趙曉光，宋明霞，徐 潔，王玉潔(河南省焦作市人民醫(yī)院腫瘤內(nèi)科，河南 焦作 454002)

·論著·

UGT1A1基因多態(tài)性與小細(xì)胞肺癌伊立替康化療毒性和療效的研究

趙曉光，宋明霞，徐 潔，王玉潔
(河南省焦作市人民醫(yī)院腫瘤內(nèi)科，河南 焦作 454002)

目的探討中國人小細(xì)胞肺癌患者尿苷二磷酸葡糖苷酸轉(zhuǎn)移酶1A1(uridine diphosphate glucuronosyl transferase 1A1，UGT1A1)基因多態(tài)性分布與伊立替康(irinotecan，CPT-11)化療毒性和療效的關(guān)系。方法接受CPT-11聯(lián)合順鉑一線治療的小細(xì)胞肺癌患者34例，外周血中提取DNA，PCR法擴(kuò)增目的基因片段，直接測序法分析UGT1A1*28基因多態(tài)性，并與不良反應(yīng)及近期療效進(jìn)行分析。結(jié)果34例患者中UGT1A1*28野生純合型(TA 6/6)最常見為26例(76.5%)，其次為突變雜合型(TA 6/7)6例(17.6%)；突變純合型(TA 7/7)僅2例(5.9%)，UGT1A1*28非野生型可增加患者發(fā)生Ⅲ度以上腹瀉的風(fēng)險(P<0.05)。結(jié)論中國人小細(xì)胞肺癌患者UGT 1A1*28突變頻率低，TA 6/7和TA 7/7基因型可增加應(yīng)用CPT-11后III度以上腹瀉的風(fēng)險，但不影響療效。

小細(xì)胞肺癌；伊立替康；多態(tài)現(xiàn)象,遺傳

10.3969/j.issn.1007-3205.2014.09.003

伊立替康(irinotecan，CPT-11)聯(lián)合鉑類是小細(xì)胞肺癌主要化療方案，但該方案在臨床的應(yīng)用受到不良反應(yīng)的限制，隨著基因組學(xué)的發(fā)展，人們逐漸認(rèn)識到，不同個體對同一藥物的不同反應(yīng)，大多源于個體間基因的差異。目前多數(shù)學(xué)者研究集中于CPT-11活性產(chǎn)物的主要代謝酶尿苷二磷酸葡糖醛酸轉(zhuǎn)移酶1A1(UDP-glucuronosyltransferase1A1，UGT1A1)，其基因多態(tài)性改變酶的活性。中國漢族人使用CPT-11為主方案的重度遲發(fā)性腹瀉發(fā)生率明顯低于歐美高加索人，其原因與UGT1A1基因的多態(tài)性有關(guān)[1]。本研究應(yīng)用CPT-11聯(lián)合鉑類治療小細(xì)胞肺癌，探討UGT1A1*28基因多態(tài)性與CPT-11化療不良反應(yīng)及療效之間的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料:2010年6月—2014年2月河南省焦作市人民醫(yī)院收治的經(jīng)病理學(xué)或細(xì)胞學(xué)檢查證實的小細(xì)胞肺癌患者34例，其中男性22例，女性12例，年齡41～65歲，中位年齡49歲，所有患者美國東部協(xié)作腫瘤組(EasternCooperativeOncologyGroup,ECOG)評分為0～2分，預(yù)計生存期3個月以上，所有病例均有臨床可測量的病灶?；熐安楦文I功能、血常規(guī)及心電圖心臟彩超等，患者均需血常規(guī)指標(biāo)正常(白細(xì)胞計數(shù)≥4×109/L，血小板計數(shù)≥100×109/L)，無嚴(yán)重肝腎功能不全(膽紅素水平<1.25倍正常上限，肌酐<1.25倍正常上限)。所有患者均為一線化療并簽署知情同意書。

1.2 治療方法：CPT-11(由江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司提供，商品名艾力)60mg/m2，靜脈滴注，第1、8、15天；順鉑25mg/m2，靜脈滴注，第1～3天。21d為1個周期，直至疾病進(jìn)展或出現(xiàn)不可耐受的不良反應(yīng)。如治療后腹瀉>Ⅲ度并超過3d，則在接下來的治療中減少CPT-11劑量20%，減量后不再恢復(fù)劑量，出現(xiàn)骨髓抑制時給予粒細(xì)胞集落刺激因子，并酌情延期化療。

