肖 佩,張翠玲,孫 黎,王樹鶴

雌激素受體和17β-羥類固醇脫氫酶1在子宮內(nèi)膜息肉中的表達(dá)及其意義

肖 佩1,張翠玲2,孫 黎3,王樹鶴4

目的研究雌激素受體(estrogen receptor，ER)和17β-羥類固醇脫氫酶1(17β-HSD1)在子宮內(nèi)膜息肉( endometrial polyps，EPs)中的表達(dá)情況，進(jìn)一步從分子水平闡明EPs的發(fā)病機(jī)制。方法選擇EPs患者47例，其中，息肉組織作為病例組，同一患者宮腔內(nèi)遠(yuǎn)離息肉組織的正常內(nèi)膜作為對(duì)照1組，同時(shí)選擇50例行宮腔鏡檢查的婦女的正常子宮內(nèi)膜組織作為對(duì)照2組。采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)ER和17β-HSD1在各組的表達(dá)情況并進(jìn)行比較。結(jié)果ER在EPs中表達(dá)的陽性率是80.9%，17β-HSD1在EPs中表達(dá)的陽性率是76.6%，二者在EPs中表達(dá)均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。ER和17β-HSD1在EPs中的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.619，P<0.01)。結(jié)論ER和17β-HSD1在EPs中的過度表達(dá)可能是EPs發(fā)生、發(fā)展的原因。

子宮內(nèi)膜息肉；雌激素受體；17β-羥類固醇脫氫酶1

子宮內(nèi)膜息肉( endometrial polyps，EPs) 是突出于宮腔內(nèi)的單發(fā)或多發(fā)的結(jié)節(jié)狀腫物，它雖然是育齡婦女及絕經(jīng)后婦女的常見疾病，但是目前EPs的發(fā)病機(jī)制尚不明確，多數(shù)臨床醫(yī)師對(duì)于EPs所導(dǎo)致的癥狀也僅局限在月經(jīng)改變方面[1]。此外，EPs較易復(fù)發(fā)，尚無公認(rèn)確切有效的預(yù)防措施，因此研究EPs的發(fā)病機(jī)制具有重要的臨床意義。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 標(biāo)本來源 選擇2011-07至2012-07在北京軍區(qū)總醫(yī)院婦科行EPs切除術(shù)的患者47例作為病例組，同時(shí)取該患者遠(yuǎn)離息肉的正常子宮內(nèi)膜組織47例作為對(duì)照1組，同期選擇在該院行宮腔鏡檢查子宮內(nèi)膜組織正常的婦女50例作為對(duì)照2組。病例組與對(duì)照2組在年齡、孕次、產(chǎn)次方面構(gòu)成比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差別。所有標(biāo)本均來自絕經(jīng)前婦女，年齡23～48歲，平均(35.6±3.74)歲，所有患者均在月經(jīng)來潮后第3～7天內(nèi)行宮腔鏡檢查術(shù)和宮腔鏡電切術(shù)。所有病例均在宮腔鏡下取標(biāo)本，然后通過顯微鏡來觀察子宮內(nèi)膜的形態(tài)，通過病理區(qū)別EPs和正常子宮內(nèi)膜。所有的患者均無子宮肌瘤、子宮內(nèi)膜異位癥、子宮腺肌癥、子宮內(nèi)膜癌、宮頸癌、卵巢腫瘤等合并癥，無其他惡性疾病及嚴(yán)重并發(fā)癥。

1.1.2 主要試劑 羊抗兔ER抗體、羊抗兔17β-HSD1抗體、DAB顯色試劑盒、過氧化酶免疫組化染色試劑盒、辣根酶標(biāo)記的鏈酶親和素均購自北京博奧森生物技術(shù)有限公司。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本制備方法 切除的組織立即常規(guī)10%甲醛溶液固定，并送入病理科，再用不同梯度的乙醇對(duì)其脫水，二甲苯透明20 min，最后進(jìn)行石蠟包埋，將標(biāo)本制成石蠟包塊。

