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        復合維生素、維生素E對高同型半胱氨酸血癥小鼠抗氧化酶活性及GATA-3的影響

        2014-07-18 11:53:17賀,王丹,梁艷,戴
        武警醫(yī)學 2014年1期
        關鍵詞:半胱氨酸血癥氧化應激

        邰 賀,王 丹,梁 艷,戴 紅

        復合維生素、維生素E對高同型半胱氨酸血癥小鼠抗氧化酶活性及GATA-3的影響

        邰 賀1,王 丹2,梁 艷2,戴 紅1

        目的觀察復合維生素、維生素E對高同型半胱氨酸(Hcy)血癥小鼠血清中GSH-PX、SOD及GATA-3的影響。方法選取ICR小鼠50只隨機分為5組,給4組腹腔注射Hcy,其中3組腹腔分別注射復合維生素、維生素E、復合維生素+維生素E,空白對照組注射相同量的生理鹽水,連續(xù)處理5 d后測定血清中GSH-PX、SOD活性及GATA-3的表達量。結果Hcy組GSH-PX、SOD活性與GATA-3顯著低于空白對照組(P<0.01),復合維生素、維生素E對抗組中GSH-PX、SOD活性與GATA-3顯著高于Hcy組(P<0.01)。結論復合維生素、維生素E能通過提高Hcy血癥小鼠血清GATA-3與GSH-PX、SOD活性,提高高Hcy血癥患者抗氧化與抗凋亡能力。

        復合維生素;維生素E;高同型半胱氨酸血癥;GSH-PX;SOD;GATA-3

        同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)是一種含硫氨基酸的代謝產物。血漿中Hcy水平升高被稱為高Hcy血癥,能造成氧化應激狀態(tài),使血管內皮細胞發(fā)生損傷,是很多血管疾病的獨立危險因素[1]。高Hcy血癥與相關生物酶的基因缺陷有關,并可導致抗氧化酶活性降低[2]。以往大量研究表明,在妊娠期高血壓患者中血清Hcy升高導致GSH-PX與SOD活性降低[3],并且應用維生素E能很好地提高GSH-PX與SOD活性[4]。高Hcy血癥還與多種維生素缺乏有關[2],因此能否通過補充復合維生素降低血清Hcy濃度,提高抗氧化酶活性尚未見相關研究報道。GATA蛋白家族屬于Ⅳ型鋅指蛋白。迄今為止,該家族共發(fā)現(xiàn)有6個成員(GATA-1~GATA-6)。GATA-3對Th1細胞的發(fā)育起抑制作用,可能通過抑制IFN-γ、IL-12的信號傳導來抑制Th1細胞發(fā)育從而促進細胞增生,而Th1細胞分泌的細胞因子能促進細胞發(fā)生凋亡[5]。以往研究表明,在妊娠期高血壓患者血清GATA-3濃度可降低[6],復合維生素與維生素E是否能升高GATA-3濃度,降低Hcy濃度,從而抑制過氧化反應也未見相關研究報道。為此,筆者進行了此項研究,發(fā)現(xiàn)復合維生素、維生素E能提高Hcy血癥患者的抗氧化能力和抗凋亡能力。

        1 材料與方法

        1.1 材料

        1.1.1 實驗動物 50只ICR雌性小鼠均由北京維通利華實驗動物技術有限公司提供,周齡6~8周,體重26~30 g。

        1.1.2 主要試劑 維生素E、Hcy均為Sigma公司產品;復合維生素為德國拜耳醫(yī)藥保健公司產品(配方見表 1);GSH-PX、SOD試劑盒均為南京建成生物科技公司產品;Hcy試劑盒為美國Diazyme公司產品;GATA-3 ELISA法檢測試劑盒購自上海西唐生物科技公司。

        1.2 方法

        1.2.1 實驗動物的分組 將50只雌性小鼠隨機分為A、B、C、D、E 5組,每組10只,人工控溫 20~26 ℃,12 h光照,12 h黑暗,顆粒飼料喂養(yǎng),自由飲水取食。