1.3UGT1A1*28基因型檢測：化療前留取患者外周血標(biāo)本3mL，根據(jù)外周血DNA提取試劑盒(北京賽諾科技有限公司)操作手冊，分批次統(tǒng)一提取基因組DNA。PCR擴(kuò)增UGTIAl基因的相應(yīng)片段，正反向引物分別為F，CTCCCl′GCAACCTITGTG-GACTGA；R，ACAACGAGGCGTCAGGTGCTA。每個25μL的PCR反應(yīng)包括5ng模板DNA，10×buffer，1mmol/L三磷酸脫氧核苷酸，Taqplus酶(大連Takara公司)和12.5μmol/L正向和反向引物各0.5μL。PCR反應(yīng)條件為初始變性94℃ 5min；變性94℃ 30s，退火30s，延伸68℃ 1min，35個循環(huán)；72℃延伸7min。PCR產(chǎn)物采用BigDyeTeminatorV3.1標(biāo)記并純化后在ABI-3730測序儀上進(jìn)行雙向測序。測序結(jié)果Chromas2.31軟件顯示，人工校讀分析UGTlAl上游啟動子序列A(TA)nTAA中的TA重復(fù)序列。

1.4 不良反應(yīng)與療效評價：主要研究終點為藥物不良反應(yīng)，次要研究終點為近期有效率。應(yīng)用影像學(xué)(CT或MRI)資料評定近期療效，按照美國國立癌癥研究所的實體瘤化療療效標(biāo)準(zhǔn)RECIST1.0[2]進(jìn)行評價，完全緩解(completeresponse，CR)、部分緩解(partialresponse，PR)、穩(wěn)定(stabledisease，SD)，疾病進(jìn)展(progressivedisease,PD)。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法：應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計數(shù)資料比較采用χ2檢驗，等級資料比較采用秩和檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1UGT1A1*28基因型與不良反應(yīng)：34例患者中，TA6/6野生基因型26例(76.5%)，TA6/7雜合基因型6例(17.6%)，TA7/7純合突變型2例(5.9%)。34例患者中，7例(20.6%)發(fā)生Ⅲ～Ⅳ度延遲性腹瀉，其中在UGT1A1*28TA6/6，TA6/7和TA7/7基因型中的發(fā)生率分別為7.7%(2/26)、50.0%(3/6)和100.0%(2/2)，后2種顯著高于前者(P<0.05)。見表1。

表1 UGTlAl*28基因型與腹瀉 Table 1 The relationship of UGT1A1*28 gene polymorphisms and diarrhea (n，%)

*P<0.05vsTA 6/6 by χ2test

2.2 UGT1A1*28基因型與療效：全部患者化療有效22例，其中UGT1A1*28野生型18例，非野生型4例，TA6/6、TA6/7 和TA7/7基因型之間療效差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

表2 UGT1A1*28基因型與療效 Table 2 The relationship of UGT1A1*28 gene polymorphisms and efficacy (n，%)

CR：complete response;PR:partial response;SD:stable disease;PD:progressive disease

3 討 論

小細(xì)胞肺癌由于其獨特的生物學(xué)特性，初治患者對化療有著較高的反應(yīng)性，拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅰ抑制劑CPT-11是近年來廣泛應(yīng)用于小細(xì)胞肺癌治療的抗癌藥物，但藥物不良反應(yīng)及療效存在個體差異，不同患者接受相同劑量強(qiáng)度的化療藥物可以產(chǎn)生不同的反應(yīng)[3]。近年來，隨著藥物遺傳學(xué)和藥物基因組學(xué)的研究，關(guān)于CPT-11的化療不良反應(yīng)與人類基因相關(guān)性的基礎(chǔ)和臨床研究也越來越受到廣大臨床醫(yī)生的關(guān)注。