1.2.2 免疫組化方法 常規(guī)石蠟切片HE染色，核實(shí)病理組織學(xué)診斷。ER和17β-HSD1蛋白的染色方法按S-P試劑盒說明書步驟進(jìn)行，0.01 mol/L枸櫞酸緩沖液(pH 6.0)微波18 min行抗原修復(fù)，羊抗兔ER抗體、羊抗兔17β-HSD1抗體4 ℃過夜。經(jīng)DAB顯色后，蘇木精復(fù)染，中性樹膠封片。陰性對(duì)照采用 0.01 mol/LPBS(pH=7.4)液體代替一抗，其他步驟不變。

1.2.3 染色結(jié)果判定方法 采用雙盲法，由2名病理醫(yī)師分別閱片。采用半定量法，ER和17β-HSD1在胞質(zhì)和胞核均有表達(dá)，隨機(jī)觀察10個(gè)高倍鏡視野，放大倍數(shù)100倍，胞核按每高倍鏡視野陽性細(xì)胞數(shù)百分比記分:陽性細(xì)胞數(shù)<5%為0分，5%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，>75%為4分。胞質(zhì)按著色強(qiáng)度記分：染色呈淡黃色者記為1分；呈黃色者記為2分；呈棕黃色者記為3分。上述兩種記分的乘積即為陽性強(qiáng)度：0分為陰性(-)，1～4分為弱陽性(+)，5～8 分為中度陽性(++)，9～12分為強(qiáng)陽性 (+++)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件,實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用χ2檢驗(yàn)及Spearman秩相關(guān)分析，P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

ER和17β-HSD1在病例組中的表達(dá)呈陽性(圖1A和圖2A)，并且在細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中均有表達(dá)，但是二者在對(duì)照1組和對(duì)照2組中的表達(dá)均呈陰性(圖1B、C和圖2B、C)。ER和17β-HSD1在病例組中的表達(dá)均明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2ER=61.50，P<0.05；χ217β-HSD1=51.82，P<0.05，表1)，但是ER和17β-HSD1在兩對(duì)照組中的表達(dá)并無差別(χ2ER=0.006，P>0.05,χ217β-HSD1=0.22，P>0.05)。ER和17β-HSD1在病例組中的表達(dá)均比對(duì)照組中高，經(jīng)Spearman等級(jí)相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)，ER和17β-HSD1在病例組中表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.619，P<0.01)。

圖1 ER在子宮內(nèi)膜中的表達(dá)(HE，×100)

圖2 17β-HSD1在子宮內(nèi)膜中的表達(dá)(HE，×100)

表1 ER和17β-HSD1在子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)情況

3 討 論

EPs是最常見的子宮內(nèi)膜良性病變之一，由腺體及間質(zhì)組成，是子宮內(nèi)膜基底層過度增生形成的一種瘤樣病變，可發(fā)生在青春期后的任何年齡。近年來，隨著陰道超聲和宮腔鏡的廣泛應(yīng)用，EPs發(fā)病率呈明顯上升趨勢(shì)，引起眾多學(xué)者的關(guān)注。EPs的發(fā)病率為7.8%～41.0%[2]，好發(fā)于 35歲以上女性，隨著年齡的增長其發(fā)病率呈增高趨勢(shì)。EPs 多為良性病變，但亦可發(fā)生惡變。Costa-Paiva等[3]通過大樣本統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，EPs 的惡變率約為 4.1%。雖然EPs是很常見的臨床疾病，治療相對(duì)簡(jiǎn)單，但易復(fù)發(fā)，發(fā)病機(jī)制及病因迄今尚未達(dá)成共識(shí)，因此目前尚無良好的預(yù)防措施。大部分學(xué)者研究認(rèn)為，子宮內(nèi)膜局部的雌激素水平及雌激素受體水平過高可能與EPs的形成有關(guān)系[4]。

有研究發(fā)現(xiàn)，EPs患者多合并有不孕癥、PCOS、子宮內(nèi)膜異位癥及子宮腺肌癥等，故認(rèn)為 EP 與上述疾病的發(fā)病機(jī)制相似，均為雌激素依賴性疾病[5,6]。本實(shí)驗(yàn)正是以此為出發(fā)點(diǎn)，探討EPs是否與子宮內(nèi)膜局部高水平的雌激素有關(guān)，但是直接測(cè)定子宮內(nèi)膜組織中的雌激素濃度難度很大，因此，本實(shí)驗(yàn)選擇影響局部雌激素代謝及功能的兩個(gè)相關(guān)因素，即ER和17β-HSD1。

