陳啟林,胡孝麗,徐瓊莉,嚴(yán) 艷

(湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬太和醫(yī)院,湖北 十堰 442000)

IL-17、COX-2在口腔扁平苔蘚和口腔鱗癌中的表達(dá)分析

陳啟林,胡孝麗,徐瓊莉,嚴(yán) 艷

(湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬太和醫(yī)院,湖北 十堰 442000)

目的 研究白細(xì)胞介素-17(IL-17)與環(huán)氧化酶-2(COX-2)在口腔扁平苔蘚、口腔鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)情況，分析兩者的關(guān)系和臨床意義。方法 取20例口腔扁平苔蘚及20例口腔鱗狀細(xì)胞癌組織標(biāo)本為研究對象，并選取20例正?？谇火つ?biāo)本作為對照，采用免疫組化法檢測IL-17、CXO-2的表達(dá)情況，分析IL-17、CXO-2的表達(dá)水平與口腔黏膜病變的關(guān)系。結(jié)果 ①對照組中6例(30%)IL-17呈陰性表達(dá)，14例(70%)呈不同程度的陽性表達(dá)；扁平苔蘚組1例(5%)IL-17陰性表達(dá)，19例(95%)陽性表達(dá)；鱗癌組中均有陽性表達(dá)。經(jīng)比較發(fā)現(xiàn)，IL-17在扁平苔蘚組與鱗癌組陽性表達(dá)率均顯著高于對照組(P均<0.05)，但扁平苔蘚組與鱗癌組IL-17陽性率比較無顯著性差異(P>0.05)。②對照組中未見CXO-2陽性表達(dá)，扁平苔蘚組10例(50%)陽性表達(dá)，鱗癌組16例(80%)陽性表達(dá)。經(jīng)比較發(fā)現(xiàn)，CXO-2在扁平苔蘚組與鱗癌組陽性表達(dá)率均顯著高于對照組(P均<0.05)，且鱗癌組顯著高于扁平苔蘚組(P<0.05)。結(jié)論 IL-17與CXO-2在口腔扁平苔蘚以及鱗癌組織均高度表達(dá)，可能通過改變局部微環(huán)境而影響癌前病變及惡性腫瘤的進(jìn)展。

白細(xì)胞介素17；環(huán)氧化酶-2；口腔扁平苔蘚；口腔鱗癌

口腔癌是我國常見的惡性腫瘤之一，發(fā)病率較高[1]，近年來在東亞國家及地區(qū)均有上升趨勢?？谇话┤菀讖?fù)發(fā)，復(fù)發(fā)率為20%～48%，5 a生存率約為60%，且部分患者發(fā)病年齡較低，有年輕化趨勢。近年來研究發(fā)現(xiàn)炎性因子可通過改變局部微環(huán)境而影響腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程，而環(huán)氧化酶-2(COX-2)與細(xì)胞凋亡、腫瘤發(fā)生等密切相關(guān)[2]。本研究通過觀察白介素-17(IL-17)與COX-2在口腔扁平苔蘚，口腔鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)況，分析兩者的關(guān)系和臨床意義。

1 臨床資料

1.1 一般資料 選取2009年1月—2012年1月我院初診的20例口腔扁平苔蘚和20例口腔鱗癌患者的病理組織為研究對象，分別納入扁平苔蘚組和鱗癌組。病理組織均取自手術(shù)切除并經(jīng)石包處理，術(shù)前未進(jìn)行免疫、激素、放療、化療等相關(guān)治療，患者本身未合并其他自身免疫性疾病。選取20例正?？谇火つそM織作為對照組，均取自口腔外傷患者，排除口腔黏膜疾病或全身免疫系統(tǒng)疾病，鏡下組織表現(xiàn)為復(fù)層鱗狀上皮，包括基底層、細(xì)胞層、顆粒層、角化層。

1.2 方法

1.2.1 儀器和試劑 超凈工作臺，微型常溫離心機(jī)，超純水及除菌系統(tǒng)，電冰箱，OLYMPUS光學(xué)顯微鏡及數(shù)碼成像系統(tǒng)等；抗IL-17單克隆抗體購自北京博奧森生物有限公司；抗COX-2多克隆抗體購自美國Santa Cruz公司；SP免疫組化試劑盒以及DAB顯色試劑盒購自北京中山生物有限公司。

