于 寧，何承輝，邢建國(新疆維吾爾自治區(qū)藥物研究所，烏魯木齊 830004)

維藥復方益心顆粒是由薰衣草、牛舌草、毛羅勒、香青蘭、小茴香等6味藥組成的復方制劑，該方具有養(yǎng)心補腦、增強心腦功能、補血、消食等功效，用于神經衰弱引起的頭疼、失眠、健忘、多夢及心功能不全、膽囊炎等。處方中薰衣草、毛羅勒、小茴香均為維吾爾醫(yī)常用藥材，都含有較多的揮發(fā)油成分，現(xiàn)代藥理研究已證實，揮發(fā)油是其重要的活性成分[1-2]，但由于這類成分不穩(wěn)定。因此，為提高該制劑的藥效和穩(wěn)定性，先提取揮發(fā)油并處理后再入藥。本實驗采用正交實驗設計，以提取揮發(fā)油提取量為指標，優(yōu)選揮發(fā)油最佳提取工藝；采用分子包合技術包合揮發(fā)油[3]，使揮發(fā)油粉末化，降低損失，提高揮發(fā)油的穩(wěn)定性和溶解性，從而提高該制劑的療效。

1 儀器與試藥

1.1儀器 BS110S型Sartorius電子天平(北京賽多利斯天平有限公司)；JM-B2003電子天平(余姚市紀銘稱重校驗設備有限公司)；揮發(fā)油提取器(上?；茖嶒炂鞑挠邢薰?；KDM型調溫電熱套(山東省鄄城永興儀器廠)；ML-902定時恒溫電動磁力攪拌器(上海浦江分析儀器廠)；101A型數(shù)顯電熱鼓風干燥箱(上海錦屏儀器儀表有限公司通州分公司)。

1.2試藥 毛羅勒(批號20100410)、薰衣草(批號201005130)、小茴香(批號20100510)均購于新疆麥迪森維藥有限公司，產地均為新疆；β-環(huán)糊精(廣東郁南縣環(huán)狀糊精廠，質量分數(shù)>98%)；其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1揮發(fā)油的提取工藝研究 根據相關文獻[3-7]，在預實驗的基礎上，以加水量(A)、浸泡時間(B)、蒸餾時間(C)為考察因素，采用L9(34)正交表進行實驗，提取揮發(fā)油至揮發(fā)油體積不再增加為止，讀取揮發(fā)油體積，評價指標為揮發(fā)油的提取量(mL)，優(yōu)選揮發(fā)油提取工藝。提取工藝因素水平見表1，正交實驗結果見表2，方差分析結果見表3。

表1 揮發(fā)油提取工藝因素水平表

方差分析結果表明，蒸餾時間有顯著性差異，加水量和浸泡時間無顯著性差異，主次順序為C>A>B。在C因素中，C3>C2>C1，選擇C3；結合直觀分析，A和B無顯著性差異，選A1和B1。因此，結合大生產，最終確定提取工藝為A1B1C3，即加水10倍量，浸泡8 h后提取5 h。

2.2揮發(fā)油提取工藝驗證實驗 按處方量稱取藥材3份，照優(yōu)選的提取工藝進行3次驗證實驗，測得揮發(fā)油的提取量分別為2.60，2.63和2.59 mL，平均提取量為2.61 mL，與正交實驗結果一致，表明該提取工藝合理、穩(wěn)定、可行。

表2 揮發(fā)油提取正交實驗結果

表3 揮發(fā)油含量方差分析結果

2.3優(yōu)選揮發(fā)油β-CD包合物制備工藝

2.3.1揮發(fā)油前處理 精密移取揮發(fā)油一定體積，加入乙醇等體積，溶解。得揮發(fā)油無水乙醇溶液(體積分數(shù)為50%)，待用。

2.3.2實驗方法 采用飽和水溶液法制備。操作步驟：稱取β-CD適量，置于1 000 mL具塞三角錐形瓶中，加入蒸餾水，水浴加熱使β-CD完全溶解，制成飽和溶液，并降至所需溫度；在恒溫下攪拌，精密移取揮發(fā)油-無水乙醇液，緩慢注入到β-CD溶液中，持續(xù)攪拌至一定時間后，放入4 ℃冰箱中，過夜；抽濾，包合物先用水洗滌，后用石油醚(30～60 ℃)多次洗滌，至無揮發(fā)油氣味；干燥4 h (50 ℃)，稱質量，計算揮發(fā)油包合率。

2.3.3揮發(fā)油包合率的測定 稱定揮發(fā)油包合物質量，將包合物置于1 000 mL圓底燒瓶中，加300 mL蒸餾水，照《中國藥典》2010年版一部附錄ⅩD揮發(fā)油測定甲法，連接揮發(fā)油提取器，提取揮發(fā)油。按下列公式計算。

揮發(fā)油包合率=包合物中實際含油量/[揮發(fā)油加入量×空白回收率]×100%

2.3.4揮發(fā)油空白回收實驗 精密吸取揮發(fā)油1 mL，置于500 mL圓底燒瓶中，平行3份，照《中國藥典》2010年版一部附錄ⅩD揮發(fā)油測定甲法，提取揮發(fā)油。分別加一定量水，提取揮發(fā)油5 h，至揮發(fā)油體積不再增加時停止加熱，讀取揮發(fā)油體積。按下式計算空白回收率，得空白回收率為95%。

