鄒阿玲，張光偉，肖 銳，張建軍，劉水濤，牛志宏，李 強(qiáng)

(1.克拉瑪依綠成農(nóng)業(yè)開(kāi)發(fā)有限責(zé)任公司，新疆 克拉瑪依 834000；2.新疆動(dòng)物胚胎工程技術(shù)研究中心，新疆 呼圖壁 831203)

商品化牛胚胎移植工作在我國(guó)已經(jīng)進(jìn)行了多年，但由于多種因素的影響，不同的作者獲得了不同的結(jié)論。對(duì)于長(zhǎng)期從事胚胎移植的商業(yè)化公司，術(shù)者之間的移植結(jié)果差異相對(duì)較小。從我們多年實(shí)踐可以看出，有的術(shù)者在多數(shù)情況下能獲得較高的移植妊娠率，但有的術(shù)者的移植妊娠率出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況。術(shù)者4在多數(shù)牛場(chǎng)的移植率均能達(dá)到50%以上，但在本試驗(yàn)的牛場(chǎng)，移植妊娠率最低(37.5%)。

在移植不同發(fā)育階段胚胎的報(bào)道中，因移植地點(diǎn)和方法等的不同，出現(xiàn)了完全不同的結(jié)果。Dochi等報(bào)道[1]，桑葚胚的妊娠率高于囊胚。也有人認(rèn)為，囊胚的妊娠率高于桑葚胚[2]。而Otler等[3]則報(bào)道，囊胚與桑葚胚的妊娠率相似。李樹(shù)靜等報(bào)道[4]，桑葚胚和囊胚，囊胚和擴(kuò)張囊胚的妊娠率差異不顯著，但桑葚胚和擴(kuò)張囊胚的妊娠率差異顯著。我們的結(jié)果表明，桑葚胚與囊胚的移植妊娠率差異不顯著，但擴(kuò)張囊胚的妊娠率顯著較高(見(jiàn)表6)。

1 材料和方法

2003年，在新疆伊犁佳弘牛場(chǎng)進(jìn)行了荷斯坦奶牛胚胎移植。該場(chǎng)受體牛為當(dāng)?shù)赝练N牛，中等膘情。

1.1 胚胎

來(lái)自發(fā)情后第7～7.5天的高產(chǎn)荷斯坦奶牛青年母牛，胚胎發(fā)育階段分別為致密桑葚胚、早期囊胚、囊胚和擴(kuò)張囊胚。

1.2 胚胎解凍

30～35 ℃水浴10 s解凍胚胎。采用一步法移植胚胎。

1.3 受體牛的選擇和同期發(fā)情

根據(jù)受體母牛的黃體情況，用PGF2α(齊魯制藥廠)進(jìn)行同期發(fā)情處理，發(fā)情后6～8 d進(jìn)行移植胚胎。移植后60～80 d，經(jīng)直腸檢查診斷是否妊娠。

2 結(jié)果

移植結(jié)果表明(見(jiàn)表1)，不同的胚胎移植人員，移植胚胎后，得到了不同的結(jié)果。最高妊娠率為67.1%(術(shù)者1)，最低為37.5%(術(shù)者4)，兩者差異極顯著(P<0.01)。術(shù)者2和術(shù)者3的移植結(jié)果差異不顯著(P>0.05)。

表1 不同術(shù)者胚胎移植的妊娠率

不同胚胎發(fā)育階段的胚胎移植后妊娠率，因不同術(shù)者而有所不同。術(shù)者1移植的不同發(fā)育階段的胚胎，妊娠率均較高(見(jiàn)表2)。術(shù)者2的擴(kuò)張囊胚移植妊娠率明顯高于桑葚胚和囊胚(見(jiàn)表3)。術(shù)者2和術(shù)者3的各組胚胎的妊娠率沒(méi)有明顯差異(見(jiàn)表3和4)。術(shù)者4整體妊娠率均較低，但不同發(fā)育階段的胚胎之間差異不顯著(見(jiàn)表5)。4個(gè)術(shù)者移植的平均妊娠率：致密桑葚胚和早期囊胚為50.2%，囊胚為47.2%，擴(kuò)張囊胚為66.7%。

表2 不同發(fā)育階段的胚胎對(duì)妊娠率的影響(術(shù)者1)

注：CM致密桑葚胚，EB早期囊胚，B囊胚，EXB擴(kuò)張囊胚

表3 不同發(fā)育階段的胚胎對(duì)妊娠率的影響(術(shù)者2)

表4 不同發(fā)育階段的胚胎對(duì)妊娠率的影響(術(shù)者3)

表5 不同發(fā)育階段的胚胎對(duì)妊娠率的影響(術(shù)者4)

表6 不同發(fā)育階段的胚胎對(duì)妊娠率的影響

3 討論

本研究是在同一年，同一個(gè)牛場(chǎng)，使用同一個(gè)人冷凍的胚胎，移植的均為A級(jí)胚胎。從試驗(yàn)結(jié)果看，不同的移植人員，移植的妊娠率存在差異。經(jīng)過(guò)胚胎移植人員的總結(jié)交流，筆者認(rèn)為，主要因素有以下幾點(diǎn)：受體的選擇，包括發(fā)情后的黃體和子宮質(zhì)地的選擇；受體發(fā)情的準(zhǔn)確性，包括發(fā)情的準(zhǔn)確開(kāi)始和結(jié)束時(shí)間，發(fā)情持續(xù)期的長(zhǎng)短；胚胎不同發(fā)育階段，胚胎越接近受體母牛的子宮內(nèi)環(huán)境，妊娠率越高。我們的擴(kuò)張囊胚移植后妊娠率較高(66.7%)。

很多進(jìn)行胚胎移植的牛場(chǎng)，由于人工成本較高，在大規(guī)模進(jìn)行胚胎移植時(shí)，不進(jìn)行發(fā)情觀察，按PG注射后60 h，作為發(fā)情開(kāi)始時(shí)間，之后的第7天，檢查黃體后，移植胚胎。所以，就不同發(fā)育階段胚胎而言，由于牛場(chǎng)的情況不同，同期發(fā)情方法的差異，以及不同的處理方法和發(fā)情后移植的不同天數(shù)，許多學(xué)者對(duì)不同發(fā)育階段胚胎的移植妊娠率，得出了不同的結(jié)果。

[1] Dochi O，et al.Direct transfer of propylene glycol or ethylene glycol under-on-farm conditions in an interacted embryo transfer program.Theriogenology [J]，49，1051-1054.

[2] Donaldson L E et al.Matching of embryo stages and grade with recipient oestrous synchrony in bovine embryo transfer.Vet.Rec.1985,489-490.

[3] Other，J.et al.pregnancy rate of fresh and frozen thawed cattle embryo.Proc.of the 10th proceedings of cryopreserved bovine embryo.Theriogenology [J].1998，49，abstract.

[4] 李樹(shù)靜.牛胚胎的發(fā)育階段和質(zhì)量對(duì)移植妊娠的影響研究[C].〈中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)繁殖學(xué)分會(huì)〉，2006，360-362.