劉忠超,張文藝,王 亮,張海英,焦 玲

(中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院·北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 放射醫(yī)學(xué)研究所，天津300192)

直結(jié)腸癌是世界第二大癌癥，致死率也位居第二位。臨床分期往往決定了直結(jié)腸癌患者的預(yù)后，早期階段確診的患者往往預(yù)后良好[1]。電子順磁共振譜儀(EPR)可以測定血漿蛋白的功能特性， 以HSA為例，采用具有穩(wěn)定自由基結(jié)構(gòu)(如氮氧自由基，doxyl)的長鏈脂肪酸作為人工引入的自由基，然后與血清白蛋白結(jié)合，經(jīng)過EPR檢測該自由基并分析這些自旋標記的脂肪酸與白蛋白的結(jié)合能力改變，同時監(jiān)測血清白蛋白結(jié)構(gòu)和功能的變化[2,3]。

1 對象與方法

1.1一般資料隨機選擇近期到中國人民解放軍總醫(yī)院就診的部分直結(jié)腸癌患者以及體檢正常人，共321例。直結(jié)腸癌均為術(shù)前患者，所有病例經(jīng)術(shù)后臨床病理診斷證實。表1是病例的具體信息。

1.2檢測方法采集所有受試這空腹靜脈血，分離血清，置于-80℃下凍存。集中檢測血清白蛋白EPR圖譜。測量時，將樣品取出，常溫解凍后，取50 μl血清置于96孔板中，加入30 μl的16doxyl硬脂酸溶液，封口膜封住后置于振蕩器中振蕩搖勻10 min后，用毛細管取50 μl混合溶液，置于電子順磁共振譜儀(Bruker EMX A300)中進行檢測，每個樣品測量3次。

表1 本研究中病例的具體信息

Group Ⅰ.直結(jié)腸癌病人；Group Ⅱ.健康人

2 結(jié)果

2.1 波譜中得到的5個參數(shù)均可以引用到判別分析中，直結(jié)腸癌患者血清白蛋白波譜與健康人相比有明顯的差異，診斷的特異性和敏感性分別為89.4% 和86.9%。

2.2 依照Fisher 判別分析方法構(gòu)建出兩個判別函數(shù)：F1=338.904ΔH1+88328.145ΔH2-103.109ΔH3+96423.334ΔH4+265.178ΔH5-255051.924；F2=328.375ΔH1+88226.653ΔH2-116.781ΔH3+96324.452ΔH4+259.369ΔH5-254166.845

對于任意一個受試者，將相關(guān)參數(shù)帶入以上函數(shù)，計算出判別函數(shù)F，根據(jù)比較F值的大小，即可將對應(yīng)的受試者歸納至恰當?shù)念悇e中去。

圖1 波譜中選擇的變量

3 討論

由于本研究僅關(guān)注健康人和結(jié)直腸癌患者人之間的差異，而未對癌癥患者進行分期評價，不同腫瘤的分期可能會導(dǎo)致EPR波譜的變化[4]。由于手動加樣過程中可能存在加樣量的誤差，因此移液和稀釋的自動化也可能會提高測試的精密度[5]。

白蛋白是非致病性血漿中最豐富的蛋白質(zhì)，約占血漿總蛋白的三分之二[6]。EPR波形反映了自旋探針分子的狀態(tài)，如其分子運動特征，周圍環(huán)境中的電磁特性等[7]。本研究表明，結(jié)直腸癌患者的白蛋白與脂肪酸的結(jié)合能力發(fā)生了顯著改變。這種改變可能是由腫瘤組織中存在的生物活性肽和其他物質(zhì)導(dǎo)致的[8]。

癌癥相關(guān)的白蛋白構(gòu)象變化可用自旋標記EPR來評估[9,10]。采用Fisher線性判別分析，我們開發(fā)出一個數(shù)學(xué)模型，在基于EPR(相對強度，峰寬)五元素的基礎(chǔ)上，鑒別結(jié)直腸癌患者的成功率可達到89.4%。這一診斷技術(shù)具有顯著的潛在應(yīng)用價值，可大大降低癌癥患者篩選的成本[11]。對于所有臨床分期的結(jié)直腸癌患者的EPR波譜，值得進行深入研究。

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