李林軒　唐美瓊　韋坤華等

摘要：分別以MS、1/2MS為基本培養(yǎng)基，采用正交試驗研究植物生長調(diào)節(jié)劑對青天葵根狀莖繁殖和新球莖誘導(dǎo)的影響，進而優(yōu)化青天葵組織培養(yǎng)繁殖技術(shù)。結(jié)果表明：MS+2.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+0.2 mg/L IAA利于根狀莖增殖，增殖倍數(shù)為6.5；MS+1.5 mg/L NAA+0.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L IBA適于誘導(dǎo)新球莖獲得再生植株，誘導(dǎo)系數(shù)為11.5，球莖移栽發(fā)芽成活率達到90%。

關(guān)鍵詞：青天葵；根狀莖；球莖；誘導(dǎo)；增殖

中圖分類號： Q943.1 文獻標(biāo)志碼： A 文章編號：1002-1302（2014）07-0066-03

收稿日期：2013-10-17

基金項目：廣西自然科學(xué)基金（編號：2011GXNSFA018189）。

作者簡介：李林軒（1986—），男，廣西全州人，助理研究員，從事中藥資源保護與開發(fā)利用研究。E-mail：starry1125@sina.com。

通信作者：白隆華，研究員，從事中藥資源保護與利用研究。E-mail：whitefh2008@126.com。青天葵為蘭科植物毛唇芋蘭[Nervilia fordii （Hance）Schitr]的葉或帶球莖的葉，別名獨葉蓮、獨腳蓮、珍珠葉、墜千斤、鐵帽子、山米子、青蓮。青天葵性平，味苦，甘、涼，有清肺止咳、健脾消積、清熱解毒、消結(jié)散疬等功效，主治肺癆咯血、肺熱咳嗽、小兒肺炎、急性喉炎、 口腔炎、咽喉腫痛、瘰疬、瘡瘍腫毒、跌打損傷等[1]。青天葵是廣西特產(chǎn)藥材，也是我國出口創(chuàng)匯主要藥材，經(jīng)濟價值較高，主產(chǎn)于廣西、廣東、四川、云南等地，屬于多年生宿根小草本。該物種瀕臨近危，已被列入中國物種紅色名錄[2]。栽培試驗發(fā)現(xiàn)，青天葵組培球莖不僅能正常生長，而且在相同條件下栽培組培球莖優(yōu)于野生球莖[3]。為了解決青天葵產(chǎn)業(yè)發(fā)展中種源短缺的問題[4-7]，本研究利用現(xiàn)代生物技術(shù)優(yōu)化青天葵組織培養(yǎng)條件，以期為青天葵組織培養(yǎng)規(guī)?；a(chǎn)育苗提供技術(shù)支撐。

1材料與方法

1.1材料

供試材料采自廣西藥用植物園科研基地內(nèi)引種栽培、生長健壯、無病蟲害的植株，經(jīng)廣西藥用植物園鑒定，選取其球莖為外植體。將球莖在洗潔精溶液中浸泡5 min，清洗干凈，用自來水沖洗10 min，置于0.1%氯化汞溶液（加1～2點的吐溫）浸泡消毒10 min，再用無菌水浸洗5次，然后直接將球莖接種于1/2MS+2.0 mg/L 6-BA培養(yǎng)基上[8]，培養(yǎng)條件為pH 值5.8，平均照度2 000 lx，光照時間12 h/d，溫度（25±3） ℃，30 d后將其誘導(dǎo)出芽形成根狀莖，作為試驗材料（圖1）。

1.2方法

1.2.1根狀莖繁殖取無菌根狀莖約2 cm長的小段，接入添加不同濃度的6-BA、NAA、IAA（表1）的MS基本培養(yǎng)基中，觀察其對青天葵根狀莖繁殖的影響。

