衣康酸產業(yè)的現狀和展望[J].中國釀造,2012,31(11):8-11.
[3]賈士儒,王明霞,陳貴斌,等.衣康酸發(fā)酵工藝的初步研究[J].食品與發(fā)酵工業(yè),1999,25(2):39-42.
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[5]徐建春,李霞,王海英.發(fā)酵法生產衣康酸-高產菌株的選育[J].發(fā)酵科技通訊,2008,37(1):30-32.
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SimultaneousdeterminationofItaconicAcidandSaccharidesinItaconicAcidFermentationBrothofAspergillusterreusbyHighPerformanceLiquidChromatography
LIU Lan,HUANG Xiaoping,XIONG Dawei,HUANG Guochang,ZHANG Ting
(Jiangxi Academy of Science. Institute of Microbiology,330096,Nanchang,PRC)
A high performance liquid chromatographic method for rapid determination of itaconic acid and saccharides in itaconic acid fermentation broth ofAspergillusterreuswas developed.A TOSOH Tskgel oApak-A column was used at 45 ℃ and the mobile phase was 0.75 mmol/L H2SO4at a flow rate of 1.0 mL/min.Under the optimized conditions.The itaconic acid and glucose in samples were determined and completely separated within 20 min by a refractive index detector (RID).The Linear correlation coefficient for itaconic acid was 0.999 9 in the range of 0～10.056 g/L.The Linear correlation coefficient for glucose was 0.999 9 in the range of 0～6.016 g/L.The relative standard deviation (RSD,n=6) of itaconic acid and glucose was 0.33% and 0.15% respectively.The recovery rate was 100.88%～102.74% and of 101.26%～103.12% separately.This method established is proved to be fast and accurate for the quantitative analysis of the itaconic acid and glucose in fermentation broth ofAspergillusterreus.
high performance liquid chromatography(HPLC);itaconic acid;glucose;Aspergillusterreus;fermentation broth
2014-10-13;
2014-11-17
劉 蘭(1969-)，女，本科，研究方向：有機酸發(fā)酵。
10.13990/j.issn1001-3679.2014.06.027
O658
A
1001-3679(2014)06-0865-04
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