ER的配體是雌激素，當(dāng)子宮內(nèi)膜局部表達(dá)過多的ER與雌激素結(jié)合后，會(huì)導(dǎo)致子宮內(nèi)膜細(xì)胞內(nèi)不同基因轉(zhuǎn)錄，表達(dá)過多的導(dǎo)致子宮內(nèi)膜細(xì)胞增殖的產(chǎn)物[7]，比如細(xì)胞周期素D1、c-MYC、血管內(nèi)皮生長因子等，最終結(jié)果是子宮內(nèi)膜細(xì)胞過度增殖。另外，還有研究提示，雌激素受體還可以調(diào)節(jié)啟動(dòng)子序列中富含GC的基因的表達(dá)[8]。由此分析，子宮內(nèi)膜局部有高水平的雌激素受體，導(dǎo)致子宮內(nèi)膜細(xì)胞內(nèi)的基因轉(zhuǎn)錄發(fā)生變化，促進(jìn)細(xì)胞增生的蛋白、因子等產(chǎn)物增加，從而會(huì)出現(xiàn)子宮內(nèi)膜細(xì)胞的過度增生，進(jìn)而就有可能會(huì)發(fā)展為EPs。

17β-HSD1是17β-HSDs的成員之一，它催化雌酮C17位置上的酮基轉(zhuǎn)化為醇基，使低生物活性的雌酮轉(zhuǎn)化為高生物活性的雌二醇，是一個(gè)催化還原反應(yīng)的酶。該酶是雌二醇合成最后步驟的關(guān)鍵酶，也是直接調(diào)節(jié)雌二醇在局部組織中的受體前水平的重要的酶。17β-HSD1在雌激素的轉(zhuǎn)化中起著非常重要的作用，由它催化的底物包括：雌二醇 (E2)、雌酮、去氫表雄酮(DHEA)、二氫睪酮(DHT)和雄甾烯二酮(androstenedione，4-dione)等。而17β-HSD1的催化雌酮活化的效率最高。17β-HSD1基因的啟動(dòng)子含有典型的GC豐富區(qū)[9]，因此雌激素受體陽性的細(xì)胞中17β-HSD1的表達(dá)可能會(huì)增加。17β-HSD1主要分布在卵巢組織、胎盤組織和乳腺組織中，其表達(dá)率在 60%的惡性組織中增加顯著，而且其與細(xì)胞凋亡直接相關(guān)。國外學(xué)者在研究乳腺癌細(xì)胞 MCF-7和T47D的實(shí)驗(yàn)中證實(shí)，用siRNA抑制17β-HSD1的表達(dá)之后，活化的雌激素明顯減少，細(xì)胞增殖下降[10]，表明17β-HSD1參與了雌激素依賴性疾病的發(fā)生。另有研究發(fā)現(xiàn)，孕激素可提高17β-HSD1活性和促使mRNA的表達(dá)升高[11]。

本研究發(fā)現(xiàn)，ER和17β-HSD1在EPs中表達(dá)陽性率明顯高于對(duì)照組，且二者在對(duì)照組中的表達(dá)并無差異。進(jìn)一步經(jīng)Spearman秩相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)，ER和17β-HSD1在EPs中表達(dá)呈正相關(guān)。這可能由于EPs的發(fā)病機(jī)制受雌、孕激素受體調(diào)節(jié)，雌激素是ER的配體，二者結(jié)合后不但調(diào)控子宮內(nèi)膜局部的基因表達(dá)，還調(diào)節(jié)啟動(dòng)子序列中富含GC的17β-HSD1基因的表達(dá)，從而生成更多的高活性的雌激素，在二者的共同作用下，局部的子宮內(nèi)膜細(xì)胞增生，逐漸形成息肉。因此ER和17β-HSD1可能在EPs的發(fā)生、發(fā)展中起到較為重要的作用。

[1] 王樹鶴. 子宮內(nèi)膜息肉研究進(jìn)展[J]. 武警醫(yī)學(xué)，2012, 23(10): 829-832.

[2] Lee S C，Kaunitz A M，Sanchez-Ramos L，etal． The onco-genic potential of endometrial polyps: a systematic review and meta-analysis[J]． Obstet Gynecol，2010, 116 (5): 1197-1205.