        1.2.2 實驗動物的處理 所有實驗試劑均采取腹腔注射,A組:高同型半胱氨酸[16 μmol/(kg·d)];B組:復合維生素[50 mg/(kg·d)]+高同型半胱氨酸[16 μmol/(kg·d)];C組:維生素E[5 μmol/(kg·d)]+高同型半胱氨酸[16 μmol/(kg·d)];D組:維生素E[5 μmol/(kg·d)]+復合維生素[50 mg/(kg·d)]+高同型半胱氨酸[16 μmol/(kg·d)];E組:相同體積的生理鹽水,連續(xù)處理5 d,末次給藥后4 h腹腔注射肝素(500 U/只),斷頭處死小鼠,腹腔經脈取血,注入玻璃試管內,靜置10 min,以3000 r/min離心,10 min,分離血清-70 ℃保存待測,按試劑盒說明測定GSH-PX、SOD活性與Hcy、GATA-3。

        1.2.3 統(tǒng)計學處理 采用SPSS10.0軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析,數(shù)據(jù)統(tǒng)計學分析方法采用方差分析。

        2 結 果

        2.1 GSH-PX、SOD活性 結果見表2。A組中GSH-PX活性明顯低于E組(P<0.01),B、C、D組中GSH-PX活性明顯低于E組(P<0.01),B組與C組之間無統(tǒng)計學差異(P>0.05)而低于D組(P<0.01)。A組中SOD活性明顯低于E組(P<0.01),B、C、D組中SOD活性明顯低于E組(P<0.01),B組活性明顯高于C組(P<0.01)而低于D組(P<0.01)。

        2.2 Hcy、GATA-3濃度 結果見表3。A組中Hcy濃度明顯高于E組(P<0.01),B、C、D組中Hcy濃度明顯高于E組(P<0.01),B組濃度明顯低于C組(P<0.01)而高于D組(P<0.01)。A組中GSTA-3濃度明顯低于E組(P<0.01),B、C、D組中GSTA-3濃度明顯低于E組(P<0.01),B組濃度明顯高于C組(P<0.01)而低于D組(P<0.01),GATA-3濃度與Hcy濃度之間為負相關關系(r=-0.531,P= 0.035)。

        表1 每片復合維生素成分 (mg)

        表2 各組血清中GSH-PX、SOD活性比較 (n=10;

        注:① 與A組比較,P<0.01;②與B組比較,P<0.01;③與C組比較,P<0.01;④與D組比較,P<0.01

        表3 各組血清中Hcy、GATA-3濃度比較 (n=10;

        注:與A組比較,①P<0.01;②與B組比較,P<0.01;③與C組比較,P<0.01;④與D組比較,P<0.01

        3 討 論

        Hcy是蛋氨酸代謝的中間產物。高Hcy血癥是導致心血管疾病的一個獨立危險因素,當Hcy水平升高時容易被氧化為同型半胱氨酸化合物,同時產生過氧化氫和超氧陰離子自由基,損傷血管內皮細胞[7]。氧化應激的毒性效應產生大量的氧化中間產物,如超氧陰離子、過氧化氫、羥基等,這些物質與脂質、蛋白質、DNA結合產生過氧化反應,破壞細胞與組織的結構與功能,降低抗氧化酶的活性[8]。