3結(jié)論與討論

6-BA是最重要的細胞分裂素，能促進細胞分裂、非分化組織分化、側(cè)芽生長等；NAA是植物生長調(diào)節(jié)劑，具有促進細胞分裂與擴大、誘導(dǎo)形成不定根等作用；IAA是植物生長素，能促進細胞分裂與細胞生長，誘導(dǎo)形成不定根[9]。多種因素組合能更有效促進植物生長，因此在MS培養(yǎng)基中配合使用6-BA、NAA、IAA對青天葵生長具有較大影響。本研究表明，青天葵根狀莖增殖的最適培養(yǎng)基為MS+2.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+0.2 mg/L IAA，在該培養(yǎng)基上形成根狀莖的數(shù)量最多，增殖數(shù)為6.5倍，且根狀莖粗細適中。

青天葵為蘭科植物，和其他蘭科植物一樣靠球莖繁殖。蘭科植物球莖的增殖方式在蘭科植物工業(yè)化上尤為重要[10]。杜勤等對青天葵組織培養(yǎng)研究發(fā)現(xiàn)，在1/2MS+2.0 mg/L 6-BA+2.0 mg/L NAA的生根培養(yǎng)基上培養(yǎng)1個月，根莖上長出綠色的芽，并伸展成為葉柄和葉片，并在葉柄下端長出白色的根[8]，這與本研究結(jié)果相似，都是使用細胞分裂素和生長激素按1 ∶1比例進行培養(yǎng)，青天葵根狀莖可以直接形成植株。但是直接形成植株的誘導(dǎo)率遠低于新球莖誘導(dǎo)率，植株移栽成活率也低于球莖，且試管苗沒有球莖便于攜帶和運送，不利于青天葵大規(guī)模生產(chǎn)與種植。但可為新品種遺傳改良提供材料。本研究表明，球莖誘導(dǎo)的最佳培養(yǎng)基為MS+1.5 mg/L NAA+0.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L IBA，在該培養(yǎng)基中青天葵球莖誘導(dǎo)系數(shù)為11.5，且球莖質(zhì)量好，球莖發(fā)芽成活率達到90%。這與凌征柱等使用的MS+2.0 mg/L NAA誘導(dǎo)培養(yǎng)基[11]稍有不同，但都是使用高濃度生長激素進行球莖誘導(dǎo)。

參考文獻：

[1]國家中醫(yī)藥管理局. 中華本草：第8冊[M]. 上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1999：740-741.

[2]汪松，解炎.中國物種紅色名錄[M]. 北京：高等教育出版社，2004：455.

[3]吳慶華，凌征柱，陸永梅. 中藥青天葵組培球莖栽培的研究[J]. 時珍國醫(yī)國藥，2001，12（10）：958-958.

[4]姜靈敏，徐有明，張冬梅，等. 紅刺玫愈傷組織誘導(dǎo)再生體系的建立[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報，2012，28（4）：914-916.

[5]余桂紅，張旭，孫曉波，等. 大麥蘇啤4號幼胚愈傷組織的誘導(dǎo)及植株的高頻再生[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報，2013，29（5）：953-956.

[6]張寧寧，夏明霞，張瓊，等. 卡特蘭組織培養(yǎng)研究進展[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，41（4）：42-44.

[7]潘艷艷，那少眾，王福維，等. 全緣橐吾組培再生體系的研究[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，40（1）：56-59.

[8]杜勤，陳文利，王振華，等. 青天葵組織培養(yǎng)及植株再生的研究[J]. 中國中藥雜志，2005，30（11）：812-814.

[9]周維燕. 植物細胞工程原理與技術(shù)[M]. 北京：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社，2001.

[10]曹孜義，劉國民. 實用植物組織培養(yǎng)技術(shù)教程[M]. 蘭州：甘肅科學(xué)技術(shù)出版社，2002：145.

[11]凌征柱，梁學(xué)金，潘素芬，等. 青天葵誘導(dǎo)多球莖及叢生苗的研究[J]. 種子，1998（5）：35-36.

