蘇 敏，章志強(qiáng)，鄧玉清，郝 程(.陜西方舟制藥有限公司，西安 70075；.陜西省體育科學(xué)研究所，西安 70065；.西安天一秦昆制藥有限責(zé)任公司，西安 70077)

貝那普利氫氯噻嗪片是一種治療高血壓的化學(xué)藥物復(fù)方制劑，適用于用貝那普利和氫氯噻嗪?jiǎn)我恢委煵荒苓_(dá)到滿意療效的病人[1-2]。關(guān)于其含量測(cè)定方法，國(guó)外文獻(xiàn)報(bào)道有薄層色譜法和高效液相色譜法[3-4]，國(guó)內(nèi)到目前為止還沒(méi)有高效液相色譜法的相關(guān)報(bào)道。為了更好地控制其質(zhì)量，本文對(duì)鹽酸貝那普利和氫氯噻嗪的HPLC含量測(cè)定方法進(jìn)行了提升，對(duì)其線性、重復(fù)性、穩(wěn)定性等進(jìn)行了可行性研究。

1 儀器與材料

1.1儀器 高效液相色譜儀(戴安U3000)。

1.2試藥 四氫呋喃(色譜純)；冰醋酸(分析純)；四丁基溴化銨(分析純)；鹽酸貝那普利對(duì)照品(按C24H28N2O5·HCl計(jì)，供HPLC法測(cè)定，含量為99.5%)；氫氯噻嗪對(duì)照品(按C7H8ClN3O4S2計(jì)，含量為99.8%)；貝那普利氫氯噻嗪片樣品(自制)。

2 方法與結(jié)果

2.1色譜條件 色譜柱：Ultimate AQ-C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相：四氫呋喃-水-冰醋酸(250 mL+750 mL+4 mL，加入四丁基溴化銨1.0 g)；檢測(cè)波長(zhǎng)：240 nm；流速：1.5 mL·min-1；進(jìn)樣量：20 μL。

2.2系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn) 取有關(guān)物質(zhì)CGS 14831對(duì)照品20 mg，精密稱定，置于50 mL量瓶中，加溶劑使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為雜質(zhì)對(duì)照品儲(chǔ)備液Ⅰ；取有關(guān)物質(zhì)SU5683對(duì)照品適量，精密稱定，加溶劑制成0.25 mg·mL-1的溶液，作為雜質(zhì)對(duì)照品儲(chǔ)備液Ⅱ；另取氫氯噻嗪對(duì)照品約6 mg和鹽酸貝那普利對(duì)照品約5 mg，精密稱定，置于25 mL量瓶中，精密加入雜質(zhì)對(duì)照品儲(chǔ)備液Ⅰ、Ⅱ分別為1 mL和1 mL，加溶劑稀釋至刻度，作為系統(tǒng)適用性溶液[5]。

2.3方法學(xué)驗(yàn)證

2.3.1線性實(shí)驗(yàn) 取鹽酸貝那普利對(duì)照品20 mg和氫氯噻嗪對(duì)照品25 mg，精密稱定，置于50mL量瓶中，加溶劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為儲(chǔ)備液。精密量取1，2.5，4，5，7.5和10 mL儲(chǔ)備液，置于10 mL量瓶中，用溶劑(乙腈-水-冰醋酸(100∶150∶1)稀釋至刻度，搖勻，作為供試液。分別精密量取上述溶液各20 μL注入高效液相色譜儀。以峰面積為縱坐標(biāo)、質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)作圖，進(jìn)行線性回歸[6]。鹽酸貝那普利質(zhì)量濃度在41.2～412.3 μg·mL-1范圍內(nèi)呈線性，回歸方程為y=14 731x-88 403，r=0.999 5，氫氯噻嗪質(zhì)量濃度在51.0～509.6 μg·mL-1范圍內(nèi)呈線性，回歸方程為y=5 816.6x+9 053.9，r=0.999 8。

2.3.2精密度實(shí)驗(yàn) 取鹽酸貝那普利對(duì)照品20 mg和氫氯噻嗪對(duì)照品25 mg，精密稱定，置于100 mL量瓶中，用溶劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。精密量取20 μL上述溶液，注入高效液相色譜儀，在相同條件下，由同一分析人員對(duì)同一瓶樣品重復(fù)進(jìn)樣6次，以峰面積的偏差為目標(biāo)，考察進(jìn)樣精密度，記錄色譜圖。同一溶液連續(xù)進(jìn)樣6次，兩主藥氫氯噻嗪和鹽酸貝那普利的峰面積的RSD均1.01%，0.71%和0.76%，0.69%，均小于2%，表明進(jìn)樣精密度良好。

