黎音亮 張峰 孫愛軍 葛均波

(復旦大學附屬中山醫(yī)院心內(nèi)科，上海 200032)

冠狀動脈粥樣硬化是一種脂質(zhì)相關(guān)的慢性炎性免疫疾病。樹突狀細胞(dendritic cells，DCs)廣泛分布于人體器官，是目前已知功能最強大的專職抗原提呈細胞，對炎性免疫舉足輕重。根據(jù)表型及功能不同，外周血DCs前體可分為兩種亞型：促使Th1免疫應(yīng)答的髓系DCs(myeloid DCs，mDCs)和促使Th2免疫應(yīng)答的淋巴系DCs(plasmacytoid DCs，pDCs)。無論在動脈粥樣硬化早期病變還是晚期的復合斑塊中，DCs的聚集都明顯增強，而其在正常血管組織中卻分布很少[1]。有研究[2]表明，冠心病患者血液循環(huán)中DCs的絕對數(shù)量高于健康對照組，其中mDCs的絕對數(shù)量、百分比及 mDC/pDC比值均高于對照組，但不同亞型冠心病的DCs表達水平、功能和作用目前仍未闡明。

本研究參考了2012年美國不穩(wěn)定心絞痛/非ST段抬高心肌梗死管理指南和2013年穩(wěn)定性冠心病新定義。這些指南與定義將冠心病患者分為不同組[穩(wěn)定型冠心病(stable coronary artery disease，SCAD)、不穩(wěn)定型心絞痛(unstable angina，UA)、非ST段抬高型心肌梗死(non-ST-elevation myocardial infarction，NSTEMI)、ST段抬高型心肌梗死(ST-elevation myocardial infarction，STEMI)]。

1 資料與方法

1.1 入選與分組 選取我院心內(nèi)科2008年1月—2008年3月住院疑似冠心病患者81例，入院后行冠脈造影。以冠狀動脈直徑狹窄≥50％為有意義。按冠脈造影結(jié)果分組：(1)陰性組(N組)：冠脈狹窄<50％；(2)穩(wěn)定型冠心病組(SCAD組)：冠脈造影證實至少1支或以上冠脈狹窄，胸痛1個月以上，發(fā)作誘因、疼痛強度、疼痛時間、發(fā)作次數(shù)、硝酸甘油服用量和起效時間穩(wěn)定不變者；(3)不穩(wěn)定型心絞痛組(UA組)：冠脈造影證實至少1支或以上冠脈狹窄，1個月內(nèi)心絞痛，或在相對穩(wěn)定的勞力相關(guān)心絞痛基礎(chǔ)上出現(xiàn)的逐漸增強、誘發(fā)閾值降低的心絞痛，或在休息時發(fā)作的心絞痛。肌鈣蛋白和血清心肌酶陰性；(4)非ST段抬高型心肌梗死組(NSTEMI組)：冠脈造影證實至少1支或以上冠脈狹窄，臨床癥狀與UA組相似，但心肌鈣蛋白T(cTnT)或血清肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)陽性，且心電圖不出現(xiàn)典型ST段抬高改變；(5)ST段抬高型心肌梗死組(STEMI組)：冠脈造影證實至少1支或以上冠脈狹窄，cTnT、血清心肌酶CK-MB陽性，心電圖出現(xiàn)典型ST段抬高改變。

1.2 細胞計數(shù)及結(jié)果判定 所有入選者在入院后24 h內(nèi)抽取靜脈血3 mL，NSTEMI和STEMI患者于入院7 d后再次采血。應(yīng)用全自動生化分析儀檢測白細胞數(shù)、淋巴細胞含量、TC、TG、LDL-C、HDL-C等。采用流式細胞四色分析法檢測DCs及其亞型的比例并計算每毫升絕對數(shù)。

所有對象采血2 h內(nèi)進行全血樣本熒光抗體染色，實驗管由PE標志的CD1c 抗體定義mDC1s，F(xiàn)ITC 標志的CD303抗體定義pDCs，APC 標志的CD141抗體定義mDC2s，PE-Cy5標志的CD14和CD19抗體定義單核細胞和B細胞；對照管加入鼠同型對照單克隆抗體。加入紅細胞裂解液，離心后加入固定液和終止死細胞標志物，24 h內(nèi)用FACS流式細胞儀檢測。采用CELLQuest軟件分析結(jié)果，圈定外周血pDCs、mDC1s和mDC2s。

2 結(jié) 果

2.1 一般資料比較 研究入選情況：N組18例、SCAD組17例、UA組15例、NSTEMI組15例、STEMI組16例。5組對象的年齡、性別、危險因素(高血壓、糖尿病、吸煙、高脂血癥)差異均無統(tǒng)計學意義。

