張從敬　張再輝　劉霞　齊靜　孫振華　胡明　劉玉慶　駱延波

摘要：對7日齡健康雛雞免疫前24 h按照分組分別使用復(fù)方多肽核酸溶液和生理鹽水，然后以新城疫克隆30弱毒苗點眼滴鼻，在免疫后7、14天心臟采血，采用HI法檢測新城疫抗體水平。結(jié)果表明：應(yīng)用復(fù)方多肽核酸溶液及新城疫克隆30弱毒苗后各試驗組7天抗體水平明顯升高， 14日齡、21日齡抗體水平經(jīng)t檢驗，試驗組與對照組組間差異顯著（P<0.05），試驗組間差異不顯著（P>0.05）。14日齡時各試驗組外周血T細(xì)胞值與對照組差異顯著（t>1.96，P<0.05）。21日齡時各試驗組外周血T細(xì)胞值與對照組差異極顯著（t>2.57，P<0.01）。研究結(jié)果顯示復(fù)方多肽核酸溶液是一種很有前途的生物免疫增強劑。

關(guān)鍵詞：復(fù)方多肽核酸溶液； 體液免疫；細(xì)胞免疫 ；α-醋酸萘酯酶法； 抗體； T細(xì)胞比例

中圖分類號：S852.5+2文獻標(biāo)識號：A文章編號：1001-4942（2014）05-0115-03

獸用細(xì)胞因子類產(chǎn)品具有作用劑量小、生物活性高、作用迅速、療效確實等優(yōu)點，因此該類產(chǎn)品具有廣闊的市場前景。但目前開發(fā)研制技術(shù)尚未完全成熟，此類產(chǎn)品開發(fā)與研制正處于試驗階段，能在獸醫(yī)臨床大量應(yīng)用的則更少[1，2]。復(fù)方多肽核酸溶液以特殊工藝合成的小分子多肽輔以少量穩(wěn)定劑、防腐劑研制而成。本品生物活性高，具有增強免疫力、提高疫苗免疫效果、緩解疾病臨床癥狀的作用，且具有廣譜提高畜禽免疫力的作用[3]。現(xiàn)將本品對新城疫克隆30弱毒苗免疫增強作用臨床情況匯報如下。

1材料與方法

1.1試驗材料

試驗動物：7日齡健康雛雞200只。

試驗藥品：復(fù)方多肽核酸溶液，批號20120601，規(guī)格為5 mL/瓶，由山東省健牧生物藥業(yè)有限公司（原山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院實驗獸藥廠）提供。

飼料：雛雞全價配合飼料，購于獸藥批發(fā)市場。

雞紅細(xì)胞懸液：本試驗室自制。

化學(xué)試劑：淋巴細(xì)胞分離液、2.5%戊二醛、副品紅溶液、4%亞硝酸鈉溶液、六偶氮副品紅溶液、醋酸萘酯溶液、磷酸鹽緩沖液、甲基綠染色液等，均購自有關(guān)單位或自行配制。

主要儀器：血球計數(shù)板、六位數(shù)分類計數(shù)器、雙目生物顯微鏡等。

新城疫克隆30弱毒苗：購自相關(guān)獸藥銷售商。

1.2試驗方法

1.2.1試驗分組將試驗用雞隨機分成A、B、C、D四個組，A、B為試驗組，C、D為對照組。A組每只雞注射0.2 mL復(fù)方多肽核酸溶液，B組每只雞口服0.2 mL復(fù)方多肽核酸溶液，C組口服0.2 mL生理鹽水，D組注射0.2 mL生理鹽水。

1.2.2試驗方法A、B、C、D四組7日齡雛雞免疫前24 h按照分組分別處理，然后以新城疫克隆30弱毒苗點眼滴鼻，分別在免疫后7、14天心臟采血，采用HI法檢測新城疫抗體水平，并求其平均值。同時參照α-醋酸萘酯酶法（α-ANAE法）[5]進行外周血T、B細(xì)胞計數(shù)，重復(fù)6次，求其百分率平均值，并采用新復(fù)極差檢驗。

2結(jié)果與分析

2.1抗體水平

試驗結(jié)果表明，應(yīng)用復(fù)方多肽核酸溶液及新城疫克隆30弱毒苗后7天各試驗組抗體水平明顯升高。即由表1可以看出14日齡及21日齡抗體水平明顯高于對照組（生理鹽水及新城疫克隆30弱毒苗組），經(jīng)t檢驗，試驗組A、B組與對照組C、D組間差異顯著，試驗組間差異不顯著（P>0.05）。

2.2外周血T細(xì)胞值百分率

從表2中可以看出，A、B、C、D組14日齡雛雞的外周血T細(xì)胞平均值分別為56.467%、53.767%、34.645%、35.366%，經(jīng)統(tǒng)計處理表明，各試驗組T細(xì)胞平均值與對照組相比提高極顯著（t>1.96，P<0.01）。A、B、C、D組21日齡雛雞的外周血T細(xì)胞平均值分別為65.767%、61.334%、38.655%、39.765%，經(jīng)統(tǒng)計表明各試驗組外周血T細(xì)胞平均值與對照組相比提高極顯著（t>2.57，P<0.01）。

3結(jié)論與討論

3.1本試驗抗體水平測定結(jié)果顯示，兩個試驗組與對照組新城疫HI抗體水平差異顯著（P<0.05），證明復(fù)方多肽核酸溶液對新城疫克隆30弱毒苗具有明顯的免疫增強作用。復(fù)方多肽核酸溶液中含有具有生物活性的小分子多肽，當(dāng)其進入機體內(nèi)能夠提高免疫系統(tǒng)的功能，機體對于疫苗毒株反應(yīng)能力大大提高，從而使得試驗組新城疫HI抗體水平較對照組高，且差異顯著。