摘要：分別以MS、1/2MS為基本培養(yǎng)基，采用正交試驗研究植物生長調(diào)節(jié)劑對青天葵根狀莖繁殖和新球莖誘導(dǎo)的影響，進而優(yōu)化青天葵組織培養(yǎng)繁殖技術(shù)。結(jié)果表明：MS+2.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+0.2 mg/L IAA利于根狀莖增殖，增殖倍數(shù)為6.5；MS+1.5 mg/L NAA+0.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L IBA適于誘導(dǎo)新球莖獲得再生植株，誘導(dǎo)系數(shù)為11.5，球莖移栽發(fā)芽成活率達到90%。

關(guān)鍵詞：青天葵；根狀莖；球莖；誘導(dǎo)；增殖

中圖分類號： Q943.1 文獻標(biāo)志碼： A 文章編號：1002-1302（2014）07-0066-03

收稿日期：2013-10-17

基金項目：廣西自然科學(xué)基金（編號：2011GXNSFA018189）。

作者簡介：李林軒（1986—），男，廣西全州人，助理研究員，從事中藥資源保護與開發(fā)利用研究。E-mail：starry1125@sina.com。

通信作者：白隆華，研究員，從事中藥資源保護與利用研究。E-mail：whitefh2008@126.com。青天葵為蘭科植物毛唇芋蘭[Nervilia fordii （Hance）Schitr]的葉或帶球莖的葉，別名獨葉蓮、獨腳蓮、珍珠葉、墜千斤、鐵帽子、山米子、青蓮。青天葵性平，味苦，甘、涼，有清肺止咳、健脾消積、清熱解毒、消結(jié)散疬等功效，主治肺癆咯血、肺熱咳嗽、小兒肺炎、急性喉炎、 口腔炎、咽喉腫痛、瘰疬、瘡瘍腫毒、跌打損傷等[1]。青天葵是廣西特產(chǎn)藥材，也是我國出口創(chuàng)匯主要藥材，經(jīng)濟價值較高，主產(chǎn)于廣西、廣東、四川、云南等地，屬于多年生宿根小草本。該物種瀕臨近危，已被列入中國物種紅色名錄[2]。栽培試驗發(fā)現(xiàn)，青天葵組培球莖不僅能正常生長，而且在相同條件下栽培組培球莖優(yōu)于野生球莖[3]。為了解決青天葵產(chǎn)業(yè)發(fā)展中種源短缺的問題[4-7]，本研究利用現(xiàn)代生物技術(shù)優(yōu)化青天葵組織培養(yǎng)條件，以期為青天葵組織培養(yǎng)規(guī)?；a(chǎn)育苗提供技術(shù)支撐。

1材料與方法

1.1材料

供試材料采自廣西藥用植物園科研基地內(nèi)引種栽培、生長健壯、無病蟲害的植株，經(jīng)廣西藥用植物園鑒定，選取其球莖為外植體。將球莖在洗潔精溶液中浸泡5 min，清洗干凈，用自來水沖洗10 min，置于0.1%氯化汞溶液（加1～2點的吐溫）浸泡消毒10 min，再用無菌水浸洗5次，然后直接將球莖接種于1/2MS+2.0 mg/L 6-BA培養(yǎng)基上[8]，培養(yǎng)條件為pH 值5.8，平均照度2 000 lx，光照時間12 h/d，溫度（25±3） ℃，30 d后將其誘導(dǎo)出芽形成根狀莖，作為試驗材料（圖1）。

1.2方法

1.2.1根狀莖繁殖取無菌根狀莖約2 cm長的小段，接入添加不同濃度的6-BA、NAA、IAA（表1）的MS基本培養(yǎng)基中，觀察其對青天葵根狀莖繁殖的影響。

