董春瑤 高政

·實(shí)驗(yàn)研究·

阿托伐他汀對(duì)大鼠腦缺血再灌注腦組織TNF-α表達(dá)的影響

董春瑤 高政

目的 探討阿托伐他汀對(duì)大鼠腦缺血再灌注后腦組織中炎性細(xì)胞腫瘤壞死因子-α (TNF-α)表達(dá)的影響。方法 將54只SD大鼠隨機(jī)分為三組, 各18例, 假手術(shù)組、腦缺血再灌注組(對(duì)照組)、阿托伐他汀組(實(shí)驗(yàn)組)。利用線栓法制備SD大鼠腦缺血再灌注模型, 實(shí)驗(yàn)組于造模前14 d給予阿托伐他汀10 mg/(kg·d)灌胃治療；假手術(shù)組、對(duì)照組分別給予等容積生理鹽水。免疫組織化學(xué)方法檢測不同再灌注時(shí)間點(diǎn)TNF-α的表達(dá)。結(jié)果 對(duì)照組TNF-α陽性表達(dá)細(xì)胞數(shù)在缺血2 h再灌注2、6、24 h均明顯高于假手術(shù)組(P＜0.01)；實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組TNF-α陽性表達(dá)細(xì)胞數(shù)明顯減少, 再灌注2、6 h差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05), 再灌注24 h, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。結(jié)論 阿托伐他汀能抑制大鼠腦缺血再灌注腦組織炎性細(xì)胞TNF-α的表達(dá)。

阿托伐他汀；腦缺血；再灌注；腫瘤壞死因子-α

阿托伐他汀是他汀類藥物的一種, 它除了具有強(qiáng)效安全的調(diào)脂、抗動(dòng)脈粥樣硬化的療效外, 還有多種其他作用, 如抗炎、抗氧化等［1］。臨床常用于治療高膽固醇血癥, 此外對(duì)于糖尿病導(dǎo)致的血管動(dòng)脈硬化、急性冠狀動(dòng)脈綜合征和急性缺血性腦血管病的治療方面也發(fā)揮了積極的作用［2］。本研究利用大鼠腦缺血再灌注模型, 對(duì)該模型預(yù)處理阿托伐他汀藥物, 探討其對(duì)腦缺血再灌注后腦組織炎性細(xì)胞腫瘤壞死因子-α(TNF-α)表達(dá)的影響。

1 材料與方法

1.1 材料 健康雄性(SD)大鼠54只, 體重180～220 g, 隨機(jī)分為3組,各18例, 分別為假手術(shù)組、對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)組。

1.2 方法

1.2.1 動(dòng)物模型制備及給藥 參照文獻(xiàn)［3, 4］描述的大腦中動(dòng)脈線栓法制作大腦中動(dòng)脈腦缺血模型。實(shí)驗(yàn)組大鼠術(shù)前14 d開始1次/d給予阿托伐他汀混懸液10.0 mg/(kg·d)灌胃,阿托伐他汀劑量選擇參考Oria de Suarez［5］和Hong［6］；假手術(shù)組和對(duì)照組給予等容積生理鹽水灌胃。各組按缺血2 h再灌注2、6、24 h分別進(jìn)行檢測。

1.2.2 取材及SP免疫組織化學(xué)染色 不同再灌注時(shí)間點(diǎn)麻醉處死大鼠后斷頭取腦速凍, 行冠狀切片、石蠟包埋、做免疫組化染色, 顯微鏡下觀察并計(jì)數(shù)陽性細(xì)胞數(shù)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差( x-±s)表示, 采用t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

對(duì)照組TNF-α陽性表達(dá)細(xì)胞數(shù)在缺血2 h再灌注2、6、24 h均明顯高于假手術(shù)組,差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組TNF-α陽性表達(dá)細(xì)胞數(shù)明顯減少, 再灌注2、6 h差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05), 再灌注24 h, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01), 詳見表1, 圖1。

表1 三組缺血2 h再灌注2、6、24 h的TNF-α陽性表達(dá)( x-±s)

圖1 各相同再灌注時(shí)間點(diǎn)TNF-α表達(dá)的比較

假手術(shù)組可見少量TNF-α的陽性細(xì)胞表達(dá)；對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)組在缺血2 h再灌注24 h TNF-α陽性細(xì)胞表達(dá)數(shù)達(dá)高峰；對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組與假手術(shù)組比較, TNF-α陽性細(xì)胞表達(dá)數(shù)均顯著增多, 實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較TNF-α陽性細(xì)胞表達(dá)數(shù)減少, 再灌注24 h差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。

3 討論

近年來研究發(fā)現(xiàn), 他汀類藥物具有降脂和非降脂雙重作用。非降脂作用包括抗炎、抗氧化和抗興奮毒性等, 其中抗炎作用在腦缺血再灌注損傷中發(fā)揮了重要的作用。腦缺血和再灌注損傷中炎癥反應(yīng)的多個(gè)過程均可被阿托伐他汀所抑制［7］。研究中發(fā)現(xiàn), 腦缺血再灌注會(huì)引起一系列炎癥反應(yīng)包括黏附分子的表達(dá)、白細(xì)胞激活和多種細(xì)胞因子的共同作用［8］。其中TNF-α在腦缺血再灌注損傷中發(fā)揮的作用日益受到人們的重視。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明, TNF-α參與了急性腦損傷過程, 阿托伐他汀可抑制腦缺血再灌注損傷過程中TNF-α的表達(dá),從而減輕神經(jīng)功能損傷［9］。阿托伐他汀減少TNF-α表達(dá)的機(jī)制可能與其減弱炎癥細(xì)胞向斑塊內(nèi)趨化和聚集有關(guān), 此外抑制巨噬細(xì)胞sICAM-1及MMP的表達(dá)也是減少TNF-α的重要機(jī)制［10］。

本實(shí)驗(yàn)采用阿托伐他汀預(yù)處理大鼠腦缺血再灌注模型,檢測不同再灌注時(shí)間點(diǎn)大鼠腦組織中TNF-α的變化, 結(jié)果發(fā)現(xiàn)：阿托伐他汀治療后腦組織與單存缺血再灌注組比較TNF-α陽性細(xì)胞表達(dá)數(shù)明顯減少, 表明阿托伐他汀對(duì)炎癥反應(yīng)的多個(gè)過程產(chǎn)生抑制作用, 減少炎性因子TNF-α的表達(dá), 從而減少神經(jīng)元的缺血損傷, 起到了神經(jīng)保護(hù)的作用,可見阿托伐他汀是值得推薦的腦保護(hù)劑,在臨床治療過程中發(fā)揮積極的作用。

［1］ 趙水平,吳軍,譚利明,等.他汀類藥物對(duì)急性腦梗死的抗炎作用.中華醫(yī)學(xué)雜志, 2005, 85(40):2841-2845.

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［7］ 祝春燕,周濤.辛伐他汀對(duì)腦出血患者神經(jīng)功能恢復(fù)的作用.腦與神經(jīng)疾病雜志, 2014, 22(1):54-55.

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［9］ 秦國強(qiáng),施波,黃衛(wèi)民,等.阿托伐他汀對(duì)重型顱腦外傷患者血清炎癥介質(zhì)的影響.中國藥房, 2014, 25(16):1461-1464.

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2014-06-27］

110041 沈陽市第一人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)三科(董春瑤)；大連醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科(高政)通訊作者：高政