楊 春，歐 超，李 瑗，蘇建家，駱成飄，盧曉旭，朱伶群，曹 驥

(廣西醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院實(shí)驗(yàn)研究部，南寧 530021)

樹鼩(Tupaiabelangeri) 是一種形似松鼠的小型哺乳動(dòng)物，分類上屬哺乳綱有胎盤類，介于食蟲目和靈長(zhǎng)目之間的一個(gè)獨(dú)立階元——攀鼩目，因其特殊分類地位和生物學(xué)特性受到了醫(yī)學(xué)生物學(xué)工作者的矚目[1]。在我國(guó)云南、貴州、廣西、廣東、海南等地均有分布。由于樹鼩具有體型小、易飼養(yǎng)、管理方便、價(jià)廉及新陳代謝和大體解剖遠(yuǎn)比嚙齒類動(dòng)物更接近人類等優(yōu)點(diǎn)，利用樹鼩進(jìn)行人類疾病動(dòng)物模型的實(shí)驗(yàn)研究的多個(gè)領(lǐng)域，如各種類型的病毒性肝炎模型、耐藥細(xì)菌感染和敗血癥等感染性疾病模型，精神和神經(jīng)疾病模型，糖尿病、膽結(jié)石等代謝性疾病模型以及癌癥模型[2-3]。近年來，樹鼩在醫(yī)學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究中的作用越來越受到重視。樹鼩是一種晚熟型的哺乳動(dòng)物，出生至斷奶整個(gè)哺乳期是其生長(zhǎng)發(fā)育最快和最關(guān)鍵的時(shí)期[4]，本文主要對(duì)樹鼩乳的基本組成進(jìn)行分析，并與嬰幼兒配方奶和牛乳的主要成分進(jìn)行比較，揭示它們之間的異同，為今后樹鼩人工育幼和飼養(yǎng)工作的開展提供經(jīng)驗(yàn)。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及實(shí)驗(yàn)環(huán)境

樹鼩種群購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院昆明動(dòng)物研究所【SCXK(桂)2009-2002】，選取野生成年樹鼩雌雄10對(duì)；樹鼩體重雄性(140～160)g；雌性(120～140)g。動(dòng)物室的溫度控制在(25～28)℃，相對(duì)濕度(60%～80%)，每日光照12 h，室內(nèi)保持清潔、安靜、通風(fēng)良好?；\具大小為(70× 50 × 50)cm，籠內(nèi)架放樹枝供樹鼩攀爬，籠后側(cè)放置1個(gè)相通的(20 × 20 × 50)cm的巢箱，供母樹鼩產(chǎn)仔躲藏使用，定時(shí)清洗和消毒籠具。樹鼩按雌:雄=2:1配對(duì)，雌雄樹鼩合籠后，每周稱體重，注意觀察懷孕、分娩情況。

1.2 方法

1.2.1 母樹鼩奶的采集：選取10只分娩后(1～21)d期間的哺乳期母樹鼩，用特制的棉質(zhì)捕捉袋子將哺乳期母樹鼩固定，并暴露乳頭，消毒乳頭皮膚，用人工被動(dòng)母乳喂養(yǎng)方法讓仔樹鼩自由吮吸母乳，立即按照無(wú)菌操作的方法用注射器直接采取仔樹鼩胃內(nèi)的乳汁，1次/2d，連續(xù)3-5次，每只母樹鼩采取乳汁總量約18 mL，每次采樣完畢立即凍存于-40℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 飼料：基礎(chǔ)日糧為大米粉、豆粉、魚粉、玉米粉、麥麩、花生油、雞蛋、維生素添加劑等組成的混合飼料，母樹鼩懷孕及哺乳期間適當(dāng)增加蛋白質(zhì)的黃粉蟲，飼料和飲水任其自由食用，每日喂乳母樹鼩牛奶和水果各1次。