3結(jié)論與討論

6-BA是最重要的細胞分裂素，能促進細胞分裂、非分化組織分化、側(cè)芽生長等；NAA是植物生長調(diào)節(jié)劑，具有促進細胞分裂與擴大、誘導(dǎo)形成不定根等作用；IAA是植物生長素，能促進細胞分裂與細胞生長，誘導(dǎo)形成不定根[9]。多種因素組合能更有效促進植物生長，因此在MS培養(yǎng)基中配合使用6-BA、NAA、IAA對青天葵生長具有較大影響。本研究表明，青天葵根狀莖增殖的最適培養(yǎng)基為MS+2.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+0.2 mg/L IAA，在該培養(yǎng)基上形成根狀莖的數(shù)量最多，增殖數(shù)為6.5倍，且根狀莖粗細適中。

青天葵為蘭科植物，和其他蘭科植物一樣靠球莖繁殖。蘭科植物球莖的增殖方式在蘭科植物工業(yè)化上尤為重要[10]。杜勤等對青天葵組織培養(yǎng)研究發(fā)現(xiàn)，在1/2MS+2.0 mg/L 6-BA+2.0 mg/L NAA的生根培養(yǎng)基上培養(yǎng)1個月，根莖上長出綠色的芽，并伸展成為葉柄和葉片，并在葉柄下端長出白色的根[8]，這與本研究結(jié)果相似，都是使用細胞分裂素和生長激素按1 ∶1比例進行培養(yǎng)，青天葵根狀莖可以直接形成植株。但是直接形成植株的誘導(dǎo)率遠低于新球莖誘導(dǎo)率，植株移栽成活率也低于球莖，且試管苗沒有球莖便于攜帶和運送，不利于青天葵大規(guī)模生產(chǎn)與種植。但可為新品種遺傳改良提供材料。本研究表明，球莖誘導(dǎo)的最佳培養(yǎng)基為MS+1.5 mg/L NAA+0.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L IBA，在該培養(yǎng)基中青天葵球莖誘導(dǎo)系數(shù)為11.5，且球莖質(zhì)量好，球莖發(fā)芽成活率達到90%。這與凌征柱等使用的MS+2.0 mg/L NAA誘導(dǎo)培養(yǎng)基[11]稍有不同，但都是使用高濃度生長激素進行球莖誘導(dǎo)。

參考文獻：

[1]國家中醫(yī)藥管理局. 中華本草：第8冊[M]. 上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，1999：740-741.

[2]汪松，解炎.中國物種紅色名錄[M]. 北京：高等教育出版社，2004：455.

[3]吳慶華，凌征柱，陸永梅. 中藥青天葵組培球莖栽培的研究[J]. 時珍國醫(yī)國藥，2001，12（10）：958-958.

[4]姜靈敏，徐有明，張冬梅，等. 紅刺玫愈傷組織誘導(dǎo)再生體系的建立[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報，2012，28（4）：914-916.

[5]余桂紅，張旭，孫曉波，等. 大麥蘇啤4號幼胚愈傷組織的誘導(dǎo)及植株的高頻再生[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報，2013，29（5）：953-956.

[6]張寧寧，夏明霞，張瓊，等. 卡特蘭組織培養(yǎng)研究進展[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，41（4）：42-44.

[7]潘艷艷，那少眾，王福維，等. 全緣橐吾組培再生體系的研究[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，40（1）：56-59.

[8]杜勤，陳文利，王振華，等. 青天葵組織培養(yǎng)及植株再生的研究[J]. 中國中藥雜志，2005，30（11）：812-814.

[9]周維燕. 植物細胞工程原理與技術(shù)[M]. 北京：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社，2001.

[10]曹孜義，劉國民. 實用植物組織培養(yǎng)技術(shù)教程[M]. 蘭州：甘肅科學(xué)技術(shù)出版社，2002：145.

[11]凌征柱，梁學(xué)金，潘素芬，等. 青天葵誘導(dǎo)多球莖及叢生苗的研究[J]. 種子，1998（5）：35-36.