兩個試驗組與對照組T淋巴細(xì)胞百分率差異極顯著（P<0.01），證明復(fù)方多肽核酸溶液對T細(xì)胞值具有明顯的提高作用。復(fù)方多肽核酸溶液能夠提高免疫系統(tǒng)的功能，而T淋巴細(xì)胞作為免疫細(xì)胞的一種，也得到一定程度的提高，因此試驗組T細(xì)胞百分率較對照組高，且差異顯著。

3.2注射組和口服組抗體水平相差不顯著，證明注射和口服復(fù)方多肽核酸溶液的效果相同。由于復(fù)方多肽核酸溶液含有小分子多肽等成分，通過注射途徑其被機體吸收的速度較快，因此注射組新城疫抗體水平會升高，T細(xì)胞比例升高。小分子多肽分子量較?。ǖ陀?0 000道爾頓），能夠不被胰蛋白酶、糜蛋白酶、胃蛋白酶、DNA酶和RNA酶等分解，因此當(dāng)其進入體內(nèi)時能夠快速被腸道吸收，進入血液循環(huán)，從而作用于免疫系統(tǒng)[5，6]，所以口服組新城疫抗體水平也會升高，T細(xì)胞比例也會升高。注射與口服途徑吸收利用有效成分的速度均較快，因此在臨床上表現(xiàn)為兩者的免疫效果相當(dāng)，差異不顯著，因此該免疫增強劑應(yīng)用前途很廣闊。

3.3復(fù)方多肽核酸溶液具有較高生物活性，其作用機理與化學(xué)類免疫增強劑（例如鹽酸左旋咪唑等）存在較大差異。復(fù)方多肽核酸溶液中多肽等為動物機體內(nèi)正常存在的物質(zhì)，正常狀態(tài)下其濃度較低，當(dāng)濃度提高后，其生物活性表現(xiàn)相當(dāng)顯著，能夠在較短時間內(nèi)提高機體免疫應(yīng)答反應(yīng)的強度及速度[6]，因此生物活性優(yōu)勢較傳統(tǒng)化學(xué)類免疫增強劑顯著，是極具有發(fā)展前途的生物免疫增強劑。endprint

參考文獻：

[1]高玲美，牛鐘相，丁淑燕.動物細(xì)胞因子研究進展[J]. 動物醫(yī)學(xué)進展，2003，24（4）：46-48.

[2]王建梅，楊盟，武曉虎，等.氟化物對動物細(xì)胞因子表達及功能的影響[J].中國畜牧獸醫(yī)，2012，39（7）：162-165.

[3]李繼慶，侯國生，張再輝，等.復(fù)方多肽核酸溶液的研制及其毒理學(xué)研究[J].山東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，45（5）：108-110.

[4]劉玉斌，茍仕金主編.動物免疫學(xué)實驗技術(shù)[M].長春：吉林科學(xué)技術(shù)出版社，1989.

[5]陳旭衍，侯亞義.魚類細(xì)胞因子研究進展[J].水生生物學(xué)報，2004，28（6）：668-673.

[6]林淑玲， 李瑞芹，邵文晶，等.復(fù)合核苷肽溶液促進肉雞紅細(xì)胞免疫應(yīng)答的研究[J]. 山東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011（12）：88-90.（上接第114頁）0.6、1.8、0.6、40.0、16.0 元/kg計算，則對照組飼料成本為1.87元/kg，試驗Ⅳ組飼料成本為1.68元/kg，即每千克飼料成本降低0.19元，約降低10.2%。對照組料肉比為3.51，試驗Ⅳ組料肉比為3.27，試驗Ⅳ組和對照組相比每生產(chǎn)1 kg兔肉少消耗飼料0.24 kg，即用金針菇菌渣代替麩皮，每生產(chǎn)1 kg兔肉可增值1.07元。用金針菇菌渣作飼料具有較好的養(yǎng)殖效益和環(huán)保效應(yīng)。

參考文獻：

[1]Shehata S M， El Shimi S A， Elkattan M H， et al. Integrated waste management for rural development in Egypt[J]. Journal of Environmental Science and Health， 2005， 39（2）：341-349.

[2]王家富，莫發(fā)云，楊國民，等. 菌糠對育肥兔增重效果的研究[J].中國養(yǎng)兔，2007（6）：6-8.

[3]宋道禎，王國慶，田風(fēng)榮，等. 棉籽殼菌糠對母兔繁殖性能影響[J].飼料研究，1999（4）：3-4.

[4]成娟麗，張福元.新型飼料資源——菌糠飼料的開發(fā)應(yīng)用進展[J].飼料博覽，2006（7）：35-37.

[5]李進杰，蔣明琴. 食用菌糠對生長期肉兔增重的影響[J].中國養(yǎng)兔，2007（4）：9-10.

[6]張堅，陳鐵橋，肖兵南.香菇木屑菌糠中5種飼用添加酶活性的測定與分析[J].中國飼料，2007（2）：32-38.

[7]劉瑩瑩，張堅，王紅兵，等.菌糠酶提取與制備方法研究[J].湖南農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010（1）：88-89，92.

[8]趙曉麗，陳智毅，劉學(xué)銘.菌糠的高效利用研究進展[J].中國食用菌，2012， 31（2）：1-3.山 東 農(nóng) 業(yè) 科 學(xué)2014，46（5）：118～121Shandong Agricultural Sciences山 東 農(nóng) 業(yè) 科 學(xué)第46卷第5期房保海，等：基于量子點標(biāo)記技術(shù)的雞新城疫病毒sFLISA檢測技術(shù)研究endprint