1.2.3 檢測(cè)方法：將所凍存樹鼩乳汁樣品低溫運(yùn)送至廣西分析測(cè)試研究中心[廣西分析測(cè)試研究中心是經(jīng)中國(guó)實(shí)驗(yàn)室國(guó)家認(rèn)可委員會(huì)評(píng)定，獲CANCL實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可證書(№：0706號(hào))是獨(dú)立于生產(chǎn)和消費(fèi)部門，具有第三方公正地位的檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室]，由該中心按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的方法進(jìn)行檢測(cè)；所用的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)為，灰分：參照GB/T5413.7-1997；總固形物：參照GB/T5413.8-1997；蛋白質(zhì)：參照GB/T5413.1-1997；脂肪：參照GB/T5413.3-1997；乳糖：參照GB/T5413.5-1997；鈣、鐵、鋅、鈉、鉀、鎂、銅、錳：參照GB/T5413.21-1997；磷：參照GB/T5413.22-1997。嬰幼兒配方奶粉的基本成分參照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)[5](China National Standardization Management Committee 2004)GB10765—1997)嬰兒配方乳粉I的規(guī)定摘錄，牛乳成分參照Malacame M[6]。主要成份有總固形物(乳中除去水和氣體之外的物質(zhì))、水、脂肪、蛋白質(zhì)、乳糖等。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所有數(shù)據(jù)經(jīng)過國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)單位換算，計(jì)數(shù)10只乳母樹鼩乳汁的檢測(cè)值的均數(shù)及標(biāo)準(zhǔn)差表示。采用SPSS 10.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。

2 結(jié)果

樹鼩乳汁由主要成份及礦物質(zhì)成分兩大部分組成，各主要成分含量用均數(shù)及標(biāo)準(zhǔn)差表示(表1)，其中主要成份有總固形物(乳中除去水和氣體之外的物質(zhì))、水、脂肪、蛋白質(zhì)、乳糖等，樹鼩乳汁的礦物質(zhì)成分主要有鈣、磷、鉀、鈉、鎂、鐵、鋅、銅、錳等組成(表2)?？傮w來說，樹鼩乳和牛乳、嬰幼兒配方乳三者的主要營(yíng)養(yǎng)成分十分相似，都是由水、脂肪、蛋白質(zhì)、乳糖、鈣、磷、鉀、鈉、鎂、鐵、鋅、銅、錳等組成；樹鼩乳總固形物為43.63%、脂肪為26.01%、蛋白質(zhì)為10.41%、乳糖為0.45%、灰分為0.99%(表1)。與牛乳及嬰幼兒配方乳主要營(yíng)養(yǎng)成份含量相比，樹鼩乳的總固形物、灰分、蛋白質(zhì)、脂肪、乳糖含量分別為牛乳的3.36、1.24、2.74、6.67、0.09倍；樹鼩乳的總固形物、灰分、蛋白質(zhì)、脂肪、乳糖含量分別為嬰幼兒配方乳的1.44、0.20、0.58、1.53、0.06倍(表1，圖1)；與牛乳及嬰幼兒配方乳礦物質(zhì)成分含量相比，樹鼩乳的礦物質(zhì)成分鈣、磷、鉀、鈉、鎂、鐵、鋅含量均大于牛乳，分別為1.83、2.73、1.25、1.93、1.28、1.48倍，而均小于嬰幼兒配方乳，分別為0.66、0.85、0.34、0.26、0.85、0.24、0.49倍(圖1、2)。

