楊 靜，羅 俊，劉文英，張奕華，黃海燕(.南京醫(yī)科大學藥學院，南京 66；.中國藥科大學藥物分析教研室，南京 0009；.中國藥科大學新藥研究中心，南京 0009；.南京長澳醫(yī)藥科技有限公司，南京 00)

ZLR-8，化學名為2-(2，6-二氯苯基氨基)苯乙酸-4-(4-苯基-1，2，5-噁二唑-2-氧化物-3-)甲氧基苯甲酯，是一種新型的一氧化氮供體型雙氯芬酸的衍生物[1-2](結(jié)構(gòu)式見圖1)。有關(guān)ZLR-8的藥理、毒理、藥代、制劑、原料含量測定及有關(guān)雜質(zhì)等研究工作已有文獻報道[1-9]。在ZLR-8原料藥含量測定方面，楊靜等從ZLR-8的化學結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)出發(fā)，采用非水毛細管電泳法、HPLC法等建立了ZLR-8原料藥的含量測定方法[3-4]。HPLC法是目前藥物分析領(lǐng)域中應(yīng)用廣泛的分析方法之一，適用于原料藥中有關(guān)物質(zhì)檢查及制劑中有效成分的含量測定。非水毛細管電泳法是毛細管電泳分析方法的拓寬，可用于分析水中溶解度小的藥物，但是，其所需儀器設(shè)備普及性不強，限制了其在常規(guī)分析工作中的應(yīng)用。本文根據(jù)ZLR-8結(jié)構(gòu)中含有苯環(huán)等大共軛體系，首次建立了一種快速簡便的紫外可見分光光度法來測定ZLR-8原料藥的含量，該方法準確性高、重復性好，所測定結(jié)果與所報道的其他含量測定方法相一致。

圖1 ZLR-8的化學結(jié)構(gòu)式

1 儀器與試藥

1.1儀器 756-MC紫外分光光度計(上海光學儀器廠)。

1.2試藥 ZLR-8對照品(質(zhì)量分數(shù)99.7%，HPLC面積歸一化法)及3批原料藥，均由南京長澳醫(yī)藥科技有限公司提供；甲醇為色譜純；水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1測定波長的選擇 用ZLR-8對照品配制質(zhì)量濃度為10 μg·mL-1的甲醇溶液，以甲醇為空白，在200～400 nm波長處進行紫外掃描，記錄紫外吸收光譜。結(jié)果表明，本品在203，223和271 nm處有最大吸收。考慮到203 nm處的吸收為末端吸收，223 nm處的吸收靠近末端吸收，對測定有一定的干擾，故實驗中選擇271 nm為檢測波長。

2.2線性實驗 取60 ℃干燥至恒質(zhì)量的ZLR-8對照品約10 mg，精密稱定，置于100 mL棕色量瓶中，加甲醇約50 mL，超聲20 min使其溶解，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。精密量取該溶液1，2.5，5，7.5和10 mL，置于50 mL棕色量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。以紫外分光光度法在271 nm波長處測定吸光度。以質(zhì)量濃度C(μg·mL-1)為橫坐標、吸光度A為縱坐標，進行線性回歸，得線性方程：A=3.31×10-2C-4.50×10-3，r=0.999 8，樣品質(zhì)量濃度在2.056～20.56 μg·mL-1范圍內(nèi)，與吸光度呈良好的線性關(guān)系。

2.3穩(wěn)定性實驗 取含量測定項下的溶液，分別在室溫放置0，2，4，6，8，10和12 h后，以紫外分光光度法于271 nm處測定吸光度A，以12 h內(nèi)吸光度(A)的變化觀察樣品穩(wěn)定性。其RSD為0.53%，表明樣品在配制后12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.4重復性實驗 取同一批樣品(批號20020807)，按含量測定方法分別測定含量6次。6次實驗的RSD為0.31%，表明本法重復性良好。

2.5含量測定 取60 ℃干燥到恒質(zhì)量的本品約10 mg，精密稱定，置于100 mL棕色量瓶中，加甲醇約70 mL，超聲20 min使其溶解，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。精密量取5 mL，置于50 mL棕色量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，制得供試品溶液；另取ZLR-8對照品適量，精密稱定，加甲醇溶解并稀釋成10 μg·mL-1的對照品溶液。以紫外分光光度法于271 nm波長處測定吸光度，按外標法計算ZLR-8的含量。每批樣品重復測定3次，含量測定結(jié)果見表2。

