金樹英，戶 麗，包伍葉，3，邵潤慧，梁 佳，圖 婭，盧 峻△

(1.北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京 100029;2.河北唐山市豐潤區(qū)中醫(yī)醫(yī)院，河北 唐山 064000;3.內(nèi)蒙古民族大學(xué)附屬醫(yī)院，內(nèi)蒙古 通遼 028007;4.中國中醫(yī)科學(xué)院，北京 100700)

抑郁癥已成為現(xiàn)代社會(huì)常見的情感障礙性疾病，給患者和社會(huì)帶來極大危害。針刺治療抑郁癥有較好療效并可以緩解抗抑郁藥的副作用［1－2］，在臨床上的應(yīng)用日益受到關(guān)注。針刺治療抑郁癥的機(jī)制研究正逐漸深入［3］。近年來提出的抑郁癥細(xì)胞因子假說［4］認(rèn)為，慢性應(yīng)激引起免疫激活、產(chǎn)生炎性細(xì)胞因子，可以導(dǎo)致抑郁癥的發(fā)病。已有臨床研究發(fā)現(xiàn)［5－6］，針刺顯著降低抑郁癥患者血清IL－1β、IL－6和TNF－α的水平。海馬和額葉皮層是抑郁癥的重要病變腦區(qū)，但針刺對(duì)其中的炎性細(xì)胞因子的影響尚不明確。本實(shí)驗(yàn)采用慢性應(yīng)激抑郁大鼠模型，觀察針刺對(duì)血清、海馬、額葉皮層IL－1β、IL－6和TNF－α含量的影響，探討針刺治療抑郁癥的可能機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物分組與處理

選用Sprague－Dawley(SD)雄性大鼠32只，體重(180±20)g，由北京華阜康生物科技股份有限公司提供。動(dòng)物隨機(jī)分為4組:正常組、模型組、針刺組和氟西汀組，每組8只。正常組:常規(guī)飼養(yǎng)。模型組:孤養(yǎng)，并制備慢性應(yīng)激抑郁大鼠模型。針刺組:造模處理同模型組，并隔日1次在應(yīng)激前針刺。氟西汀組:造模處理同模型組，每日在應(yīng)激前給藥。

1.2 主要試劑和儀器

IL－1β、IL－6、TNF－α ELISA 試劑盒(美國R＆D公司產(chǎn)品，進(jìn)口分裝);氟西汀(浙江麗晶化學(xué)有限公司，分析純)。其它試劑為國產(chǎn)分析純。環(huán)球牌針灸針(蘇州環(huán)球針灸醫(yī)療器械有限公司);搖床;臺(tái)式冷凍離心機(jī);超聲勻漿器等。

1.3 造模方法

［7］方法改進(jìn)，采用孤養(yǎng)結(jié)合慢性應(yīng)激方法造模。大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，28天造模過程中每日隨機(jī)接受一種不同的應(yīng)激刺激，具體方法包括:夾尾2 min;束縛3 h;斷食24 h;斷水24 h;冷水游泳5 min(10℃);振蕩30 min。

1.4 治療方法

針刺方法:參考《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》［8］，選取“百會(huì)”及“內(nèi)關(guān)”穴。用30號(hào)0.5寸毫針治療，斜刺“百會(huì)”，直刺單側(cè)“內(nèi)關(guān)”，進(jìn)針后捻轉(zhuǎn)，留針10 min。

給藥方法:每日應(yīng)激造模前用氟西汀(10 mg/kg)灌胃給藥。

1.5 ELISA法檢測血清及腦IL－1β、IL－6和TNF－α含量

斷頭處死大鼠，取血，靜置后離心(4℃，3000 rpm，15 min)，取上清，－80℃保存。斷頭后迅速取出海馬和額葉皮層，置于液氮中，然后移入－80℃冰箱保存。檢測前進(jìn)行腦組織勻漿。采用ELISA試劑盒檢測IL－1β、IL－6、TNF－α 含量，嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作。

1.6 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，采用單因素方差分析，以P＜0.05作為差異顯著性標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠血清、海馬、額葉皮層IL－1β含量的比較

表1 各組大鼠血清、海馬、額葉皮層IL－1β含量的比較(±s，n=8，單位:pg/ml)