表1 樹鼩乳的主要營(yíng)養(yǎng)成份及含量

圖2 樹鼩乳、嬰幼兒配方乳和牛乳礦物質(zhì)成分含量比較

3 討論

隨著樹鼩在醫(yī)學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究中的作用越來越受到重視，樹鼩的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物化是目前的研究熱點(diǎn)。近年來，中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究所獲得了樹鼩規(guī)模性繁殖的成功。中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究所獲得樹鼩規(guī)?；敝车闹饕?jīng)驗(yàn)在于：用保障營(yíng)養(yǎng)均衡穩(wěn)定全價(jià)顆粒飼料喂養(yǎng)樹鼩，初產(chǎn)子代母樹鼩由具有經(jīng)產(chǎn)史的母樹鼩誘導(dǎo)哺乳，有效提高了子代樹鼩的繁殖率和存活率[7]。本實(shí)驗(yàn)室嘗試用產(chǎn)后的母樹鼩作為乳母被動(dòng)哺乳使得仔樹鼩能健康成活[8]。但在建立樹鼩疾病模型的探索中，由于要進(jìn)行各種藥物、病毒干預(yù)，也應(yīng)考慮人工哺乳育幼的可能。在本課題組多年的乙型肝炎樹鼩模型的研究中發(fā)現(xiàn)，利用免疫力低下的新生樹鼩(出生1～3 d)皮下注射乙型肝炎感染血清可誘導(dǎo)出慢性乙肝模型[9]。

母乳是雌性哺乳動(dòng)物分娩后的乳腺分泌物，主要含有脂肪、蛋白質(zhì)、乳糖、無(wú)機(jī)鹽類及維生素等各種成分，其主要功能是為了滿足新生動(dòng)物的營(yíng)養(yǎng)需要。對(duì)在自然環(huán)境中哺乳動(dòng)物培育新生子代的成活率起到非常關(guān)鍵的作用，乳中各種主要成份的含量與哺乳動(dòng)物的種類有關(guān)，不同種類之間，其成分和含量有較大的差別。傳統(tǒng)的嬰幼兒配方奶粉多以牛奶或者羊奶為原材料，在此基礎(chǔ)上通過工藝添加完善營(yíng)養(yǎng)結(jié)構(gòu)以適合嬰幼兒的生長(zhǎng)發(fā)育(參照GB10765-1997嬰兒配方奶粉Ⅰ)，其成分和含量較為全面。了解樹鼩乳的基本組成，對(duì)探討樹鼩的育幼以及馴養(yǎng)過程中飼料營(yíng)養(yǎng)成分的調(diào)配研究有一定的意義。

本文對(duì)樹鼩乳汁的基本組成進(jìn)行檢測(cè)，分析發(fā)現(xiàn)：樹鼩乳和牛乳、嬰幼兒配方乳三者的主要營(yíng)養(yǎng)成分十分相似，都是由水、脂肪、蛋白質(zhì)、乳糖、鈣、磷、鉀、鈉、鎂、鐵、鋅、銅、錳等組成，這可能與樹鼩在生物分類上屬于親緣關(guān)系接近人類程度僅次于猴子的低等靈長(zhǎng)類哺乳動(dòng)物有關(guān)；與牛乳及嬰幼兒配方乳主要營(yíng)養(yǎng)成份含量相比，樹鼩乳的主要營(yíng)養(yǎng)成份含量大于牛乳及嬰幼兒配方乳的有總固形物、脂肪，分別為3.36、6.67倍及1.44、1.53倍；可能與乳母樹鼩隔天喂養(yǎng)子代樹鼩生物習(xí)性有關(guān)，為本課題組多年繁育子樹鼩的觀察發(fā)現(xiàn)乳母樹鼩隔天喂養(yǎng)子代樹鼩生物習(xí)性提供有力的依據(jù)，本課題組在多年繁育樹鼩過程中亦發(fā)現(xiàn)成年樹鼩喜歡進(jìn)食面包蟲、蜂蛹等高蛋白高脂肪的食物，給孕期和哺乳期的母樹鼩補(bǔ)充高蛋白高脂肪的食物有利于乳汁的產(chǎn)生和仔樹鼩的生長(zhǎng)發(fā)育。與牛乳主要成份含量相比，樹鼩乳的主要營(yíng)養(yǎng)成份含量大于牛乳的有總固形物、灰分、蛋白質(zhì)、脂肪，分別為3.36、1.27、2.74、6.67倍，同時(shí)與嬰幼兒配方乳相比，樹鼩乳的主要營(yíng)養(yǎng)成份含量大于嬰幼兒配方乳的有總固形物、脂肪，分別為3.36、6.67倍，與牛乳及嬰幼兒配方乳礦物質(zhì)成分含量相比，樹鼩乳的礦物質(zhì)成分鈣、磷、鉀、鈉、鎂、鐵、鋅含量均大于牛乳，分別為1.83、2.73、1.25、1.93、1.28、1.48倍，而均小于嬰幼兒配方乳，分別為0.66、0.85、0.34、0.26、0.85、0.24、0.49倍。由于牛乳及嬰幼兒配方乳的主要成分存在如此大的區(qū)別，提示人工被動(dòng)喂養(yǎng)初生子樹鼩時(shí)，簡(jiǎn)單的使用牛乳或嬰幼兒配方乳代替母乳喂養(yǎng)不易成活的原因之一。提示高脂肪低乳糖含量的乳制品是仔樹鼩人工配方乳喂養(yǎng)的特點(diǎn)，可以一定程度上指導(dǎo)人工配方乳汁成分，提高人工繁育子樹鼩的成功率，為加快樹鼩作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物化的進(jìn)程提供科學(xué)依據(jù)。

