李德征 南月敏 閆有敏 王素格 石國晨 陳娟

·論著·

慢性乙型肝炎患者血清CCL7與IL-6、TGF-β1表達的關(guān)系及其在肝臟炎癥/纖維化進展中作用的研究

李德征 南月敏 閆有敏 王素格 石國晨 陳娟

目的分析CCL7與IL-6、TGF-β1的關(guān)系及相互作用，探討CCL7在慢性乙型肝炎(CHB)、肝纖維化發(fā)生發(fā)展中的作用及其機制。方法選擇慢性乙型肝炎患者48例，其中輕度、中度和重度分別為18、24和6例，另選40例健康體檢者作為對照組。取研究對象血清，用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測IL-6 、TGF-β1、CCL7血清水平。結(jié)果相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)CHB患者血清CCL7 與IL-6、TGF-β1水平呈正相關(guān)(r值分別為0.335、0.322、0.288，P<0.05)。慢性乙型肝炎患者血清IL-6、TGF-β1、CCL7水平顯著高于對照組(P<0.01)。結(jié)論CCL7血清水平隨肝臟炎癥和纖維化的發(fā)生與進展呈進行性增高，可作為評估肝臟炎癥及纖維化程度的重要指標之一。

慢性乙型肝炎；肝纖維化；趨化因子配體7；白細胞介素-6；轉(zhuǎn)化生長因子-β1

慢性乙型肝炎(CHB)是世界范圍內(nèi)高發(fā)病率的傳染病，人體感染HBV后，由于機體和病毒相互作用的結(jié)果，不同個體的肝臟損傷程度各異，炎性損傷和纖維化是CHB患者重要病理改變，炎癥及纖維化相關(guān)的細胞因子在其發(fā)生及進展中起到主要作用。其中，白細胞介素-6(IL-6)、轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)是人們熟知的炎癥及纖維化相關(guān)因子。趨化因子配體7(CCL7)是最早發(fā)現(xiàn)并被廣泛研究的CC類趨化因子家族的成員之一， CCL7與CC家族受體結(jié)合后可對多種炎性細胞產(chǎn)生趨化、激活作用，促進炎癥的發(fā)生[4]；同時CCL7可以激活Ⅰ型膠原啟動子而導(dǎo)致纖維化形成，但其在CHB患者的炎癥發(fā)生和肝纖維化形成上有何作用，與炎癥、纖維化相關(guān)因子之間的關(guān)系尚不清楚。為此我們進行了相關(guān)探討。

1 資料與方法

1.1 一般資料 按照中華醫(yī)學會肝病學分會和感染病學分會2005年頒布的《慢性乙型肝炎防治指南》診斷標準，選取CHB患者48例作為病例組(CHB)，平均年齡32.9歲。根據(jù)《指南》將CHB患者的臨床診斷分為HBeAg陽性CHB和HBeAg陰性CHB兩類。HBeAg陽性CHB 28例；HBeAg陰性CHB 20例。按照2000年《病毒性肝炎防治方案》把不同病情的48例CHB患者分為輕度(Mild)、中度(Moderate)和重度(Severe)三個類型，分別有18、24和6例；并選40例健康體檢人員作為健康對照組(normal control， NC組)，平均年齡32.6歲。

1.2 主要試劑與儀器 IL-6、TGF-β1、CCL7 ELISA試劑盒均為美國R&D公司；洗板機及wellwashMK3型酶聯(lián)檢測儀產(chǎn)自芬蘭Labsystems公司。

1.3 實驗方法 空腹采靜脈血3 ml放置到EP管中，-80℃冷凍保存，以備檢測相關(guān)因子。IL-6、TGF-β1、CCL7檢測程序：按試劑盒說明書操作。

2 結(jié)果

2.1 CHB患者血清CCL7 與IL-6、TGF-β1相關(guān)性分析 將CHB患者血清三種因子測定值進行直線相關(guān)分析，結(jié)果顯示 CCL7與IL-6、TGF-β1呈正相關(guān)(P=0.026)；IL-6與 TGF-β1呈正相關(guān)(r=0.288、P=0.047)。見表1。

表1 CHB患者血清CCLT與IL-6、TGF-β1相關(guān)分析

2.2 CHB與NC組血清IL-6、TGF-β1、CCL7水平比較 CHB組血清IL-6、TGF-β1、CCL7水平與NC組比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。見表2。

