石俊婷,趙 凌,蔡雙兵,簡從相

IBP對口腔鱗癌增殖作用的體內(nèi)研究

石俊婷,趙 凌,蔡雙兵,簡從相

目的 觀察體內(nèi)IRF-4結(jié)合蛋白(IBP)對口腔鱗癌(OSCC)細胞Tca8113生長的影響。方法 利用先前構(gòu)建的高表達IBP的OSCC細胞株(Tca8113/IBP)及其空質(zhì)粒對照組細胞株(Tca8113/C1)進行裸鼠成瘤試驗,采用活體成像技術(shù)檢測兩組裸鼠接種瘤體的綠色螢光蛋白(GFP)信號。在處死裸鼠后,將接種的腫瘤組織取出并測量體積。結(jié)果 Tca8113/IBP組裸鼠顯示的GFP信號區(qū)域較Tca8113/C1組顯著增大,腫瘤體積也較Tca8113/C1組顯著增大(P<0.05)。結(jié)論 上調(diào)IBP表達在裸鼠體內(nèi)能促進OSCC細胞的增殖。

IRF-4結(jié)合蛋白；口腔；鱗癌；增殖；裸鼠

口腔鱗狀細胞癌(OSCC)位居人類十大惡性腫瘤第6位,是全世界常見腫瘤之一。目前,全世界每年有約50萬新增病例,并呈逐年升高的趨勢。盡管手術(shù)治療、化療和放療技術(shù)都有所發(fā)展,但由于OSCC的病因及發(fā)病機制不甚清楚,OSCC 的 5 年生存率僅為50%～70%[1]。因此,深入探討OSCC發(fā)生發(fā)展的分子機制,對OSCC的診斷、治療和預(yù)防具有重要的意義。近來有學者發(fā)現(xiàn),IRF-4結(jié)合蛋白(IBP)高表達于結(jié)腸癌及乳腺癌中并發(fā)揮重要作用[2]。最近的研究顯示,OSCC組織中IBP高表達,IBP的表達與OSCC大小、臨床TNM分期及是否發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移呈正相關(guān),而與其分化水平呈負相關(guān)[3]。本課題組前期采用脂粒轉(zhuǎn)染的方法構(gòu)建了高表達IBP的OSCC細胞株Tca8113/IBP及其空質(zhì)粒對照組細胞株和Tca8113/C1。采用MTT試驗及克隆形成實驗證實,在體外上調(diào)IBP表達能促進OSCC細胞的增殖[4],但IBP在體內(nèi)對OSCC增殖作用還未見相關(guān)報道。

1 材料與方法

1.1 細胞株 空質(zhì)粒對照組細胞株(Tca8113/C1)及高表達IBP的OSCC細胞株(Tca8113/IBP)由先前的研究建立并保存,并培養(yǎng)于含10% FBS的RPMI 1640中。

1.2 實驗動物 4周齡的清潔級Balb/C雌性裸鼠,由第三軍醫(yī)大學實驗動物中心提供,體重18～20 g,合格證號：2002003。裸鼠在密閉無菌環(huán)境飼養(yǎng),恒溫18～22 ℃,恒濕50%～80%,自由攝入水及無菌標準飼料。飼養(yǎng)場地：第三軍醫(yī)大學實驗動物中心。

1.3 實驗動物分組 將12只雌性裸鼠按每組6只隨機分為兩組：Tca8113/C1組：給裸鼠接種Tca8113/C1細胞；Tca8113/IBP組：給裸鼠接種Tca8113/IBP細胞。

1.4 細胞懸液的準備 分別取對數(shù)生長期的Tca8113/IBP和 Tca8113/C1細胞,用0.25%胰酶消化成單細胞懸液,調(diào)整細胞密度為2×107/ml,用PBS重懸后于冰上放置。

1.5 實驗動物的接種 (1)超凈臺用紫外燈照射30 min,酒精擦拭臺面；培養(yǎng)籠用消毒藥水擦,其他用具均經(jīng)高壓滅菌處理。(2)用6號針頭注射器在消毒好的裸鼠左側(cè)腹股溝皮下,按照動物分組分別接種Tca8113/IBP或 Tca8113/C1細胞懸液各0.1 ml(細胞總量約2×106)。(3)隔日觀察裸鼠的生長狀態(tài)及腫瘤生長情況,于接種后的第28 d在活體成像儀 (Multispectral,Carestream Health,NY)上觀察腫瘤的大小。

1.6 腫瘤組織體積測量 在活體成像觀察后,采用斷頸法處死裸鼠,將腫瘤小心剝出,測量各組腫瘤的體積,用以下公式計算腫瘤的體積[5]：腫瘤體積= 0.5×長×寬2。

2 結(jié)果

2.1 上調(diào)IBP表達對Tca8113口腔鱗癌細胞成瘤瘤體的GFP信號的影響 在接種4 w后,采用活體成像技術(shù)觀察兩組裸鼠接種的瘤體的GFP信號,影像結(jié)果提示Tca8113/IBP組裸鼠顯示的GFP信號區(qū)域較Tca8113/C1組大(圖1),但由于GFP信號不能準確的比較兩組之間的大小的差異,只能初步觀察趨勢,具體的大小需手術(shù)切除腫瘤組織后精確的測量。