表1 各組大鼠血清、海馬、額葉皮層IL－1β含量的比較(±s，n=8，單位:pg/ml)

注:與正常組比較，*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01;與模型組比較，##P ＜0.01。

30.17 ±3.57 23.95 ±2.38 26.04 ±4.93模型組 44.51 ±3.46＊＊ 45.00 ±4.87＊＊ 45.78 ±7.95＊＊針刺組 33.12 ±4.93## 27.32 ±4.04＊＊## 32.47 ±4.76*##氟西汀組 27.95 ±3.89## 22.93 ±4.22## 27.71 ±5.06組別 血清 海馬 額葉皮層正常組##

由表1可見，造模后，模型組與正常組比較，血清IL－1β含量顯著升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);針刺、氟西汀治療后，血清IL－1β含量與模型組比較顯著降低(P＜0.01)。模型組與正常組比較，海馬IL－1β含量顯著升高(P＜0.01);經(jīng)針刺、氟西汀治療，海馬IL－1β含量顯著降低(P＜0.01)。與正常組比較，模型組額葉皮層 IL－1β含量顯著升高(P＜0.01);針刺、氟西汀治療使額葉皮層IL－1β含量顯著降低(P ＜0.01)。

2.2 各組大鼠血清、海馬、額葉皮層IL－6含量的比較

表2 各組大鼠血清、海馬、額葉皮層IL－6含量的比較(±s，n=8，單位:pg/ml)

表2 各組大鼠血清、海馬、額葉皮層IL－6含量的比較(±s，n=8，單位:pg/ml)

注:與正常組比較，＊＊P ＜0.01;與模型組比較，##P ＜0.01。

23.91 ±1.84 20.47 ±2.25 22.78 ±3.15模型組 46.59 ±8.10＊＊ 47.12 ±4.99＊＊ 53.36 ±7.92＊＊針刺組 33.04 ±4.12＊＊##29.92 ±6.54＊＊## 34.40 ±6.20＊＊##氟西汀組 22.77 ±1.61## 20.48 ±2.66## 25.27 ±3.11組別 血清 海馬 額葉皮層正常組##

由表2可見，造模后，模型組與正常組比較，血清IL－6含量顯著升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);針刺、氟西汀治療后，血清IL－1β含量與模型組比較顯著降低(P＜0.01)。模型組與正常組比較，海馬IL－6含量顯著升高(P＜0.01);經(jīng)針刺、氟西汀治療，海馬IL－6含量顯著降低(P＜0.01)。與正常組比較，模型組額葉皮層IL－6含量顯著升高(P＜0.01);針刺、氟西汀治療使額葉皮層IL－6含量顯著降低(P ＜0.01)。

2.3 各組大鼠血清、海馬、額葉皮層TNF－α含量的比較

表3 各組大鼠血清、海馬、額葉皮層TNF－α含量的比較(±s，n=8，單位:pg/ml)

表3 各組大鼠血清、海馬、額葉皮層TNF－α含量的比較(±s，n=8，單位:pg/ml)

注:與正常組比較，*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01;與模型組比較，##P ＜0.01。

21.47 ±1.89 21.33 ±1.99 19.78 ±3.74模型組 38.00 ±5.66＊＊ 40.09 ±5.98＊＊ 35.79 ±5.06＊＊針刺組 25.26 ±4.82## 28.47 ±5.27＊＊## 25.82 ±4.36*##氟西汀組 20.07 ±2.05## 21.21 ±3.27## 20.18 ±2.70組別 血清 海馬 額葉皮層正常組##

由表3可見，造模后，模型組與正常組比較，血清TNF－α含量顯著升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);針刺、氟西汀治療后，血清TNF－α含量與模型組比較顯著降低(P＜0.01)。模型組與正常組比較，海馬TNF－α含量顯著升高(P＜0.01);經(jīng)針刺、氟西汀治療，海馬TNF－α含量顯著降低(P＜0.01)。與正常組比較，模型組額葉皮層TNF－α含量顯著升高(P＜0.01);針刺、氟西汀治療使額葉皮層TNF－α含量顯著降低(P ＜0.01)。