[3] Costa-Paiva L, Godoy C E Jr, Antunes A Jr,etal． Risk of malignancy in endometrial polyps in premenopausal and postmenopausal women according to clinicopathologic characteristics[J]．Menopause，2011，18( 12) : 1278-1282.

[4] Gul A, Ugur M, Iskender C,etal. Immunohistochemical expression of estrogen and progesterone receptor in endometrial polyps and its relationship tocl-inical parameters [J]. Arch Gynecol Obstet，2010，281(3): 479-483.

[5] Indraccolo U，Barbieri F． Relationship between adenomy-osis and uterine polyps[J]． Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol，2011，157( 2) : 185-189.

[6] Munro M G，Critchley H O，F(xiàn)raser I S． The FIGO systems for nomenclature and classification of causes of abnormal uterine bleeding in the reproductive years: who needs them[J]. Am J Obstet Gynecol，2012，207 ( 4 ) : 259-265.

[7] 賈弘褆，馮作化，屈 伸,等. 生物化學(xué)與分子生物學(xué)[M]. 2版. 北京：人民衛(wèi)生出版社，2010：440.

[8] 苗知春，羅志勇. 雌激素受體信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的研究[J].生命的化學(xué)，2010, 30(6)：854-858.

[9] 倪 鑫，唐曉露. 17β-羥基類固醇脫氫酶[J]. 生理科學(xué)進(jìn)展，2002, 33(2), 172-175.

[10] Aka JA, Mazumdar M, Chen C Q,etal. 17beta-Hydroxysteroid Dehy-drogenase Type 1 Stimulates Breast Cancer by Dihydrotestosterone Inactivation in Addition to Estradiol Production [J]. Mol Endocrinol, 2010, 24(4): 832-845.

[11] Xu B, Kitawaki J, Koshiba H,etal. Differential effects of progestogens, by type and regimen, on estrogen-metabolizing enzymes in human breast cancer cells [J]. Maturitas, 2007,56(2):142.

(2013-09-03收稿 2013-10-18修回)

(責(zé)任編輯 武建虎)

Expressionandsignificanceofestrogenreceptorand17beta-hydroxysteroiddehydrogenase1inendometrialpolyps

XIAO Pei1, ZHANG Cuiling2，SUN Li3, and WANG Shuhe4.
1. Clinical School of Anhui Medical University，Hefei 230000，China; 2．Department of Obstetrics and Gynecology，Chinese Medicine Hospital of Linyi City, Linyi 276003, China; 3．Department of Gynecology and Obstetrics, Hefei Municipal First People’s Hospital, Hefei 230000, China; 4. Department of Gynecology and Obstetrics, Beijing Military Command General Hospital, Beijing 100700, China

ObjectiveTo study the expressions of ER and 17β-HSD1in endometrial polyps, and to clarify the pathogenesis of endometrial polyps in molecular level.MethodsEndometrial polyps from 47 patients were taken as the study group; at the same time, normal endometrial tissue far from endometrial polyps were taken from the same 47 patients as the control group 1 and normal endometria from 50 subjects were taken as the control group 2 who underwent hysteroscopy. Immunohistochemical examination was conducted to detect ER and 17β-HSD1expressions which were compared between the groups.ResultsThe positive expression rate of ER in polyps group was 80.9%, which was 76.6% for 17β-HSD1. The rates were higher than those of the control group(P<0.01). The expressions of ER and 17β-HSD1were related to the risk of endometrial polyps(r=0.619，P<0.01).ConclusionsExcessive expressions of ER and 17β-HSD1in premenopausal endometrial polyps may be the cause of occurrence and development of endometrial polyps.

endometrial polyps；estrogen receptor; 17 beta-hydroxysteroid dehydrogenase 1

肖 佩，碩士研究生，E-mail: xiaopei150520@163.com

1. 230000合肥,安徽醫(yī)科大學(xué)北京軍區(qū)總醫(yī)院臨床學(xué)院；2. 276003，山東省臨沂市中醫(yī)醫(yī)院婦產(chǎn)科；3. 230000，安徽省合肥市第一人民醫(yī)院婦產(chǎn)科； 4. 100700，北京軍區(qū)總醫(yī)院婦產(chǎn)科

王樹鶴，E-mail：haotongzhi8@sina.com

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