1.2.2 試驗(yàn)步驟 切片機(jī)連續(xù)切片，厚度取4 pm,并置于經(jīng)多聚賴氨酸處理的載玻片上。常規(guī)脫蠟水洗后置于3%雙氧水中約10 min，滅活內(nèi)源性過氧化物酶。室溫下采用檸檬酸緩沖液，微波加熱修復(fù)抗原，并以正常羊血清封閉20 min，蒸餾水沖洗后將載玻片上的水漬擦干，滴加一抗，37 ℃孵育1h，滴加山羊抗小鼠IgG，37 ℃靜置30 min，然后滴加SP復(fù)合物，靜置30 min，DAB濃縮試劑盒顯示，顯微鏡下控制顯示時(shí)間，沖洗后蘇木精復(fù)染，然后脫水、透明、封片。所有試驗(yàn)步驟及操作嚴(yán)格按試劑盒說明進(jìn)行，設(shè)立陰性對照并將PBS代替一抗重復(fù)操作。

1.3 方法和評價(jià)標(biāo)準(zhǔn) 所有切片在鏡下隨機(jī)選取5個(gè)以上高倍視野(×400)觀察，淺黃色—棕褐色細(xì)胞粒狀為陽性表現(xiàn)，觀察COX-2、IL-17在正?？谇火つぜ?xì)胞、扁平苔蘚組織以及鱗癌組織中的陽性表達(dá)情況，并計(jì)算陽性細(xì)胞百分比。按陽性細(xì)胞所占的百分比進(jìn)行分級，陽性細(xì)胞表達(dá)率低于10%為陰性(-)，10%～20%為弱陽性(+)，>20%～50%為陽性()，>50%為陽性()。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均由SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)數(shù)資料以率表示，采用2檢驗(yàn)。雙側(cè)檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié) 果

2.1 3組IL-17表達(dá)情況比較 對照組中6例(30%)TL-17呈陰性表達(dá)，16例(70%)呈不同程度的陽性表達(dá)，主要位于胞漿，分布于顆粒層、角化層、部分棘細(xì)胞層，間質(zhì)細(xì)胞中可見少量陽性表達(dá)；扁平苔蘚組中1例(5%)為陰性表達(dá)，19例(95%)呈陽性表達(dá)，主要在固有層淺層上皮細(xì)胞內(nèi)表達(dá)。鱗癌組中均有陽性表達(dá)，腫瘤細(xì)胞及周圍間質(zhì)細(xì)胞均可見陽性表達(dá)。經(jīng)比較發(fā)現(xiàn)，IL-17在扁平苔蘚組與鱗癌組陽性表達(dá)率均顯著高于對照組(P均<0.05),但扁平苔蘚組與鱗癌組IL-17陽性率無顯著差異(P>0.05)。見表1。

2.2 3組COX-2表達(dá)強(qiáng)度情況比較 對照中未見COX-2陽性表達(dá)，扁平苔蘚組中10例(50%)陽性表達(dá)，以細(xì)胞質(zhì)或核膜為主，多見于上皮棘細(xì)胞層、顆粒層以及角化層、基底細(xì)胞未見陽性表達(dá)；在鱗癌組中16例(80%)陽性表達(dá)，鱗狀癌細(xì)胞中呈強(qiáng)陽性表達(dá)。經(jīng)比較發(fā)現(xiàn)，COX-2在扁平苔蘚組與鱗癌組陽性表達(dá)率均顯著高于對照組(P<0.05),且鱗癌組顯著高于扁平苔蘚組(P<0.05)。見表2。

表1 3組IL-17表達(dá)強(qiáng)度比較 例

表2 3組COX-2表達(dá)強(qiáng)度比較 例

3 討 論

口腔扁平苔蘚是口腔黏膜的慢性非感染性炎疾病，Th1/Th2失衡等免疫因素在疾病的發(fā)生、發(fā)展中具有重要作用。因口腔扁平苔蘚有癌變潛能，故WHO將其列入潛在惡性病范疇?？谇槐馄教μ\病損區(qū)以T淋巴細(xì)胞聚集為主，包括輔助性和抑制性T細(xì)胞，而B細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞卻相對少見?；罨腡淋巴細(xì)胞可產(chǎn)生多種炎性因子來調(diào)控，促進(jìn)免疫反應(yīng)過程，引起大量活化的T淋巴細(xì)胞在局部組織浸潤[3]。部分T淋巴細(xì)胞可分泌IL-17(Th 17亞群)，并可促炎癥反應(yīng)，調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答，促炎細(xì)胞因子分泌，在自身免疫疾病中具重要作用[4]。