        GSH-PX是機體內廣泛存在的一種重要的催化過氧化氫分解的酶,它可特異性催化還原型谷胱甘肽(GSH)對過氧化氫的還原反應,起到保護細胞膜結構和功能完整性的作用。GSH與超氧陰離子自由基(O-2)反應可產生O2;GSH-PX對其他抗氧化劑具有調節(jié)作用[9];SOD是抗氧化酶系統(tǒng)的重要組成部分,也是機體內清除自由基的第一線防衛(wèi),它是一種帶負電荷的金屬蛋白酶,能催化超氧陰離子發(fā)生歧化反應,從而阻斷和防止超氧陰離子所引發(fā)的一系列自由基連鎖反應的加劇[10],因此兩酶的活性反應了組織抗氧化能力。本實驗結果顯示,腹腔注射Hcy后,其血清濃度明顯高于對照組,且降低了GSH-PX、SOD活性,進一步說明Hcy能降低機體抗氧化能力,與以往實驗結果相同[2];而給予維生素E與復合維生素對抗后兩酶的活性明顯升高,且血清Hcy濃度明顯降低,說明抗氧化劑量能提高機體抗氧化能力,并能很好地清除血清中氧化應激物質,與以往實驗結果相同[11]。本實驗中復合維生素也能很好地提高抗氧化酶活性,可能與其中富含多種抗氧化物質有關,進一步證實了補充多種維生素后能很好地降低血清Hcy濃度[2]。聯(lián)合使用維生素E與復合維生素后所達到的效果明顯優(yōu)于單獨使用兩種藥物。

        GATA-3可優(yōu)先激活IL-4基因,進一步調節(jié)IL-5和IL-13的表達,抑制炎性反應的發(fā)生,進一步抑制細胞發(fā)生凋亡;主要通過TCR信號傳導途徑,也可以通過IL-4/STAT-6信號途徑,誘導GATA-3的表達,而后者是Th2細胞增殖的主要途徑[12]。本實驗結果顯示,隨著Hcy濃度的逐漸升高,其GATA-3表達量逐漸降低,且兩者呈負相關給予維生素E與復合維生素可抑制氧化反應,使其濃度逐漸升高。以往的研究只針對妊娠高血壓患者血清Hcy升高,而GATA-3降低[3,6],可能與Hcy升高導致體內氧化應激狀態(tài)的改變,促進細胞發(fā)生凋亡有關,具體作用機制還需進一步探索。

        本實驗進一步證實,高Hcy血癥可導致體內氧化應激狀態(tài)改變,降低體內抗氧化酶活性,口服一定量的抗氧化藥能降低其濃度,并很好地提升抗氧化酶活力,說明補充維生素E與復合維生素可為孕期保健應用提供理論基礎,但要應用于孕婦還需要大量的實驗研究與臨床觀察。

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        (2013-05-20收稿 2013-10-16修回)

        (責任編輯 岳建華)

        EffectsofelevitandvitaminEonactivitiesofantioxidaseandGATA-3inHcymice

        TAI He1, WANG Dan2, LIANG Yan2, and DAI Hong1.
        1. Department of Oncology, Liaoning Provincial Corps Hospital of Chinese People’s Armed Police Forces, Shenyang 110034, China; 2. Department of Pharmacy, General Hospital of Chinese People’s Armed Police Forces, Beijing 100039, China

        ObjectiveTo study the effects of elevit and vitamin E on activities of antioxidase and GATA-3 in Hcy mice.Methods50 ICR mice were randomly divided into five groups. Homocysteine was intraperitoneally injected into four groups of mice, and three groups of them

        intraperitoneal injection of elevit, vitE, elevit+vitE. The control group received intraperitoneal injection of sodium chloride. Injections continued for 5 days, then the activities of GSH-PX and SOD and GATA-3 were detected.ResultsThe activities of GSH-PX, SOD and GATA-3 in Hey group were lower than those in the control group(P<0.01), The activities of GSH-PX, SOD and GATA-3 in elevit and vitE opposed groups were higher than those in Hey group (P<0.01).ConclusionsElevit and vitE can increase the ability of anti-oxidant and anti-apoptosis through increasing the GATA-3 and the activities of GSH-PX and SOD.

        elevit; vitamin E; hyperhomocysteinemia; GSH-PX; SOD; GATA-3

        邰 賀,碩士研究生,醫(yī)師,E-mail: Taihe83@126.com

        1. 110034沈陽,武警遼寧總隊醫(yī)院腫瘤科;2. 100039北京,武警總醫(yī)院藥劑科

        王 丹, E-mail: www.wq3000@163.com

        R714

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