表2 CHB組和NC組血清IL-6、TGF-β1和CCL7水平比較

組別IL-6TGF-β1CCL7NC組(n=40)55±286523±458388±32CHB組(n=48)70±22* 9421±5251*111±39*

2.3 不同肝損傷程度CHB患者血清IL-6、TGF-β1、CCL7水平比較 輕度CHB患者與NC組血清IL-6水平比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；中、重度CHB患者與NC組血清IL-6水平相比較明顯升高(P<0.01)。輕度CHB患者血清水平TGF-β1與NC組相比較有升高趨勢，但兩組比較差異無顯著性(P>0.05)；中度CHB患者血清TGF-β1水平與NC組比較明顯升高(P<0.05)；重度CHB患者TGF-β1血清水平與NC組比較明顯升高(P<0.01)。輕度CHB患者CCL7血清水平與NC組比較有升高趨勢，但差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；中度CHB患者血清CCL7水平與NC組比較有升高(P<0.05)；重度CHB患者血清CCL7水平與NC組相比較明顯升高(P<0.01)。重度CHB血清IL-6、TGF-β1、CCL7水平與輕度CHB分別比較均有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。見表3。

2.4 HBeAg陽性與HBeAg陰性CHB患者血清IL-6、TGF-β1、CCL7水平比較 2組患者在年齡、性別比等一般資料上進行比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，具有良好的可比性。HBeAg陽性CHB患者血清IL-6、TGF-β1、CCL7水平，與HBeAg陰性CHB病人分組比較均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表4。

表3不同肝損傷程度CHB患者CCL7、IL-6和TGF-β1水平比較

組別IL-6TGF-β1CCL7NC(n=40)55±286523±458388±32輕度(n=18)55±226894±3398100±25 中度(n=24)72±12#10133±6166*110±44*重度(n=6) 97±14#△13145±3028#△ 139±37#△☆

注：與NC組比較，*P<0.05，#P<0.01；與輕度組比較，△P<0.05；與中度組比較，☆P<0.05

表4 HBeAg陽性與陰性患者血清IL-6、TGF-β1和CCL7水平比較

組別HBeAg陽性(n=28)HBeAg陰性(n=20)IL-670±2569.10±18.68TGF-β110495±56797917±4277CCL7108±38116±41

3 討論

3.1 CCL7、IL-6與CHB肝臟炎癥發(fā)生及進展的關(guān)系 權(quán)威研究已經(jīng)證實IL-6是一種核心致炎因子，促進肝內(nèi)炎性反應(yīng)，觸發(fā)細胞因子網(wǎng)絡(luò)的級聯(lián)反應(yīng)，介導(dǎo)肝細胞損傷。本實驗結(jié)果顯示CHB患者血清中IL-6檢測水平明顯高于NC組(P<0.01)，與吳達軍等[5]的報道一致。而且隨著病情加重血清IL-6水平也明顯升高，重度CHB患者血清IL-6水平與輕度CHB血清IL-6水平比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01 )這與田華[6]報道相一致。可見IL-6對慢性肝炎的發(fā)生和發(fā)展具有誘發(fā)和促進作用。

CCL7(MCP-3)促進炎性損傷的發(fā)生表現(xiàn)在兩個方面：(1)CCL7幾乎能作用于所有免疫細胞，并能誘導(dǎo)這些細胞產(chǎn)生大量的促炎因子[3]，這樣的炎性因子網(wǎng)絡(luò)可能對肝炎的發(fā)生起到重要作用。(2)CCL7是一種重要的趨化因子，參與輔助性T淋巴細胞的Th2方向調(diào)解[7]，從而介入到肝炎的肝細胞損傷中。

本實驗研究表明：CHB患者血清中檢測CCL7水平明顯高于NC(P<0.01)。同時CCL7血清水平隨著IL-6血清水平的升高而升高，重度CHB血清CCL7水平與輕度CHB血清CCL7水平比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01 )。由此可推知CCL7參與炎性反應(yīng)的發(fā)生并促進其發(fā)展，這與相關(guān)研究結(jié)論[4，7]一致。