口腔扁平苔蘚具有慢性持續(xù)性，免疫抑制功能降低，病變區(qū)可見毒性T細(xì)胞克隆等自身免疫性疾病的特征。目前在實(shí)體瘤與周圍間質(zhì)關(guān)系的研究中發(fā)現(xiàn)，慢性炎癥過程中細(xì)胞因子的變化可影響局部微環(huán)境，進(jìn)而改變正常細(xì)胞質(zhì)的存活、增殖、分化周期，是腫瘤起始、進(jìn)展并具有侵襲性和轉(zhuǎn)移能力的關(guān)鍵因素之一[5]。在胃癌、非小細(xì)胞肺癌、卵巢癌、肝癌、腸癌、乳腺癌惡性腫瘤中均可發(fā)現(xiàn)Th17細(xì)胞及IL-17；進(jìn)一步研究局部微環(huán)境，發(fā)現(xiàn)惡性腫瘤細(xì)胞可分泌MCP-1、促炎因子等促進(jìn)Th17細(xì)胞分化并維持其生長過程[6]。本次研究發(fā)現(xiàn)約30%正?？谇火つそM織不表達(dá)IL-17，70%陽性表達(dá)以胞漿多見，包括顆粒層、角化層、部分棘細(xì)胞層以及間質(zhì)細(xì)胞。95%扁平苔蘚組織IL-17呈陽性表達(dá)，多見于固有層淺層上皮細(xì)胞，而鱗癌組織中均有陽性表達(dá)，腫瘤細(xì)胞及周圍間質(zhì)細(xì)胞均可陽性表達(dá)。經(jīng)比較發(fā)現(xiàn)，IL-17在扁平苔蘚組與鱗癌組織表達(dá)率顯著高于對照組，扁平苔蘚組與鱗癌組IL-17陽性質(zhì)率無顯著性差異，但鱗癌組強(qiáng)陽性表達(dá)率，IL-17在口腔扁平苔蘚，口腔鱗癌中均有高度表達(dá)，提示口腔扁平苔蘚上皮長期受炎癥細(xì)胞浸潤，隨著局部細(xì)胞因子水平改變，炎性因子網(wǎng)絡(luò)化激活可能促進(jìn)口腔鱗癌的發(fā)生。但也學(xué)者認(rèn)為，IL-17高表達(dá)是非霍奇金淋巴瘤預(yù)后較好的指標(biāo)之一[7]。因此，IL-17在癌前病變及鱗癌中的表達(dá)水平與預(yù)后的關(guān)系尚需進(jìn)一步深入研究。

COX-2屬于誘導(dǎo)型酶，在大多數(shù)正常組織中不表達(dá)，在炎性因素等刺激下可誘導(dǎo)性表達(dá)。其在炎癥、腫瘤等病理狀態(tài)下受炎性刺激物、損傷、有絲分裂原和致癌物質(zhì)等促炎遞質(zhì)誘導(dǎo)后，呈表達(dá)增高趨勢，參與多種病理生理過程，具體是細(xì)胞膜磷脂通過磷脂酶A2途徑被水解釋放出花生四烯酸，在COX-2的催化下，合成前列腺素E2(PGE2)，最后產(chǎn)生系列炎癥遞質(zhì)，并通過瀑布式級聯(lián)反應(yīng)參與機(jī)體各生理、病理過程。COX-2的過度表達(dá)在癌前病變組織中較早出現(xiàn)，甚至早于細(xì)胞凋亡周期改變。有學(xué)者分析舌鱗狀細(xì)胞癌中COX-2表達(dá)水平，結(jié)果提示其表達(dá)水平與腫瘤侵襲性、轉(zhuǎn)移能力、預(yù)后等相關(guān)[8]。近年來對腫瘤微環(huán)境及發(fā)生、發(fā)展的研究發(fā)現(xiàn)，COX-2表達(dá)水平上升與腫瘤血管形成關(guān)系密切[9-10]。本次研究發(fā)現(xiàn)，COX-2在正?？谇火つぜ?xì)胞中幾乎不表達(dá)，50%的扁平苔蘚陽性表達(dá)，80%鱗癌陽性表達(dá)。經(jīng)比較發(fā)現(xiàn)，CXO-2在扁平苔蘚組與鱗癌組陽性表達(dá)率均顯著高于對照組，且鱗癌組陽性率高于扁平苔蘚組，與其他學(xué)者研究結(jié)果相近。Pandey等[11]研究發(fā)現(xiàn)CXO-2在正常口腔黏膜組織、癌前病變組織、口腔鱗癌組織中表達(dá)水平依次增高。

口腔黏膜癌變的機(jī)制是臨床研究的熱點(diǎn)之一，特別是癌前病變進(jìn)展為腫瘤的過程，例如局部微環(huán)境的變化，細(xì)胞因子間的正、負(fù)反饋網(wǎng)絡(luò)，多種因子共同作用引起細(xì)胞生長周期變化，刺激腫瘤血管生成等[12]。本研究初步發(fā)現(xiàn)IL-17與CXO-2在口腔扁平苔蘚及鱗癌組中均有不同程度的表達(dá)，但具體機(jī)制及對腫瘤環(huán)境的影響尚需進(jìn)一步深入研究，例如動態(tài)觀察腫瘤的發(fā)生與發(fā)展與IL-17、CXO-2的關(guān)系，從而為臨床治療預(yù)后評估提供參考。