摘要：分別以MS、1/2MS為基本培養(yǎng)基，采用正交試驗研究植物生長調(diào)節(jié)劑對青天葵根狀莖繁殖和新球莖誘導(dǎo)的影響，進而優(yōu)化青天葵組織培養(yǎng)繁殖技術(shù)。結(jié)果表明：MS+2.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+0.2 mg/L IAA利于根狀莖增殖，增殖倍數(shù)為6.5；MS+1.5 mg/L NAA+0.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L IBA適于誘導(dǎo)新球莖獲得再生植株，誘導(dǎo)系數(shù)為11.5，球莖移栽發(fā)芽成活率達到90%。

關(guān)鍵詞：青天葵；根狀莖；球莖；誘導(dǎo)；增殖

中圖分類號： Q943.1 文獻標(biāo)志碼： A 文章編號：1002-1302（2014）07-0066-03

收稿日期：2013-10-17

基金項目：廣西自然科學(xué)基金（編號：2011GXNSFA018189）。

作者簡介：李林軒（1986—），男，廣西全州人，助理研究員，從事中藥資源保護與開發(fā)利用研究。E-mail：starry1125@sina.com。

通信作者：白隆華，研究員，從事中藥資源保護與利用研究。E-mail：whitefh2008@126.com。青天葵為蘭科植物毛唇芋蘭[Nervilia fordii （Hance）Schitr]的葉或帶球莖的葉，別名獨葉蓮、獨腳蓮、珍珠葉、墜千斤、鐵帽子、山米子、青蓮。青天葵性平，味苦，甘、涼，有清肺止咳、健脾消積、清熱解毒、消結(jié)散疬等功效，主治肺癆咯血、肺熱咳嗽、小兒肺炎、急性喉炎、 口腔炎、咽喉腫痛、瘰疬、瘡瘍腫毒、跌打損傷等[1]。青天葵是廣西特產(chǎn)藥材，也是我國出口創(chuàng)匯主要藥材，經(jīng)濟價值較高，主產(chǎn)于廣西、廣東、四川、云南等地，屬于多年生宿根小草本。該物種瀕臨近危，已被列入中國物種紅色名錄[2]。栽培試驗發(fā)現(xiàn)，青天葵組培球莖不僅能正常生長，而且在相同條件下栽培組培球莖優(yōu)于野生球莖[3]。為了解決青天葵產(chǎn)業(yè)發(fā)展中種源短缺的問題[4-7]，本研究利用現(xiàn)代生物技術(shù)優(yōu)化青天葵組織培養(yǎng)條件，以期為青天葵組織培養(yǎng)規(guī)?；a(chǎn)育苗提供技術(shù)支撐。

1材料與方法

1.1材料

供試材料采自廣西藥用植物園科研基地內(nèi)引種栽培、生長健壯、無病蟲害的植株，經(jīng)廣西藥用植物園鑒定，選取其球莖為外植體。將球莖在洗潔精溶液中浸泡5 min，清洗干凈，用自來水沖洗10 min，置于0.1%氯化汞溶液（加1～2點的吐溫）浸泡消毒10 min，再用無菌水浸洗5次，然后直接將球莖接種于1/2MS+2.0 mg/L 6-BA培養(yǎng)基上[8]，培養(yǎng)條件為pH 值5.8，平均照度2 000 lx，光照時間12 h/d，溫度（25±3） ℃，30 d后將其誘導(dǎo)出芽形成根狀莖，作為試驗材料（圖1）。

1.2方法

1.2.1根狀莖繁殖取無菌根狀莖約2 cm長的小段，接入添加不同濃度的6-BA、NAA、IAA（表1）的MS基本培養(yǎng)基中，觀察其對青天葵根狀莖繁殖的影響。