本研究進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，樹鼩乳中乳糖含量?jī)H為0.47%，相比牛乳及嬰幼兒配方乳，樹鼩乳的乳糖含量遠(yuǎn)低于牛乳和嬰幼兒配方奶粉，其機(jī)理有待進(jìn)一步探討，有可能與樹鼩缺乏乳糖酶，存在乳糖不耐受有關(guān)。樹鼩乳中蛋白質(zhì)、脂肪含量高于牛乳的特點(diǎn)，解釋了本課題組在多年繁育樹鼩過程中亦發(fā)現(xiàn)成年樹鼩喜歡進(jìn)食面包蟲、蜂蛹等高蛋白高脂肪的食物的特性，這可能與給孕期和哺乳期的母樹鼩補(bǔ)充高蛋白高脂肪的食物有利于乳汁的產(chǎn)生和仔樹鼩的生長(zhǎng)發(fā)育有關(guān)。

總之，本研究提示樹鼩乳的主要營(yíng)養(yǎng)成分呈現(xiàn)高脂高蛋白低糖，可為開展樹鼩人工育幼工作和搭配喂養(yǎng)飼料的營(yíng)養(yǎng)成分提供一定的依據(jù)。

參考文獻(xiàn)：

[1] 彭燕章, 葉智彰, 鄒如金, 等.樹鼩生物學(xué)[M].昆明：云南科技出版社. 1991：24-34.

[2] Xu L, Zhang Y, Liang B,etal. Tree shrew under the spot light: emerging model of human diseases [J]. Zool Res, 2013, 34(1):1-11.

[3] 陳瑾, 代解杰, 孫曉梅. 樹鼩肝炎動(dòng)物模型的研究進(jìn)展 [J]. 中國(guó)比較醫(yī)學(xué)雜志, 2008, 18(2):59-62.

[4] 于永梅,吳一遷,羅海濤,等.哺乳階段仔樹鼩生長(zhǎng)發(fā)育的初步研究[J].上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué).2002,1(22):44-45.

[5] 中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì).中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)庫(kù). 嬰兒配方乳粉Ⅰ(GB10765-1997)[S]. 2004.

[6] Malacarne M, Summer A, Fossa E,etal. Composition, coagulation properties and Parmigiano-Reggiano cheese yield of Italian brown and Italian Friesian herd milks [J]. J Dairy Res. 2006, 73(2):171-177.

[7] 江勤芳，匡德宣，仝品芬，等. 樹鼩規(guī)?；敝臣胺敝橙旱慕?[J]. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué), 2011, 6(28):35-38.

[8] 梁亮, 李瑗, 楊春, 等. 樹鼩實(shí)驗(yàn)室繁殖及育幼的探討 [J]. 四川動(dòng)物, 2005, 24(2):199-201.

[9] Wang Qi, Schwarzenberger P, Yang F,etal. Experimental chronic hepatitis B infection of neonatal tree shrews (Tupaia belangeri chinensis): A model to study molecular causes for susceptibility and disease progression to chronic hepatitis in humans [J]. Virol J. 2012, 9(2):170-179.