空白回收率=提取出揮發(fā)油量/揮發(fā)油加入量×100%

2.3.5包合物收得率 收得率=[包合物質量/(β-CD加入質量+揮發(fā)油加入質量)]×100%

2.3.6包合工藝條件篩選 根據文獻報道[5,7-11]，在預實驗的基礎上，選定β-CD和揮發(fā)油用量比例(g∶mL)、包合溫度(℃)和包合時間(h)為考察因素。每個因素取3水平，以包合率、包合物收得率為評價指標，采用L9(34)正交表進行實驗。包合工藝的因素與水平見表4，正交實驗結果見表5，方差分析結果見表6。

表4 揮發(fā)油β-CD包合因素水平表

表5 揮發(fā)油包合工藝正交實驗結果

經方差分析可知，β-CD∶揮發(fā)油配比有顯著性差異，而包合溫度和包合時間無顯著性差異，主次順序為A>C>B。A因素中，A3>A2>A1，選擇A3；結合直觀分析，B和C無顯著性差異，選B1和C1。結合實際生產，因此確定最佳包合工藝為A3B1C1，即揮發(fā)油包合條件為：β-CD∶揮發(fā)油配比為10∶1，恒溫40 ℃，包合2 h。

表6 揮發(fā)油包合方差分析結果

2.3.7揮發(fā)油β-CD包合工藝驗證實驗 精密稱取β-環(huán)糊精和揮發(fā)油適量，按2.3.6項下優(yōu)選的工藝和方法，進行3次驗證實驗，并計算揮發(fā)油包合物收得率和包合率。結果顯示，包合物的收得率為80.23%，78.90%和80.31%，包合率分別為83.23%，82.10%和83.31%。結果與正交實驗結果相接近，表明優(yōu)選的包合工藝穩(wěn)定、可行。

2.4包合物穩(wěn)定性實驗 將揮發(fā)油進行包合的目的是防止其揮發(fā)及增強穩(wěn)定性。因此對其包合物進行了穩(wěn)定性研究[12-15]，比較各影響因素下包合物及混合物(與包合物同等比例的同批次β-CD、揮發(fā)油的混合物)中揮發(fā)油含量的變化，以考察β-CD包合后揮發(fā)油的穩(wěn)定性，為后期的制劑生產提供實驗依據。

2.4.1強光照射實驗 分別稱取包合物和混合物各30 g，精密稱定，密裝于玻璃瓶中，置于日光燈(4 000 lx)處，照射10 d，分別在規(guī)定的時間取樣，照2.3.3項下方法提取揮發(fā)油，并計算揮發(fā)油相對含量，結果見表7。

結果表明，揮發(fā)油包合物的抗光解性比物理混合物高。

表7 強光照射實驗結果

2.4.2高溫實驗 揮發(fā)油包合物和混合物分別稱取9份，每份30 g(每水平樣品各3份)，精密稱定，密裝于玻璃瓶中，分別置于40，60和80 ℃恒溫干燥箱中，放置10 d，分別在一定時間取樣，并提取揮發(fā)油，計算揮發(fā)油相對含量，結果見表8。

該結果表明，揮發(fā)油β-環(huán)糊精包合物比混合物的熱穩(wěn)定性好。

表8 高溫實驗結果

2.4.3高濕實驗 稱取揮發(fā)油包合物和混合物各30 g(每水平樣品各3份)，精密稱定，密裝于玻璃瓶中，各取6份，每3份為一組，在25 ℃條件下，將樣品分別置于2個密封的器皿中(相對濕度分別為75%(氯化鈉)和92.5%(硝酸鉀))，放置10 d，并分別在放置0，5和10 d時取樣，照揮發(fā)油測定法測定揮發(fā)油相對含量，結果見表9。

結果表明，揮發(fā)油包合物較物理混合物的濕穩(wěn)定性更高。

表9 高濕實驗結果

3 討論

通過預實驗，分別考察了薰衣草、毛羅勒和小茴香3味藥材分開單獨提取揮發(fā)油和合并提取揮發(fā)油，發(fā)現(xiàn)3味藥材合并后提取揮發(fā)油與分別提取揮發(fā)油的出油時間和出油率基本一致，因此，為節(jié)約生產成本，將三味藥合并后提取揮發(fā)油。揮發(fā)油為該處方有效成分，本實驗采用β-環(huán)糊精包合技術，使揮發(fā)油由液態(tài)轉變成固態(tài)，防止揮發(fā)油在生產、儲存過程中的氧化和分解，提高制劑的穩(wěn)定性，掩蓋揮發(fā)油的不良氣味。

包合物穩(wěn)定性實驗結果表明，高溫、高濕、光照對包合前后揮發(fā)油的含量的影響有較大差異。包合物的熱穩(wěn)定性、濕穩(wěn)定性及抗光解性明顯高于混合物?？梢姄]發(fā)油經β-環(huán)糊精包合后，可提高其穩(wěn)定性，從而提高該復方制劑的療效。

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