[1] Warnakulasuriya S. Global epidemilology of oral and oropharyngeal cancer[J]. Oral Oncology,2009,45(3):309-316

[2] 錢毅，喬文靜，馬葉華，等. 人健康和炎性牙槽骨成骨細(xì)胞COX-2、PGE2、OPG，RANKL的表達(dá)[J]. 口腔醫(yī)學(xué)研究，2010,26(4):529-531

[3] 盧銳，周剛. 輔助性T淋巴細(xì)胞極化相關(guān)細(xì)胞因子在口腔扁平苔蘚中的研究進(jìn)展[J]. 國際口腔醫(yī)學(xué)雜志，2008,35(6)：627-629

[4] Nguyen CQ,Hu MH,Li Y,et al. Salivary gland tissue expression of inter leukin-23 and inter leukin-17 in Sjogren’s syndrome:findings in humans and mice[J]. Arthritis Rheum,2008,58(3):734-743

[5] 劉國林，閆威，陳勇，等. 口腔扁平苔蘚癌變的研究進(jìn)展[J]. 腫瘤防治研究,2010,37(7):848-851

[6] Su XM,Ye J,Hsueh EC,et al. Tumor microenvironments direct the recruitmentAnd expansion of human th17 cells[J]. J Immunol,2010,184(3):1630-1641

[7] Yang ZZ,Novak AJ,Ziesmer SC,et al. Malignant B cells skew the balance of regulatory T cells and TH17 cells in B-cell non-Hodgkins lymphoma[J]. Cancer Res,2009,69(13):5522-5530

[8] Renkonen J,Wolff H,Paavonen Y. Expression of cyclooxygenase-2 in human tongue carcinoma and its precursor lesions[J]. Virchows Arch,2002,440(6):594-597

[9] 許國祺，李秉琦，李輝. 口腔癌前病變：白斑與扁平苔蘚[M]. 北京：中國醫(yī)藥科技出版社，1992：173-222

[10] 周曾同，張水龍，唐國瑤. 口腔黏膜癌前病變研究進(jìn)展[J]. 臨床口腔醫(yī)學(xué)雜志，2000，16(2)：75-76

[11] Pandey M,Prakash O,Santhi WS,et al. Over expression of COX-2gene in oral cancer is independent of stage of disease and degree of differentiation[J]. Int J Oral Maxillofacial Surge,2008,37(4):379-383

[12] Sudha VM,Hemavathy S. Role of bcl-2 oncoprotein in oral potentially malignant disorders and squamous cell carcinoma:and immunohistochemical study[J]. Indian J Dent Res,2011,22(4):520-525

Expression of COX-2 and IL-17 in the oral lichen planus and oral squamous cell carcinoma

Chen Qilin, Hu Xiaoli, Xu Qiongli, Yan Yan

(The Affiliated Taihe Hospital of Hubei University of Medicine, Shiyan 442000, Hubei, China)

Objective It is to investigate the expression of COX-2 and IL-17 in the oral lichen planus and oral squamous cell carcinoma, and analyze their relationships and clinical significance. Methods The expression of Cox-2 and IL-17 of 20 cases of oral lichen planus (lichen planus group), 20 cases of oral squamous cell carcinoma (oscc group) and 20 cases of normal oral mucosa (control gorup) were examined with immunohistochemical technique. The relationships of the expression of Cox-2 and IL-17 with oral mucosal lesions were analyzed. Results ①The IL-17 positive rate in control group, lichen planus group and oscc group were 70%, 95% and 100% respectively. The IL-17 positive rate both in lichen planus group and oscc group were markedly higher than that in control group (allP<0.05). But there was no obvious difference of IL-17 positive rate between lichen planus group and oscc group. ②The Cox-2 positive rate in control group, lichen planus group and oscc group were 0%, 50% and 80% respectively. The Cox-2 positive rate both in lichen planus group and oscc group were markedly higher than that in control group (allP<0.05), and COX-2 positive rate in oscc group were markedly higher than that in lichen planus group (P<0.05). Conclusion The expression of Cox-2 and IL-17 in the oral lichen planus and mucosa squamous cell carcinoma are increased, they may be play an important role to influence the tumor microenvironment in tumor development.

IL-17; COX-2; oral lichen planus; oral squamous cell carcinoma

陳啟林，男，副主任醫(yī)師， 副教授，從事口腔正畸基礎(chǔ)與臨床研究。

嚴(yán)艷，E-mail: 13597888081@163.com

湖北省教育科學(xué)“十二五”規(guī)劃2012年度重點(diǎn)課題(2012A050);十堰市科技局科研基金項(xiàng)目(ZD2011019)

10.3969/j.issn.1008-8849.2014.30.002

R758.65;R739.8

A

1008-8849(2014)30-3310-03

2013-12-30