★ 肖俊輝 周玉生 鄭自通

(南華大學附屬第二醫(yī)院藥劑科 湖南 衡陽 421001)

自“毒膠囊”事件曝光以來，膠囊中鉻含量的檢測一直是社會關(guān)注的熱點。膠囊中的鉻主要來自不法企業(yè)的劣質(zhì)明膠[1]，被人體吸收后，易導(dǎo)致濕疹、潰瘍、氣管炎等疾病，還將破壞血液系統(tǒng)，危害肝臟、腎臟器官，甚至可致癌[2]。

目前，我國對藥用膠囊中鉻含量的檢測，主要按照《中國藥典》2010版二部標準，采用原子吸收光譜法。該法雖精確靈敏，但存在檢測時間長、前處理復(fù)雜等缺陷[3]。本實驗建立反相高效液相色譜法測定膠囊中鉻含量模型，以甲醇-磷酸鹽緩沖液(15∶85)為流動相，于541nm波長處以外標法測定。使用設(shè)備實現(xiàn)自動化進樣，操作方便簡單，結(jié)果準確。

1 儀器與試劑

高效液相色譜儀(日本島津公司LC-20A)；原子吸收分光光度儀(日本島津公司AA6800型)；甲醇(色譜純)，實驗用水為去離子水，試液均采用分析純原料，按照德國質(zhì)量標準DIN53314方法配制。膠囊來源：市面隨機購買五種藥品膠囊。

2 方法

2.1 色譜條件 沙安萊科分析儀器有限公司專用分析級色譜柱(250mm × 4.6mm，5μm)，萃取保護柱(4.0mm × 10mm，3μm)，檢測波長：541 nm，柱溫：25℃，流動相：甲醇-磷酸鹽緩沖液(取磷酸二氫鉀2.72 g，加水溶解至1000 mL)(15∶85)，流速：1.0 mL·min-1，靈敏度：0.08 AUFS，進樣量：20 μL。

2.2 對照品溶液的制備 取重鉻酸鉀標準品適量，精密稱定，用甲醇制成0.1 mg·L-1的溶液，即得。對照品圖譜見圖1。

圖1 對照品色譜圖

2.3 供試品溶液的制備 取10mL 0.1mol·L-1磷酸氫二鉀緩沖液加入20mL比色管中，通氮氣5min，精密稱取事先剪碎的膠囊樣品0.500g加入管中，蓋緊磨口塞，渦旋振蕩30min至完全溶解，調(diào)pH值至7.5～8.0，過濾即得。供試品圖譜見圖2。

圖2 供試品色譜圖

2.4 干擾離子與流動相考察 各種金屬離子中只有三價鐵離子與二苯基卡巴肼反應(yīng)，生成黃色絡(luò)合物干擾試驗結(jié)果[4]。本實驗加入過量70%磷酸溶液與三價鐵離子反應(yīng)，生成無色產(chǎn)物，消除干擾。試驗采用了多種流動相系統(tǒng)(甲醇-磷酸鹽緩沖液，甲醇-水，甲醇-乙腈-水，甲醇-乙腈-磷酸鹽緩沖液等)，其中以甲醇-磷酸鹽緩沖液最好，流動相配比又以甲醇-磷酸鹽緩沖液(15∶85)為好，在上述色譜條件下峰形好，不拖尾，tR=7.8min，與雜質(zhì)峰可達基線分離。

3 結(jié)果

3.1 線性關(guān)系考察 取0.1 mL 70%磷酸溶液及1 mL二苯基卡巴肼丙酮溶液，精密加入鉻標準溶液，制成濃度為0.00、0.10、0.50、0.50、1.00、2.00 mg·L-1對照品溶液，進樣20 μL分析，以色譜峰面積(Y)對鉻濃度(X)繪制工作曲線，其回歸方程為Y=30692X-4531，線性相關(guān)系數(shù)為0.9995，表明鉻在0.10～2.00 mg·L-1范圍內(nèi)與吸光度呈良好線性關(guān)系。

3.2 穩(wěn)定性考察 取樣品供試液，于1，2，4，8，16小時后測定，RSD為0.84%(n=5)表明本方法穩(wěn)定性良好。

3.3 精密度考察 精密吸取0.1027 mg·L-1標準鉻溶液20 μL，連續(xù)進樣測定5次，RSD為0.31%(n=5)，表明本實驗精密度良好。

3.4 重復(fù)性實驗 精密稱取同一批次樣品5份，按“2.3”項下方法分別制備供試品溶液5份，測峰面積計算含量，鉻平均含量為1.380±0.164 mg·kg-1，RSD為0.47%(n=5)，表明本實驗重復(fù)性良好。

3.5 加樣回收實驗 取9份已測定含量的膠囊樣本(鉻含量1.380mg·kg-1)0.1g，精密加入不同劑量的0.1027 mg·L-1鉻標準溶液1.1mL(80%)、1.3mL(100%)、1.5mL(120%)按“3.1”方法測定，計算回收率(結(jié)果見表1)，平均回收率為99.53%，RSD為1.44%。表明本方法安全可靠。

表1 加樣回收實驗

表2 高效液相色譜法與原子吸收光譜法結(jié)果對照

3.6 樣品測定 取膠囊樣品按“2.3”方法制備供試品溶液，按“3.1”方法測定峰面積，通過線性回歸方程計算其樣品鉻含量。按藥典2010版二部正文第二部分“膠囊用明膠”項下規(guī)定，采用原子吸收光譜法測定同一批次樣品，與本實驗測定結(jié)果比較。共檢測5種樣品膠囊(結(jié)果見表2)，根據(jù)統(tǒng)計學分析，兩種方法無顯著差異(n=5，

t=2.236，P>0.05)。

4 討論

高效液相測定膠囊中鉻含量具有三高一快的特點，即高效柱、高選擇性、高靈敏度、分析速度快[5]。與藥典規(guī)定的原子光譜法測定比較，兩者結(jié)果無顯著差異，所需儀器價格適中，穩(wěn)定準確，重現(xiàn)性好。

[1]Yao LK.Effect of Quality of Pharmaceutical Gelatin on Safety of Capsules[J]. The Science and Technology of Gelatin, 2006,12(4): 204-206.

[2]肖俊輝,周玉生. 比色法快速檢測藥用膠囊鉻限量[J].中南醫(yī)學科學雜志,2012,40(6): 621-623.

[3]黃輝,李本濤,邵鴻飛. 微波消解-石墨爐原子吸收光譜法測定膠囊中的痕量鉻[J].化學分析計量,2011,20(3): 30-32.

[4]許春樹. 皮革六價鉻含量的檢測方法及改進[J].輕工標準與質(zhì)量,2005(2): 34-35.

[5]Hossain M A, Kumita M, Michigami Y, et al. J Chromatogr Sci[J].2005, 43(2): 98-103.