圖1 上調(diào)IBP表達對口腔鱗癌細胞成瘤的瘤體GFP信號影響

2.2 上調(diào)IBP表達對Tca8113口腔鱗癌細胞成瘤腫瘤體積的影響 在檢測兩組裸鼠接種瘤體的GFP信號后處死裸鼠,將接種的腫瘤組織取出并測量體積顯示,Tca8113/IBP組裸鼠的腫瘤體積為(50±18)mm3,而Tca8113/C1組裸鼠的腫瘤體積為(28±9)mm3,Tca8113/IBP組裸鼠的腫瘤體積較Tca8113/C1組顯著增大(P<0.05,圖2)。

圖2 上調(diào)IBP表達對口腔鱗癌細胞成瘤體積的影響

3 討論

OSCC是全世界常見腫瘤之一,約占全身惡性腫瘤的2%～3%,占口腔頜面部惡性腫瘤的80%?？谇荒[瘤切除手術(shù)由于周圍重要器官密集故復(fù)發(fā)率較高,尤其是一些惡性程度較高的OSCC,預(yù)后較差。近年在OSCC的診斷、臨床檢查、活檢和影像學敏感性和特異性上都沒有明顯的進展。盡管手術(shù)治療、化療和放療技術(shù)都有所發(fā)展,但由于對OSCC的病因及發(fā)病機制不甚清楚,在過去的幾十年中,OSCC病人的5年生存率仍無明顯改善。因此深入研究OSCC的分子機制,尋找新的早期OSCC診斷和治療的分子標志物,有望進一步改善口腔腫瘤的診斷、治療和預(yù)防。

近期研究發(fā)現(xiàn),IBP具有GEF分子相似的結(jié)構(gòu)及功能,參與激活與調(diào)節(jié)Rho GTP酶家族分子：Rac1、Cdc42與RhoA[6]。Rho GTP酶家族在腫瘤細胞的物質(zhì)代謝、腫瘤的增殖、遷移和侵襲等過程中發(fā)揮了重要的作用。此外,GEF分子和Rho GTP酶家族在許多腫瘤中的高表達常與其致瘤活性相關(guān)。2005年Subramanian等[7]利用基因芯片技術(shù)研究了骨外黏液樣軟骨肉瘤與一般肉瘤的差異表達基因,發(fā)現(xiàn)IBP是5個差異最顯著的基因之一。近來有學者發(fā)現(xiàn)IBP高表達于結(jié)腸癌、乳腺癌及口腔鱗癌中,并發(fā)揮重要作用。這些研究提示,IBP在OSCC的發(fā)生發(fā)展過程中具有重要的作用。

最新研究顯示：IBP在體外能促進口腔鱗癌Tca8113細胞系增殖[4]。雖然前期研究提示在體外通過上調(diào)IBP表達能促進OSCC的增殖,但由于體內(nèi)外環(huán)境是有一定的差異的。為探討IBP在體內(nèi)對OSCC增殖的影響,本研究用Tca8113/C1及 Tca8113/IBP細胞進行了裸鼠成瘤試驗。在接種細胞4 w后,活體成像技術(shù)檢測以及處死裸鼠后測量接種腫瘤體積均提示,IBP在體內(nèi)同樣也能促進OSCC的增殖。提示IBP對口腔鱗癌的發(fā)生發(fā)展具有重要作用,但其促增殖作用的具體機制尚需進一步研究。

綜上所述,本研究通過裸鼠成瘤實驗證實：上調(diào)IBP表達在裸鼠體內(nèi)能促進OSCC細胞的增殖。

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Effect of IBP on proliferation of OSCC cells in vivo

Shi Junting1,Zhao Ling1,Cai Shuangbing2,Jian Congxiang3

1.Department of Health Care,General Hospital of Chengdu Military Command,Chengdu,Sichuan,610083,China;2.Clinic of Chongqing Garrison Command,Chongqing,400065,China;3.Department of Stomatology,General Hospital of Chengdu Military Command,Chengdu,Sichuan,610083,China

Objective To observe the effect of IRF-4 binding protein(IBP)on the cell growth of oral squamous cell carcinoma(OSCC)in vivo.Methods Tumor inducement was made in nude mice with Tca8113/IBP and Tca8113/C1 with high expression of IBP built up previously and in vivo imaging technology was applied to detect the GFP signals in the nude mice;the inoculated tumor tissues were taken out and the volume was measured.Results The GFP signal region and the tumor volume in nude mice with Tca8113/IBP were obviously larger than those in nude mice with Tca8113/C1(P<0.05).Conclusions Up-regulated expression of IBP can promote the proliferation of OSCC cells in vivo.

IRF-4 binding protein(IBP);oral;squamous cell carcinoma;proliferation;nude mice

610083 成都,成都軍區(qū)總醫(yī)院保健科(石俊婷,趙 凌)，口腔科(簡從相)；重慶警備區(qū)門診部(蔡雙兵)

R 739.8

A

1004-0188(2014)09-0951-03

10.3969/j.issn.1004-0188.2014.09.009

2014-07-28)