CPT-11屬于細(xì)胞毒類藥物，進(jìn)入人體可通過羧酸酯作用轉(zhuǎn)化成為活性形式7-乙基-10羥基喜樹堿(7-Ethyl-10-Hydroxycamptothecin，SN-38)，SN-38是一種拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑，可以干擾DNA復(fù)制和轉(zhuǎn)錄，具有殺傷腫瘤的作用[4]。研究[5]發(fā)現(xiàn)，SN-38具有更強(qiáng)的細(xì)胞毒性，能引起遲發(fā)性腹瀉，UGT1A1酶能有效代謝SN-38，將其滅活成為無活性的SN-38G，CPT-11不良反應(yīng)與UGT1A1基因多態(tài)性有關(guān)。國外文獻(xiàn)[6]報道UGT1A1家族基因位點改變多達(dá)50多種，其中UGT1A1*28基因多態(tài)性與CPT-11不良反應(yīng)和療效的關(guān)系被廣泛關(guān)注。研究[7]顯示，在亞洲人、高加索人和非洲人之間UGTlAl差異有統(tǒng)計學(xué)意義，白種人UGTlAl*28的突變頻率較高，UGTlAl*28純合突變型TA7/7占10%～15%，UGTlAl*28雜合型TA6/7占35%～50%，而TA6/6野生型只占40%～50%。另一項對539例漢族人UGT1A1*28 基因多態(tài)性分布頻率的研究[8]發(fā)現(xiàn)，UGTlAl基因啟動子區(qū)TA6/6野生型占79.7%，TA6/7雜合基因型占15.6%，TA7/7純和型占4.7%。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，基因型非野生型Ⅲ～Ⅳ度腹瀉的發(fā)生風(fēng)險明顯高于野生型，與日本、歐美學(xué)者[9]得出的結(jié)論基本相符，原因可能為CPT-11的活性形式為SN-38，可抑制DNA單鏈斷裂后修復(fù)，干擾DNA復(fù)制和轉(zhuǎn)錄，肝和腸內(nèi)的代謝酶UGT1A1可將SN-38代謝為滅活產(chǎn)物SN-38G，UGT1A1*28 多態(tài)性使UGT1A1活性降低，從而對SN-8的滅活能力下降，使其對腸黏膜損傷加重，引起嚴(yán)重的腹瀉。

基因型指導(dǎo)下的個體化治療是目前研究的熱點[10]。UGT1A1*28基因多態(tài)性與CPT-11療效相關(guān)性受到學(xué)者們的廣泛關(guān)注，國外多數(shù)研究并發(fā)現(xiàn)不同的UGT1A1基因型之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義[11]。本研究對34例小細(xì)胞肺癌患者應(yīng)用含CPT-11方案治療，雖觀察到TA6/6野生型患者在緩解率方面略高于TA6/7 及TA7/7非野生型患者，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義，其原因可能與UGT1A1突變型患者發(fā)生嚴(yán)重的不良反應(yīng)比例較高、常常導(dǎo)致藥物劑量下調(diào)或化療療程提前終止、影響了患者的療效有關(guān)。

綜上所述，應(yīng)用含CPT-11治療的小細(xì)胞肺癌患者，UGT1A1*28基因多態(tài)性非野生基因型可增加Ⅲ～Ⅳ度嚴(yán)重腹瀉的發(fā)生風(fēng)險，測定UGT1A1*28基因多態(tài)性有利于防止CPT-11化療相關(guān)不良反應(yīng)。源于藥物代謝酶UGT1A家族中各個基因多態(tài)性分布在不同人種之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義，中國人群的UGT1A1*28野生基因型TA6/6分布頻率較高。目前尚無證據(jù)顯示不同基因型之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義，鑒于本研究樣本量較小，建議進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量，為探索適合于我國小細(xì)胞肺癌患者的個體化治療提供更多的循證醫(yī)學(xué)支持。

[1] 王巖，徐建明，沈琳，等.中國人尿苷二磷酸葡糖苷酸轉(zhuǎn)移酶1A基因多態(tài)性與伊立替康毒性的相關(guān)性[J].中華腫瘤雜志，2007，29(12):913-916.

[2] 孫燕，石遠(yuǎn)凱.臨床腫瘤學(xué)手冊[M].5版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2007：133-147.

[3] 李瑋，喬冶，劉愛東.廣泛期小細(xì)胞肺癌臨床預(yù)后因素分析[J].臨床薈萃，2009，24(21)：1861-1864.

