王曙東，王 爭，劉文雅，李 克

（中國人民解放軍南京軍區(qū)南京總醫(yī)院，江蘇 南京 210002）

香卿止痛噴霧劑是醫(yī)院研制的以紅茴香和徐長卿為主要成分的透皮給藥噴霧制劑。紅茴香Illicium henryiDiels．為木蘭科植物，常以根或根皮入藥，槲皮苷是其主要活性組分，具有散瘀止痛、祛風(fēng)除濕等功效，常用于治療風(fēng)寒濕痹、關(guān)節(jié)痛、腰腿痛、跌打傷痛等，對(duì)急慢性腰腿痛[1]、腰肌勞損[2]、軟組織損傷[3]、梨狀肌損傷綜合征[4]等均有較好療效。徐長卿為蘿摩科植物徐長卿Cyuanchum panicalatum（Bge．）Kitag．的干燥根及根莖，具有祛風(fēng)化濕、止痛止癢等功能，常用于治療風(fēng)濕痹痛、胃痛脹滿、牙痛、腰痛、跌打損傷、蕁麻疹、濕疹等。徐長卿所含主要活性成分為丹皮酚，具有鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜作用，可使動(dòng)物自發(fā)性活動(dòng)減少，還具有抗菌消炎作用[5]。本試驗(yàn)中建立了用高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定香卿止痛噴霧劑中槲皮苷和丹皮酚的分析方法?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Waters高效液相色譜儀（1525雙泵，2487紫外檢測(cè)器，717自動(dòng)進(jìn)樣器，Empower 2色譜軟件）；KQ2200DB型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。香卿止痛噴霧劑（南京軍區(qū)南京總醫(yī)院制劑科自制，批號(hào)分別為 111220，111222，111224）；槲皮苷對(duì)照品（批號(hào)為111538－200403），丹皮酚對(duì)照品（批號(hào)為110708－200506），均來自中國藥品生物制品檢定所；甲醇為色譜純級(jí)，水為雙蒸水，其他試劑均為分析純級(jí)。

2 方法與結(jié)果

2．1 色譜條件[6－9]

色譜柱：Hedera－ODS－2 C18柱（250 mm ×4．6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇 －水 －冰醋酸（45∶54∶1）；檢測(cè)波長：274 nm；流速：1．0 mL ／min；柱溫：25 ℃；進(jìn)樣量：20 μL；理論板數(shù)按槲皮苷和丹皮酚峰計(jì)算不低于2 000。

2．2 溶液制備

精密稱取槲皮苷、丹皮酚對(duì)照品適量，置25 mL容量瓶中，加無水乙醇定容至刻度，制成槲皮苷、丹皮酚質(zhì)量濃度分別為354．0，45．12 μg ／mL 的溶液，作為對(duì)照品貯備液。取復(fù)方噴霧劑0．7 mL，置25 mL容量瓶中，加無水乙醇適量，超聲處理30 min，放冷至室溫，加無水乙醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。按處方比例及制備方法，制備缺槲皮苷和丹皮酚的陰性對(duì)照品溶液。

2．3 方法學(xué)考察

干擾試驗(yàn)：取對(duì)照品溶液、供試品溶液及陰性對(duì)照品溶液進(jìn)樣測(cè)定，色譜圖見圖1?？梢娫诖松V條件下，槲皮苷和丹皮酚分離度好，且陰性對(duì)照對(duì)測(cè)定無干擾。

圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察：分別精密吸取槲皮苷、丹皮酚對(duì)照品溶液（354．0，45．12 μg ／mL）1，2，4，6，8，10 mL，置 25 mL 容量瓶中，以無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，精密吸取20 μL，注入液相色譜儀，按2．1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定峰面積，以峰面積積分值（A）與對(duì)照品溶液質(zhì)量濃度（C）進(jìn)行線性回歸，得回歸方程，槲皮苷A＝2．32×107C－14 686，r＝0．999 8；丹皮酚A＝8．96×107C－42 269，r＝0．999 8。結(jié)果表明，槲皮苷與丹皮酚質(zhì)量濃度分別在35．40 ～354．00 μg／mL 和 4．51 ～45．12 μg／mL 范圍內(nèi)與其峰面積呈良好線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn)：取對(duì)照品溶液重復(fù)進(jìn)樣6次，分別測(cè)定兩組分的峰面積。結(jié)果槲皮苷和丹皮酚的RSD分別為0．86%和1．37%。

重復(fù)性試驗(yàn)：精密吸取同一批香卿止痛噴霧劑6份，按供試品溶液制備及測(cè)定方法平行測(cè)定兩組分的含量。結(jié)果槲皮苷和丹皮酚的RSD分別為0．53%和0．58%。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品溶液，分別于 0，2，4，6，8，10 h 時(shí)進(jìn)樣，測(cè)定兩組分含量。結(jié)果槲皮苷和丹皮酚的RSD分別為0．91%和0．44%，表明供試品溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定。

加樣回收試驗(yàn)：按高、中、低3個(gè)質(zhì)量濃度分別精密吸取供試品溶液 3．0，2．5，2．0 mL，共 6 份，置 5 mL 容量瓶中，分別加入對(duì)照品貯備液 1．2，1．5，1．8 mL，再加無水乙醇適量，超聲處理 30 min，放冷至室溫，加無水乙醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果見表1。

2．4 樣品含量測(cè)定

精密稱取3個(gè)批號(hào)的香卿止痛噴霧劑，按供試品溶液制備及測(cè)定方法測(cè)定兩組分的峰面積，計(jì)算樣品中槲皮苷與丹皮酚的含量。結(jié)果見表2。

表1 槲皮苷和丹皮酚加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）

表2 槲皮苷與丹皮酚含量測(cè)定結(jié)果（n＝3）

3 討論

經(jīng)紫外掃描，槲皮苷在波長256 nm處有最大吸收，丹皮酚最大吸收波長為274 nm，由于制劑中丹皮酚含量較槲皮苷小，且丹皮酚在波長為256 nm處的響應(yīng)值較低，不利于含量測(cè)定，故選擇丹皮酚最大吸收波長274 nm為檢測(cè)波長。

參考文獻(xiàn)，曾試用甲醇 －水 －冰醋酸（47∶52∶1，V／V／V）作流動(dòng)相，槲皮苷與丹皮酚兩個(gè)主成分色譜峰不能很好分離，且拖尾現(xiàn)象較嚴(yán)重。經(jīng)試驗(yàn)，結(jié)果選用甲醇－水－冰醋酸（45∶54∶1，V／V／V），色譜峰得到較好分離，峰形也比較理想。

方法學(xué)考察表明，該方法具有良好的線性、精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性，且回收率高，可對(duì)香卿止痛噴霧劑中槲皮苷和丹皮酚的含量進(jìn)行有效、準(zhǔn)確定量，對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行有效的質(zhì)量控制。

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