3結(jié)論與討論

6-BA是最重要的細胞分裂素，能促進細胞分裂、非分化組織分化、側(cè)芽生長等；NAA是植物生長調(diào)節(jié)劑，具有促進細胞分裂與擴大、誘導(dǎo)形成不定根等作用；IAA是植物生長素，能促進細胞分裂與細胞生長，誘導(dǎo)形成不定根[9]。多種因素組合能更有效促進植物生長，因此在MS培養(yǎng)基中配合使用6-BA、NAA、IAA對青天葵生長具有較大影響。本研究表明，青天葵根狀莖增殖的最適培養(yǎng)基為MS+2.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+0.2 mg/L IAA，在該培養(yǎng)基上形成根狀莖的數(shù)量最多，增殖數(shù)為6.5倍，且根狀莖粗細適中。

青天葵為蘭科植物，和其他蘭科植物一樣靠球莖繁殖。蘭科植物球莖的增殖方式在蘭科植物工業(yè)化上尤為重要[10]。杜勤等對青天葵組織培養(yǎng)研究發(fā)現(xiàn)，在1/2MS+2.0 mg/L 6-BA+2.0 mg/L NAA的生根培養(yǎng)基上培養(yǎng)1個月，根莖上長出綠色的芽，并伸展成為葉柄和葉片，并在葉柄下端長出白色的根[8]，這與本研究結(jié)果相似，都是使用細胞分裂素和生長激素按1 ∶1比例進行培養(yǎng)，青天葵根狀莖可以直接形成植株。但是直接形成植株的誘導(dǎo)率遠低于新球莖誘導(dǎo)率，植株移栽成活率也低于球莖，且試管苗沒有球莖便于攜帶和運送，不利于青天葵大規(guī)模生產(chǎn)與種植。但可為新品種遺傳改良提供材料。本研究表明，球莖誘導(dǎo)的最佳培養(yǎng)基為MS+1.5 mg/L NAA+0.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L IBA，在該培養(yǎng)基中青天葵球莖誘導(dǎo)系數(shù)為11.5，且球莖質(zhì)量好，球莖發(fā)芽成活率達到90%。這與凌征柱等使用的MS+2.0 mg/L NAA誘導(dǎo)培養(yǎng)基[11]稍有不同，但都是使用高濃度生長激素進行球莖誘導(dǎo)。

參考文獻：

[1]國家中醫(yī)藥管理局. 中華本草：第8冊[M]. 上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1999：740-741.

[2]汪松，解炎.中國物種紅色名錄[M]. 北京：高等教育出版社，2004：455.

[3]吳慶華，凌征柱，陸永梅. 中藥青天葵組培球莖栽培的研究[J]. 時珍國醫(yī)國藥，2001，12（10）：958-958.

[4]姜靈敏，徐有明，張冬梅，等. 紅刺玫愈傷組織誘導(dǎo)再生體系的建立[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報，2012，28（4）：914-916.

[5]余桂紅，張旭，孫曉波，等. 大麥蘇啤4號幼胚愈傷組織的誘導(dǎo)及植株的高頻再生[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報，2013，29（5）：953-956.

[6]張寧寧，夏明霞，張瓊，等. 卡特蘭組織培養(yǎng)研究進展[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，41（4）：42-44.

[7]潘艷艷，那少眾，王福維，等. 全緣橐吾組培再生體系的研究[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，40（1）：56-59.

[8]杜勤，陳文利，王振華，等. 青天葵組織培養(yǎng)及植株再生的研究[J]. 中國中藥雜志，2005，30（11）：812-814.

[9]周維燕. 植物細胞工程原理與技術(shù)[M]. 北京：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社，2001.

[10]曹孜義，劉國民. 實用植物組織培養(yǎng)技術(shù)教程[M]. 蘭州：甘肅科學(xué)技術(shù)出版社，2002：145.

[11]凌征柱，梁學(xué)金，潘素芬，等. 青天葵誘導(dǎo)多球莖及叢生苗的研究[J]. 種子，1998（5）：35-36.