3 討論

ZLR-8原料藥含量測定方法比較 ZLR-8是由呋咱氮氧化物3-羥甲基-4-苯基呋咱氮氧化物及其異構(gòu)體作為NO供體，以酯鍵與雙氯芬酸偶聯(lián)后得到的新型非甾體抗炎化合物。ZLR-8屬于全新化學結(jié)構(gòu)藥物，需要結(jié)合其化學結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)來設(shè)計合理的含量測定方法。目前，所報道的ZLR-8的含量測定方法包括非水毛細管電泳法[3]、高效液相色譜法[4]和凱氏定氮法[4]。針對ZLR-8分子結(jié)構(gòu)中大的共軛體系，本文建立了紫外可見分光光度法簡單快速地測定ZLR-8含量。我們從方法的專屬性、重復性、適用范圍等方面分析了4種ZLR-8含量測定方法的特點，見表1，這4種方法含量測定結(jié)果見表2。

表1 4種分析方法的比較

表2 4種含量測定結(jié)果比較

比較所建立的這4種分析方法，凱氏定氮法是經(jīng)典的容量分析法，它具有準確性好、專屬性差的特點，實驗過程中樣品用量大，消解樣品所需時間長，實驗步驟繁瑣，引入誤差的可能性較大，樣品含量測定過程中重復性不高；非水毛細管電泳法是適于分析水中難溶的藥物，流動相消耗量小，但由于有機溶劑黏度較大，運行時間較長，其檢測靈敏度低，樣品用量較大，僅適用于ZLR-8的含量測定[3]。HPLC法是目前藥物分析領(lǐng)域中應(yīng)用廣泛、技術(shù)成熟的分析方法之一，同時文獻[3]所建立的HPLC法專屬性好、靈敏度高、精密度高，能檢出2個有關(guān)物質(zhì)，非常適合于ZLR-8有關(guān)物質(zhì)檢查，也可用于ZLR-8原料藥的含量測定[4]。UV法所需儀器設(shè)備簡單，操作方便快捷，樣品取樣量少，本文所建立的紫外分光光度法準確度高，精密度高，重復性好，含量測定結(jié)果與文獻報道結(jié)果相一致，適用于快速測定ZLR-8原料藥含量。

參考文獻：

[1] 李瑞文，張奕華，季暉，等．苯基呋咱氮氧化物與雙氯芬酸偶聯(lián)化合物的合成及其抗炎鎮(zhèn)痛活性[J].藥學學報，2002，37(1): 27-32.

[2] 馮曉春，季暉，張奕華，等．ZLR-8對大鼠胃潰瘍愈合的影響及體外一氧化氮釋放作用[J].中國藥科大學學報，2004，35(4): 357-360.

[3] 楊靜，劉文英，張奕華．非水毛細管電泳法測定雙氯芬酸衍生物ZLR-8的含量[J].中國藥科大學學報，2005，36(4): 326-329.

[4] 楊靜，劉文英，張奕華，等．高效液相色譜法測定2-(2，6-二氯苯基氨基)苯乙酸-4-(4-苯基-1，2，5-嗯二唑-2-氧化物-3-)甲氧基苯甲酯原料藥的研究[J].中國藥學雜志，2006，41(12): 951-953.

[5] 楊靜，劉文英，張奕華，等. 毛細管氣相色譜法測定新藥ZLR-8原料中9種殘留溶劑量[J].江蘇藥學與臨床研究，2005，13(5): 25-28.

[6] 增娟，張建軍，周建平，等．非甾體抗炎藥ZLR-8噴霧干燥乳劑的處方研究[J].中國藥科大學學報，2006，37(1): 33-36.

[7] 高緣，張奕華．ZLR-8噴霧干燥乳劑的制備及高效液相色譜法含量測定[J].中國醫(yī)院藥學雜志，2007，27(11): 1491-1493.

[8] 蔡鳴，于飛龍．非甾體抗炎藥ZLR-8的大鼠胚胎-胎仔發(fā)育毒性實驗研究[J].西北藥學雜志，2010，25(3): 193-195.

[9] 姜力勛，傅志賢，劉彩連．氮氧供體型非甾體抗炎化合物ZLR-8有關(guān)雜質(zhì)的合成[J].藥學與臨床研究，2008，16(1): 11-13.