李 昭 周月宏 王俊平

1.沈陽(yáng)醫(yī)學(xué)院藥理學(xué)教研室，遼寧沈陽(yáng) 110034；2.沈陽(yáng)醫(yī)學(xué)院附屬奉天醫(yī)院，遼寧沈陽(yáng) 110024

獨(dú)角蓮系天南星科多年生草本植物，在我國(guó)傳統(tǒng)中醫(yī)治療中廣泛用于治療多種惡性腫瘤，有較好的臨床療效，同時(shí)動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)也顯示獨(dú)角蓮明顯抑制腫瘤生長(zhǎng)[1]。有人研究了獨(dú)角蓮的抗腫瘤活性成分，結(jié)果表明其水提取物、二氯甲烷提取物和乙醚提取物均具有較強(qiáng)的體外抗腫瘤作用[2-3]。獨(dú)角蓮口服對(duì)消化系統(tǒng)刺激性很強(qiáng)，脂溶性成分不利于靜脈給藥[4]。因此，我們研制了獨(dú)角蓮油微乳，以解決獨(dú)角蓮口服刺激性大和靜脈給藥的困難。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 儀器和藥品

BSXT-06型索氏提取器（上海）；ELS800激光粒度/Zeta電位分析儀（日本）；JSM-T200掃描型電子顯微鏡（JEOL，日本）。生獨(dú)角蓮 （遼寧鳳城）；聚乙二醇－二硬脂?；字Ｒ掖及?（PEGDSPE）（Polylipid Co.Ltd， 美國(guó)）。

1.2 動(dòng)物

昆明小鼠，18～20g，雌性，（沈陽(yáng)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，許可證：SYXK(遼)2003-0026）；S180肉瘤瘤原及艾氏腹水癌（由天津醫(yī)藥科學(xué)研究院）。

2 試驗(yàn)方法

2.1 獨(dú)角蓮油微乳的制備

取干燥獨(dú)角蓮塊莖500g,用粉碎機(jī)制成粉末。采用索氏提取器，以二氯甲烷為溶劑，提取至2 h,轉(zhuǎn)移提取液入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，回收二氯甲烷，即得到淡黃色獨(dú)角蓮油，置通風(fēng)櫥中，揮發(fā)殘留二氯甲烷至無(wú)味為止，大約5 mL。取獨(dú)角蓮油0.5 mL，PEG-DSPE（PEG分子量為 2000，表面活性劑）1 g，膽固醇 50 mg，把表面活性劑和膽固醇溶于100 mL無(wú)水乙醇中，然后與獨(dú)角蓮油混合，在50℃的水浴中混合成透明溶液，轉(zhuǎn)移到旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中，除去乙醇，制成薄膜，然后加入50 mL5%注射用葡萄糖，于冰水中高速分散5 min，反復(fù)3次，200nm無(wú)菌微孔濾膜過(guò)濾即得獨(dú)角蓮油微乳。

2.2 急性毒性試驗(yàn)

寇氏法計(jì)算獨(dú)角蓮油微乳的半數(shù)致死量（LD50）和95%可信限。

2.3 動(dòng)物腫瘤模型的建立

在無(wú)菌條件下，取第10～14天生長(zhǎng)良好的S180瘤原和艾氏腹水癌瘤原，剝?nèi)グぜ爸行膲乃澜M織，用生理鹽水洗凈，分別制備體積比為1：10的勻漿。在動(dòng)物前肢右腋下進(jìn)行碘酒/乙醇消毒，然后接種S180肉瘤，每只動(dòng)物0.2 mL瘤細(xì)胞勻漿懸液，建立實(shí)體型動(dòng)物腫瘤模型。將艾氏腹水癌瘤原用注射用生理鹽水稀釋10倍，搖勻，每只小鼠腹腔注射0.2 mL，建立腹水型腫瘤模型。于接種后次日，按體重差別最小原則，將動(dòng)物按體重差最小原則分為5組每組20只，且雌、雄動(dòng)物數(shù)相等。

2.4 給藥與藥效評(píng)價(jià)

給藥方案：陽(yáng)性對(duì)照阿霉素劑量為1mg/kg,每日尾靜脈給藥1次，共9次。實(shí)驗(yàn)組共設(shè)高、中、低三個(gè)劑量，分別為：0.08、0.04和0.02（mL獨(dú)角蓮油微乳/kg動(dòng)物）。腫瘤接種后第21天，處死動(dòng)物，解剖剝離S180瘤塊,稱瘤重，計(jì)算腫瘤生長(zhǎng)抑制率（TIR），計(jì)算公式為T(mén)IR＝（對(duì)照組平均瘤重-實(shí)驗(yàn)組平均瘤重）/對(duì)照組平均瘤重。腹水型動(dòng)物腫瘤模型，采用生命延長(zhǎng)率來(lái)評(píng)價(jià)藥效。

