黃向榮 緒紅霞 陳秀華 王冬究 計(jì)文芳

氣相色譜法測(cè)定動(dòng)物油脂中反式脂肪酸

黃向榮 緒紅霞 陳秀華 王冬究 計(jì)文芳

反式脂肪酸；動(dòng)物油脂；氣相色譜

反式脂肪酸是一類不飽和脂肪酸, 許多研究表明, 反式脂肪酸對(duì)機(jī)體的生物學(xué)作用主要表現(xiàn)在對(duì)機(jī)體多不飽和脂肪酸代謝的干擾, 對(duì)血脂和脂蛋白的影響及對(duì)胎兒生長(zhǎng)發(fā)育的抑制作用［1］。目前, 關(guān)于有關(guān)脂肪酸分析的報(bào)道較多, 而對(duì)動(dòng)物油脂中反式脂肪酸的報(bào)道卻較少。本文用毛細(xì)管氣相色譜法測(cè)定動(dòng)物油脂中的反式脂肪酸, 獲得較滿意的結(jié)果, 現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1. 1 儀器 Agilent 6890型氣相色譜儀；7683自動(dòng)進(jìn)樣器；HP Chemstation 化學(xué)工作站(美國(guó)安捷倫公司)；HWS26型電熱水浴鍋：上海一恒科技有限公司。

1. 2 試劑和樣品 37種脂肪酸甲酯混合標(biāo)準(zhǔn)品、三氟化硼-甲醇, 均為Sigma公司產(chǎn)品；正己烷；甲醇、氫氧化鈉、無(wú)水硫酸鈉：均為分析純；樣品選用豬油、牛油、羊油、雞油、鴨油5種, 均保存于4℃冰箱待檢。

1. 3 色譜條件 色譜柱：SP-2560毛細(xì)管柱(100.0 mm×0.25 mm×0.20 μm);分流比25:1；柱溫：程序升溫：初始溫度140℃, 保持5 min,以3.00℃/min升至230℃, 保持10 min；進(jìn)樣口溫度：250℃；檢測(cè)器:氫火焰離子化檢測(cè)器(FID)溫度為260℃；載氣：高純氮；柱流速：1.0 ml/min(恒流)；氫氣流速：40 ml/min;空氣流速400 ml/min;進(jìn)樣量1.0 μl。

1. 4 樣品甲酯化［2］取熔融后的油脂樣品3~4滴于50 ml三角燒瓶中, 加5 ml 4 mol/L氫氧化鈉-甲醇溶液, 使之溶解。于80℃水浴加熱皂化回流30 min后加入12%~15%的三氟化硼-甲醇溶液2 ml, 再回流。冷卻至室溫后加入正己烷和少量飽和氯化鈉溶液并輕搖三角燒瓶數(shù)次, 靜置分層。取上清液GC測(cè)定。

2 結(jié)果

2. 1 色譜分析中色譜柱的選擇由于脂肪酸各個(gè)峰之間比較難分離, 較短的色譜柱達(dá)不到分離的目的。若要完全分離檢測(cè)順、反式脂肪酸, 應(yīng)采用長(zhǎng)色譜柱, 當(dāng)然也不是越長(zhǎng)越好, Sidisy等［3］證明當(dāng)色譜柱柱長(zhǎng)從100 m增加到150 m,順?lè)词疆悩?gòu)體的分離僅有細(xì)微的改變, 但分析時(shí)間卻大大延長(zhǎng)。本實(shí)驗(yàn)采用的100 m長(zhǎng)色譜柱, 能完全分離檢測(cè)順、反式脂肪酸。分離譜圖見(jiàn)圖1。

2. 2 程序升溫對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響采用一級(jí)程序升溫, 由于十八碳三稀酸甲酯組分較多, 難以分離?？疾觳煌跏紲囟葘?duì)樣品中反式脂肪酸分離度的影響, 最后確定最佳色譜程序?yàn)槌跏紲囟?40℃, 保持5 min,以3.00℃/min升至230℃, 保持10 min。在此色譜柱溫條件下, 37種脂肪酸甲酯混合標(biāo)準(zhǔn)品中所有順、反式脂肪酸都實(shí)現(xiàn)了基線分離且分形對(duì)稱。

2. 3 線性范圍及最低檢測(cè)限脂肪酸甲酯混合標(biāo)準(zhǔn)為代表,測(cè)定六種物質(zhì)的線性范圍和檢測(cè)限, 在最佳色譜條件下, 進(jìn)行氣相色譜分析, 以各組分濃度為橫坐標(biāo), 對(duì)應(yīng)峰面積為縱坐標(biāo), 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。在0.025~1.000 mg/ml的濃度范圍內(nèi)各物質(zhì)回歸方程的相關(guān)系數(shù)為0.994以上。以基線噪聲的3倍所對(duì)應(yīng)的濃度為方法的檢測(cè)限, 檢測(cè)限3.89~7.85 μg/ml, 完全可以滿足檢測(cè)要求。

圖1 脂肪酸甲酯混合標(biāo)準(zhǔn)液氣相色譜圖

2. 4 方法的精密度和回收率取同一豬油樣品9份, 分別加入高、中、低3個(gè)水平的反式脂肪酸混合標(biāo)準(zhǔn), 樣品甲酯化處理后進(jìn)行測(cè)定, 每個(gè)水平重復(fù)測(cè)定3次, 檢測(cè)結(jié)果取平均值。計(jì)算結(jié)果見(jiàn)表1, 回收率為 86.0%~92.5%。RSD為3.52%~4.63%。

2. 5 樣品的測(cè)定本實(shí)驗(yàn)對(duì)50份動(dòng)物油脂樣品采用校正面積歸一法進(jìn)行了定量檢測(cè), 檢測(cè)中反式脂肪酸含量為5.15%~7.67%, 均未超過(guò)丹麥等國(guó)對(duì)反式脂肪酸的限制量。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果

3 討論

本文建立的動(dòng)物油脂中反式脂肪酸測(cè)定的氣相色譜法,具有操作簡(jiǎn)便, 準(zhǔn)確, 各種脂肪酸分離好等優(yōu)點(diǎn), 為油脂中反式脂肪酸的研究提供了一種切實(shí)可行的分析方法。

［1］ 陳翠華.反式脂肪酸危害人體健康.中國(guó)油脂,1995,20(5):62.

［2］ Kramer JK, Blackadar CB, Zhou J, et al. Evaluation of two GC columns (60-m SUPELCOWAX 10 and 100-m CP sil 88) for analysis of milkfat with emphasis on CLA, 18:1, 18:2and18:3isomers,and short-and long-Chain FA. Lipids, 2002,37(8):823-835.

［3］ 美國(guó)要求標(biāo)注反式脂肪酸含量.食品與發(fā)酵工業(yè), 2004,30(1): 117.

201103 上海市閔行區(qū)疾病預(yù)防控制中心