3.2 CCL7、TGF-β1與CHB肝纖維化的關(guān)系 TGF-β1是體內(nèi)最強和最廣泛的影響纖維產(chǎn)生的介質(zhì)之一。調(diào)節(jié)多種靶基因的表達，在肝纖維化的發(fā)生發(fā)展中起著至關(guān)重要的作用[8]。cDNA表達譜芯片是基因芯片的一種類型，是當今研究TGF-β1基因表達水平最有力的工具之一，該項技術(shù)從基因水平揭示了TGF-β1參與了同肝纖維化有關(guān)的細胞分化、基因和蛋白表達、細胞凋亡等生物過程。本實驗測定結(jié)果表明：CHB患者血清TGF-β1水平明顯高于NC組(P<0.01)，而且隨著病情加重血清TGF-β1水平也明顯升高，重度CHB患者血清TGF-β1水平與輕度CHB患者比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01 )。這與Mauviel[9]報道相一致。CCL7為促進纖維化的重要因子，具有激活Ⅰ型膠原啟動子而致纖維化形成的作用，本實驗通過對CHB患者血清CCL7含量測定并與纖維化相關(guān)因子TGF-β1的相關(guān)分析，可以發(fā)現(xiàn)它們之間呈直線正相關(guān)。由此可以推證，CCL7是導(dǎo)致CHB肝纖維化的重要細胞因子。

3.3 CCL7 、TGF-β1與IL-6在不同血清學類型CHB中變化 目前認為HBeAg陰性CHB病程較長，年齡較大，男性多見，常有持續(xù)或間歇性病毒復(fù)制(即HBV-DNA陽性)，病情自發(fā)緩解者較少見，肝組織炎癥壞死和肝纖維化明顯，更易發(fā)展為肝硬化和肝細胞癌。本實驗得出“HBeAg陽性CHB與HBeAg陰性CHB兩類患者血清中IL-6、TGF-β1、CCL7含量無顯著差異”的結(jié)果與上述結(jié)論有不符之處。分析其原因：(1)IL-6、TGF-β1、CCL7只是反映肝臟炎癥、肝纖維化細胞因子中的三個因子，可能難以代表肝臟炎癥、纖維化的全部水平。(2)研究中所選病例的年齡可能偏年輕，HBeAg陰性CHB在病程較短時其炎癥、纖維化水平并不一定比HBeAg陽性CHB患者高。

目前，越來越多的證據(jù)表明，細胞因子在CHB發(fā)生發(fā)展中具有重要作用，探索CCL7血清水平動態(tài)變化對CHB的炎癥程度、肝纖維化的狀態(tài)起到一定的預(yù)測、診斷作用，為疾病的早防早治提供合理的依據(jù)。如與IL-6、TGF-β1聯(lián)合檢測意義將更大。3種因子血清水平檢測屬于非創(chuàng)傷性檢查，在臨床易于廣泛開展，同時如能尋找有效的IL-6、TGF-β1、CCL7拮抗途徑，對CHB的治療具有重要的臨床意義。本研究旨在明確CCL7在CHB發(fā)生、發(fā)展中的作用，尋找CHB發(fā)病機制中新的關(guān)鍵性細胞因子，為臨床靶向性治療CHB提供新的作用位點和理論依據(jù)。

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EffectofexpressionofCCL7,IL-6,TGF-βonprogressofliverinflammation/fibrosisandtheircorrelationinpatientswithchronichepatitisB

LIDezheng*,NANYuemin,YANYoumin*,etal.*GeneralHospitalofJizhongEnergyXingtaiMineralGroup,Hebei,Xingtai054000,China

ObjectiveTo investigate the effect of expression of CCL7,IL-6,TGF-β on progress of liver inflammation/ fibrosis and their correlation in patients with chronic hepatitis B (CHB).MethodsForty eight patients with CHB were enrolled as CHB group,including 18 cases of mild degree,24 cases of moderate degree and 6 cases of severe degree.Forty healthy subjects were enrolled as control group.The serum levels of CCL7,IL-6,TGF-β1 were detected by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA).ResultsThe serum levels of CCL7 in investigation group were positively correlated to those of IL-6 and TGF-β1 (r=0.335,0.322,0.288,respectively,P<0.05).There were no significant differences in serum levels of IL-6,TGF-β1,CCL7 between mild CHB group and control group (P>0.05),however,there were significant differences in serum levels of IL-6,TGF-β1,CCL7 between moderate CHB group,severe CHB group and control group (P<0.05),so were between severe CHB group and moderate CHB group (P<0.01).ConclusionThe serum levels of CCL7 are progressively increased with the occurrence and development of liver inflammation and fibrosis,which can be regarded as one of important indexes for evaluating the severity of liver inflammation and fibrosis.

chronic hepatitis B ;liver fibrosis;chemokines ligand 7; interleukin-6;transforming growth factor -β1

10.3969/j.issn.1002-7386.2014.13.005

054000 河北省邢臺市，冀中能源邢臺礦業(yè)集團總醫(yī)院(李德征、閆有敏 、王素格 、石國晨、陳娟)；河北醫(yī)科大學第三醫(yī)院(南月敏)

R 512.62

A

1002-7386(2014)13-1937-03

2013-11-29)