2.3.3穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 將對(duì)照品和樣品均配制成質(zhì)量濃度約為鹽酸貝那普利0.2 mg·mL-1、氫氯噻嗪0.25 mg·mL-1的溶液作為供試品溶液，分別于第0，2，4，6，8和12 h進(jìn)樣測(cè)定[7]。結(jié)果對(duì)照品溶液、供試品溶液中兩成分峰面積在12 h內(nèi)RSD值氫氯噻嗪和鹽酸貝那普利分別為1.04%，0.66%，1.01%和0.84%，均小于2%，表明對(duì)照品溶液與供試品溶液均在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.4重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取鹽酸貝那普利對(duì)照品20 mg和氫氯噻嗪對(duì)照品25 mg，精密稱定，置于100 mL量瓶中，加溶劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。取本品20片，精密稱定，研細(xì)，分別取6份等量的樣品，精密稱取(約相當(dāng)于鹽酸貝那普利10 mg)，置于50 mL量瓶中，加溶劑40 mL，超聲處理10 min，振搖15 min，放冷至室溫，用溶劑稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm的濾膜過(guò)濾，棄去初濾液6 mL，取續(xù)濾液，即得。平行操作配制6份，精密量取20 μL上述溶液，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。以外標(biāo)法按峰面積計(jì)算含量。兩主成分氫氯噻嗪和貝那普利含量的RSD分別為1.00%和0.90%，均小于2%，表明進(jìn)樣重復(fù)性良好。

2.3.5準(zhǔn)確度實(shí)驗(yàn) 取氫氯噻嗪對(duì)照品25 mg和鹽酸貝那普利對(duì)照品20 mg，精密稱定，置于100 mL量瓶中，加溶劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。以此為基礎(chǔ)分別配制80%～120%的對(duì)照品溶液，計(jì)算80%～120%范圍內(nèi)回收率，考察該方法測(cè)定的結(jié)果與真實(shí)值接近的程度。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，鹽酸貝那普利平均回收率在99.6%～101.6%之間，RSD小于2%，氫氯噻嗪平均回收率在99.3%～100.7%之間，RSD小于2%，符合平均回收率在98.0%～102.0%的要求，證明此方法準(zhǔn)確度良好。

2.3.6回收率實(shí)驗(yàn) 對(duì)照品溶液：分別取氫氯噻嗪和鹽酸貝那普利對(duì)照品約25和20 mg，置于100 mL量瓶中，加5 mL甲醇使溶解，并用0.1 mol·L-1鹽酸溶液稀釋至刻度；再精密量取5 mL，置于200 mL量瓶中，加0.1 mol·L-1鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，即得。50%供試品溶液：取氫氯噻嗪和鹽酸貝那普利對(duì)照品約12.5和10 mg，精密稱定，置于同一含有約0.217 5 g空白輔料的100 mL量瓶中，加少量溶劑使其溶解，并用0.1 mol·L-1鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，過(guò)濾；精密量取續(xù)濾液5 mL，置于200 mL量瓶中，加0.1 mol·L-1鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，即得，共制備3份。同理，再分別配制80%供試品溶液和100%供試品溶液[8]，精密量取對(duì)照品溶液和供試品溶液各50 μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果見表1和表2及圖1。

表1 鹽酸貝那普利回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表2 氫氯噻嗪回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

圖1 HPLC圖

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，3個(gè)不同質(zhì)量濃度的供試品溶液中，氫氯噻嗪和鹽酸貝那普利的回收率RSD分別為0.35%和0.51%，均小于2%，回收率良好。

2.3.7樣品測(cè)定 取本品20片，精密稱定，研細(xì)，分別取6份等量的樣品，精密稱取(約相當(dāng)于鹽酸貝那普利10 mg)，置于50 mL量瓶中，加溶劑40 mL，超聲處理10 min，振搖15 min，放冷至室溫，用溶劑稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm的濾膜過(guò)濾，棄去初濾液6 mL，取續(xù)濾液，即得。分別取2份等量的對(duì)照品，氫氯噻嗪25 mg和鹽酸貝那普利20 mg，精密稱定，置于100 mL量瓶中，加溶劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本品3 批含氫氯噻嗪分別為98.8%，99.6%和98.9%，均在標(biāo)示量的95.0%～105.0%范圍內(nèi)，鹽酸貝那普利含量分別為99.7%，100.5%和100.3%，均在標(biāo)示量的92.0%～105.0%范圍內(nèi)，符合規(guī)定。

3 討論

3.1色譜條件的選擇 本品氫氯噻嗪、鹽酸貝那普利的最大吸收波長(zhǎng)分別為238，242和317 nm，故確定含量的檢測(cè)波長(zhǎng)為240 nm。四氫呋喃-水-冰醋酸(250 mL+750 mL+4 mL，加入四丁基溴化銨1.0 g)時(shí)主峰理論板數(shù)不低于2 000，與雜質(zhì)峰分離度不小于1.5，未檢出不純物，故確定為該品種的流動(dòng)相。色譜柱為Ultimate AQ-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)時(shí)主峰理論板數(shù)不低于2 000，與雜質(zhì)峰的分離度不小于1.5，故確定為該品種的色譜柱。

3.2四氫呋喃用量 在本品檢測(cè)中四氫呋喃用量相對(duì)較大，可適當(dāng)調(diào)節(jié)流動(dòng)相中的四氫呋喃量，使CGS 14831， SU 5683與氫氯噻嗪的分離度符合要求。所用四氫呋喃應(yīng)保證其純度，應(yīng)臨用開瓶，否則會(huì)引起色譜峰的增加。

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