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

3 結(jié)果

3.1 獨(dú)角蓮油微乳的急性毒性

LD50＝0.4mL 獨(dú)角蓮油/kg動(dòng)物，95%可信限為：[0.36，0.52]（獨(dú)角蓮油/kg動(dòng)物)。

3.2 獨(dú)角蓮油微乳的抗腫瘤作用

見(jiàn)表 1。

結(jié)果表明，獨(dú)角蓮油微乳，經(jīng)靜脈給藥，可以顯著降低S180肉瘤的生長(zhǎng)速度，并延長(zhǎng)艾氏腹水癌動(dòng)物的生存時(shí)間。

4 討論

微乳（nanoemulsion）是由水、油、表面活性劑等組成，粒徑為1～150nm、各向同性的透明或半透明的均相分散體系[5]。微乳具有許多其它制劑無(wú)可比擬的優(yōu)點(diǎn)：屬熱力學(xué)穩(wěn)定系統(tǒng)，經(jīng)熱壓滅菌或離心也不能使之分層；工藝簡(jiǎn)單，制備過(guò)程不需特殊設(shè)備；黏度低，可減少注射時(shí)的疼痛；具有緩釋和靶向作用，能夠促進(jìn)所攜帶的藥物蓄積到血管通透性較高的腫瘤組織，減少所攜帶藥物向正常組織分布，降低其不良反應(yīng)。獨(dú)角蓮油不溶于水難以靜脈注射，加之毒性大，口服刺激性嚴(yán)重[6]。因此，微乳是獨(dú)角蓮油比較理想的載體。

表1 獨(dú)角蓮油微乳（DON）靜脈給藥對(duì)小鼠S180抑瘤率及小鼠艾氏腹水癌肉瘤生命延長(zhǎng)率的作用

本實(shí)驗(yàn)制備的獨(dú)角蓮油微乳，粒徑大約100nm。采用靜脈注射給藥途徑，對(duì)S180肉瘤和艾氏腹水癌小鼠模型進(jìn)行抗腫瘤作用的研究，以腫瘤生長(zhǎng)抑制率（TIR）和生命延長(zhǎng)率作為考察指標(biāo)，獨(dú)角蓮油微乳高、中、低劑量組均抑制腫瘤S180的生長(zhǎng)，其中高劑量獨(dú)角蓮油微乳組抑瘤率高達(dá)51.3%，并且各組P＜0.01，三劑量組對(duì)艾氏腹水癌的生長(zhǎng)延長(zhǎng)率最高達(dá)82.9%，各組P＜0.01，可見(jiàn)獨(dú)角蓮油微乳具有顯著地抑制小鼠S180肉瘤的生長(zhǎng)速度，延長(zhǎng)艾氏腹水癌的小鼠的生命的作用。

本實(shí)驗(yàn)顯示獨(dú)角蓮油微乳，大小均勻，實(shí)現(xiàn)了注射液給藥，避免了獨(dú)角蓮對(duì)胃腸道的強(qiáng)烈刺激，獨(dú)角蓮油微乳可以作為抗腫瘤藥物的理想載體[7-8]。獨(dú)角蓮油微乳具有顯著地抗實(shí)體腫瘤作用，也能夠延長(zhǎng)腹水型荷瘤動(dòng)物的生命時(shí)間。因此，獨(dú)角蓮油微乳有可能成為一種新型的抗腫瘤藥物。然而，對(duì)于獨(dú)角蓮油的抗癌活性成分、獨(dú)角蓮油的抗癌作用機(jī)制及制造工藝、其是否與其它抗腫瘤藥物具有協(xié)同抗腫瘤作用等方面，尚待進(jìn)一步研究。

[1]何秀霞.獨(dú)角蓮提取液體外抗宮頸癌Hela細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)凋亡的研究[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2011,22(7):1629-1621.

[2]客蕊.獨(dú)角蓮含藥血清對(duì)腫瘤細(xì)胞的增殖抑制和誘導(dǎo)凋亡作用的研究[J].中醫(yī)藥學(xué)報(bào),2011,39(2):37-40.

[3]段玉敏.獨(dú)角蓮乙醇提取物體外抗腫瘤實(shí)驗(yàn)研究[J].中醫(yī)藥學(xué)報(bào),2010（3）:20.

[4]張婷婷.禹白附的化學(xué)成分與藥理作用研究進(jìn)展[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2010,21(10):2642-2644.

[5]Li D,Yang K,Li JS,et al.Int J Nanomedicine,2012,7:6105-6114.

[6]張紅偉,張振凌,劉博.白附子炮制后新增成分的分離和結(jié)構(gòu)鑒定[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2010,21(5):1197-1198.

[7]王俊平.阿克拉霉素A長(zhǎng)循環(huán)微乳用于腫瘤小劑量化療的研究[J].中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志,2009,29(19):1645-1648.

[8]王俊平.紫杉醇微乳抗腫瘤作用的研究[J].中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)藥雜志,2009,11(2):10-12.