2.2 冠心病患者外周循環(huán)DCs前體及亞型表達水平的分析 5組外周循環(huán)DCs及亞型mDCs、mDC1s、mDC2s、pDCs占外周循環(huán)白細胞的比例和在每毫升外周血中的絕對數(shù)見表1，5組外周循環(huán)mDCs與pDCs比值見表1。

表1 各組外周血DCs及亞型的比例和絕對數(shù)

2.3 心肌梗死患者急性期外周循環(huán)DCs前體及亞型的變化 NSTEMI和STEMI患者為急性心肌梗死患者，入院1 d內(nèi)和7 d后外周循環(huán)DCs及其亞型mDCs、mDC1s、mDC2s、pDCs占外周循環(huán)白細胞的比例和在每毫升外周血中的絕對數(shù)見表2。

表2 心肌梗死患者急性期外周血DCs及亞型比例和絕對數(shù)

3 討 論

本研究將冠心病患者分為4個組，反映動脈粥樣硬化斑塊：從穩(wěn)定-不穩(wěn)定-破裂-血栓形成-血管完全閉塞的過程。以流式細胞儀四色分析法計數(shù)不同亞組冠心病患者外周循環(huán)DCs前體及亞型的比例及絕對數(shù)，探討DCs在冠心病發(fā)展中的作用。

本研究發(fā)現(xiàn)，與N組相比，UA患者外周循環(huán)DCs明顯增多，可能原因有：各種冠心病危險因素影響DCs的數(shù)量和功能；高血糖會顯著增強DCs內(nèi)活性氧的水平，促進DCs成熟，使DCs激活T淋巴細胞的能力明顯增強[3]；經(jīng)煙堿處理的DCs促淋巴細胞增殖的作用加強，T淋巴細胞分泌細胞因子的能力提高而促進粒細胞和CD34+祖細胞從骨髓釋放到血液，增加了mDCs的動員，導致DCs數(shù)量增加[4]。與N組比較，UA患者的危險因素和炎性免疫增強，DCs數(shù)量增多，從而使DCs刺激T細胞及產(chǎn)生細胞因子的能力增強。

本研究發(fā)現(xiàn)，與N組相比，UA患者外周循環(huán)mDCs和mDC1s明顯增多，pDCs無變化。動脈粥樣硬化早期即有活化T細胞浸潤，以CD4+T細胞為主，Th1多于Th2。mDCs分泌大量的IL-12，促使發(fā)生Th1免疫應(yīng)答，參與了斑塊的不穩(wěn)定過程[1]。本研究解釋了冠心病中Th1和IL-12增多的可能原因，即mDCs可能參與Th1應(yīng)答增強。

本研究還發(fā)現(xiàn)，急性心肌梗死患者入院時DCs及其亞型明顯減少，7 d后外周循環(huán)DCs、mDCs、mDC1s、pDCs較入院時均明顯升高，可能原因如下：在冠心病急性期，血液循環(huán)中的大量DCs遷移到粥樣斑塊中；DCs可能流入淋巴，進入?yún)^(qū)域淋巴結(jié)，進而激活T細胞；DCs亦有可能遷移到壞死心肌中，參與壞死心肌的炎性免疫，造成外周循環(huán)中DCs數(shù)量的下降[5]。

從SCAD到急性心肌梗死，動脈粥樣硬化斑塊經(jīng)歷了從穩(wěn)定到破裂的過程，外周血DCs的比例和數(shù)量也經(jīng)歷了穩(wěn)定-增多-驟然下降的過程，間接反映了DCs可能參與斑塊的發(fā)生發(fā)展及破裂過程。今后應(yīng)進一步觀察大樣本不同類型冠心病患者外周血DCs及其亞型的數(shù)量及比例，同時應(yīng)從DCs的功能方面探索動脈粥樣硬化的發(fā)病機制。

[1]Paulson KE,Zhu SN,Chen M,et al.Resident intimal dendritic cells accumulate lipid and contribute to the initiation of atherosclerosis [J].Circ Res,2010,106(2):383-390.

[2]Shi H,Ge J,Fang W,et al.Peripheral-blood dendritic cells in men with coronary heart disease [J].Am J Cardiol,2007,100(4):593-597.

[3]姚康，葛均波，孫愛軍，等.高糖對人單核細胞源樹突狀細胞分化成熟和免疫功能的影響及其機制研究[J].中華心血管病雜志,2006,34 (1):60-64 .

[4]Aicher A,Heeschen C,Mohaupt M,et al.Nicotine strongly activates dendritic cell-mediated adaptive immunity: potential role for progression of atherosclerotic lesions[J].Circulation,2003,107(4):604-611.

[5]Kretzschmar D,Betge S,Windisch A,et al.Recruitment of circulating dendritic cell precursors into the infarcted myocar-dium and pro-inflammatory response in acute myocardial infarction[J].Clin Sci (Lond),2012,123(6):387-398.