[4] 劉偉先，趙偉珠.基因多態(tài)性與胃癌個體化治療的研究進(jìn)展[J].臨床薈萃，2012，27(17)：1549-1554.

[5] BRAUN MS，RICHMAN SD，THOMPSON L，et al.Association of molecular markers with toxicity outcomes in a randomized trial of chemotherapy for advanced colorectal cancer: the FOCUS trial[J].J Clin Oncol，2009，27(33)：5519-5528.

[6] KADAKOL A，GHOSH SS，SAPPAL BS，et al.Genetic lesions of bilirubin uidine-diphosphoglucuronate glucuronosyl transferase (UGT1A1) causing Crigler-Najjar and Gilbert syndromes correlation of genotype to phenotype[J].Hum Mutat，2000，16 (4)：297-306.

[7] MARCUELLO E，ALTéS A，MENOYO A，et al.UGT1A1 gene variations and irinotecan treatment in patients with metastatic colorectal cancer[J].Br J Cancer，2004，91(4)：678-682.

[8] ZHANG A，XING Q，QIN S，et al.Intra-ethnic differences in genetic variants of the UGT-glucuronosyl transferase 1A1 gene in Chinese populations[J].Pharmacogenomics J,2007，7(5)：333-338.

[9] MASSACESI C，TERRAZZINO S， MARCUCCI F，et al.Uridine diphosphate glucuronosyl transferase 1A1 promoter polymorphism predicts the risk of gastrointestinal toxicity and fatigue induced by irinotecan-based chemotherapy[J].Cancer，2006，106(5)：1007-1016.

[10] 馬玉泉，楊曉光，劉暉，等.p27基因多態(tài)性與食管癌的關(guān)聯(lián)研究[J].河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2008，29(4)：515-518.

[11] GLIMELIUS B，GARMO H，BERGLUND A，et al.Prediction of irinotecan and 5-fluorouracil toxicity and response in patients with advanced colorectal cancer[J].Pharmacogenomics J，2011，11(1)：61-71.

(本文編輯：趙麗潔)

CORRELATIONBETWEENUGT1A1GENEPOLYMORPHISMSANDTOXICITYANDEFFICACYOFIRINOTECANCHEMOTHERAPYONSMALLCELLLUNGCANCERPATIENTS

ZHAOXiaoguang，SONGMingxia，XUJie，WANGYujie
(DepartmentofMedicalOncology,JiaozuoPeople′sHospital,HenanProvince,Jiaozuo454002,China)

ObjectiveToobservetheassociationofuridinediphosphateglucuronosyltransferase1A1 (UGT1A1)genepolymorphismwiththetoxicityandtoxicityofirinotecan(CPT-11)chemotherapyinChinesepatientswithsmallcelllungcancer(SCLC).MethodsIn34patientswithSCLCwhohad

first-linetreatmentwithirinotecanpluscisplatin,genomicDNAsampleswereextracted,leukocytesintheperipheralblood,andthegenotypesweredeterminedbyanalyzingthesequenceoftheUGT1A1gene.TheinfluenceoftheUGT1A1* 28polymorphismontheshort-termefficacyandtoxicityofirinotecanwasanalyzed.ResultsTheUGT1A1genotypesin34consecutivepatientswereasfollowsUGT1A1* 28homozygouswild-typeTA6/6 ( 26cases,76.5%),heterozygousmutant-typeTA6/7( 6cases,17.6%),homozygousmutant-typeTA7/7(2cases,5.9%).MarkedincreasesindiarrheawereobservedinpatientswhohadtheTA6/7orTA7/7genotype(P<0.05).ConclusionThepolymorphismofUGTIAl*28inChineseSCLCpatientswaslower,TA6/7orTA7/7increasedtheriskofdevelopinggradeormoreseverediarrheaforthepatientsafterreceivingirinotecantreatmentbuthadnoinfluenceonefficacyofchemotherapy.

smallcelllungcarcinoma；irinotecan；polymorphism,genetic

2014-07-25；

2014-08-29

趙曉光(1977-)，男，河南焦作人，河南省焦作市人民醫(yī)院副主任醫(yī)師，醫(yī)學(xué)碩士，從事惡性腫瘤診治研究。

R734.2

A

1007-3205(2014)09-1000-03