3 討論

慢性應(yīng)激是引發(fā)抑郁癥的重要原因。研究發(fā)現(xiàn)［9－10］，慢性應(yīng)激可引起免疫系統(tǒng)激活，單核 －巨噬細(xì)胞活動(dòng)增加，炎性細(xì)胞因子(IL－1，IL－6，TNF－α等)釋放增加。抑郁癥患者血中可檢測到 IL－1β、IL－6和 TNF－α水平增高［10］。目前認(rèn)為，炎性細(xì)胞因子通過對(duì)神經(jīng)遞質(zhì)、神經(jīng)內(nèi)分泌等方面的影響，引起抑郁癥狀。

已有研究表明，IL－1β、IL－6和TNF－α與抑郁癥的某些行為改變有一定的相關(guān)性。將IL－1β注射到大鼠腦室，可以引起發(fā)熱、精神運(yùn)動(dòng)遲滯、睡眠障礙、體重減輕、食欲減退、快感缺失、認(rèn)知和記憶損害等病態(tài)行為，類似人的抑郁癥狀［11］。IL－6缺失小鼠在強(qiáng)迫游泳和懸尾實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)絕望減少和快感增加的行為，提示IL－6缺失小鼠能夠拮抗應(yīng)激引起的抑郁作用［12］。TNF－α基因敲除小鼠表現(xiàn)出空間學(xué)習(xí)記憶能力提高，而TNF－α過度表達(dá)的小鼠則出現(xiàn)空間學(xué)習(xí)和記憶功能損傷［13］。

本研究結(jié)果表明，慢性應(yīng)激引起大鼠血清IL－1β、IL－6和TNF－α含量顯著升高，針刺可以降低模型大鼠血清中上述炎性細(xì)胞因子水平。研究顯示［14］，針刺可以顯著降低慢性應(yīng)激抑郁大鼠血清IL－6和TNF－α含量，與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致。有研究觀察到束縛應(yīng)激模型大鼠血清TNF－α含量降低［15］，可能是應(yīng)激方法和時(shí)程不同所造成的差異。

慢性應(yīng)激損害與認(rèn)知和情緒密切相關(guān)的邊緣系統(tǒng)，特別重視的是海馬。海馬是抑郁癥的主要病變腦區(qū)之一［16］。額葉皮層在情緒調(diào)節(jié)中起重要作用，抑郁癥患者出現(xiàn)額葉皮層的損害［17］。筆者的結(jié)果表明，慢性應(yīng)激引起大鼠海馬和額葉皮層的IL－1β、IL－6和TNF－α含量顯著升高;而針刺可以降低上述細(xì)胞因子在相關(guān)腦區(qū)的表達(dá)。這提示了針刺可以抑制腦內(nèi)炎性細(xì)胞因子的產(chǎn)生，緩解炎癥反應(yīng)對(duì)大腦的損害，這可能是針刺發(fā)揮抗抑郁效應(yīng)的途徑之一。

抑郁癥屬于中醫(yī)“郁癥”范疇，治療時(shí)應(yīng)調(diào)氣安神為主。本實(shí)驗(yàn)以百會(huì)為主穴。百會(huì)位于巔頂，是手足三陽經(jīng)及督脈、足厥陰交會(huì)之處，頭為“精明之府”。百會(huì)是臨床上針灸治療抑郁癥的常用穴位［2，6］。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明，針刺百會(huì)可抑制抑郁大鼠亢進(jìn)的下丘腦－垂體－腎上腺皮質(zhì)軸［7］，促進(jìn)海馬腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)及其受體 TrkB的表達(dá)，改善腦損傷［18］。內(nèi)關(guān)，是心經(jīng)絡(luò)穴，八脈交會(huì)穴之一，通陰維脈，《甲乙經(jīng)》:“心澹澹而善驚恐，心悲，內(nèi)關(guān)主之”。兩穴合用，可調(diào)神醒腦、緩解抑郁。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，針刺可以降低慢性應(yīng)激抑郁大鼠血清、海馬、額葉皮層炎性細(xì)胞因子IL－1β、IL－6和TNF－α的表達(dá)，緩解外周和中樞免疫炎癥反應(yīng)。這可能是針刺發(fā)揮抗抑郁效應(yīng)的機(jī)制之一。

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