王光函 ，邸子真 ，趙，鄒桂欣 ，呂曉東

（1．遼寧省中醫(yī)藥研究院 遼寧 沈陽 110034； 2．遼寧中醫(yī)藥大學(xué) 遼寧 大連 116600）

芩雙片是由麻黃、大青葉、甘草等9味中藥組方的復(fù)方制劑，具有清熱解毒、化痰止咳、宣肺平喘之功效，用于肺熱壅肺型咳嗽、喘證及感冒后咳嗽。方中麻黃為君藥，起到宣肺、解毒、清熱的作用。本研究中采用高效液相色譜法對麻黃中的鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿進(jìn)行含量測定，為提高和完善本制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供了試驗依據(jù)。

1 儀器與試藥

Agilent1100型高效液相色譜儀（美國安捷倫公司）；FA1004型電子天平（上海上天精密儀器有限公司）；KQ－250B型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。鹽酸麻黃堿對照品（批號為171241－201007），鹽酸偽麻黃堿對照品（批號為 171237－200807），均由中國藥品生物制品檢定所提供；芩雙片（遼寧省中醫(yī)藥研究院藥學(xué)室自制）；磷酸為色譜純，水為哇哈哈純凈水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2．1 色譜條件

色譜柱：PhenomenexSynergi4μPolar－RP 柱（250mm×4．6mm，5 μm）；流動相：0．09%磷酸溶液（含 0．04% 三乙胺和 0．02% 二正丁胺）；檢測波長：210 nm；流速：1．0 mL ／min；柱溫：室溫。

2．2 溶液制備

取鹽酸麻黃堿對照品、鹽酸偽麻黃堿對照品適量，精密稱定，加流動相制成每1 mL含鹽酸麻黃堿106 μg、鹽酸偽麻黃堿29．12 μg的混合對照品溶液。取本品適量，研細(xì)，取 1g，精密稱定，精密加入1．44%的磷酸溶液25 mL，稱重，超聲處理20 min，放冷，稱重，用1．44%的磷酸溶液補(bǔ)足減失的質(zhì)量，濾過，搖勻，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。另取處方中除麻黃以外的其他藥材，按芩雙片處方和制法制備不含麻黃的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制備陰性對照品溶液。

2．3 方法學(xué)考察

專屬性考察：取對照品溶液5 μL、供試品溶液10 μL及陰性對照品溶液10 μL，按2．1項下色譜條件，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果表明，在此條件下鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿與其他成分有很好的分離度，色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察：分別精密吸取鹽酸麻黃堿（106 μg／mL）和鹽酸偽麻黃堿（29．12 μg ／mL）的混合對照品溶液 2，4，6，8，10，12 μL，注入液相色譜儀中，測定峰面積，以峰面積和進(jìn)樣量進(jìn)行線性回歸，得回歸方程，鹽酸麻黃堿為Y＝1 752．6X＋14．12（r＝0．999 9），線性范圍為 0．212～1．272 μg；鹽酸偽麻黃堿：Y＝1 739X＋1．386 7（r＝0．999 8），線性范圍為 0．058 24 ～0．349 44 μg。

精密度試驗：精密吸取同一混合對照品溶液5 μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，按上述色譜條件測定，記錄峰面積。結(jié)果鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿對照品峰面積的RSD分別為2．37%和1．33%（n＝6），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗：取同一供試品溶液 10 μL，分別在 0，2，4，8，24 h時進(jìn)樣，按上述色譜條件測定，測定各峰面積，計算樣品中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的含量之和。結(jié)果的RSD為1．24%（n＝5），表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

重現(xiàn)性試驗：取同一批號的樣品適量，研細(xì)，取1 g，精密稱定，平行6份，按供試品溶液制備方法制備溶液，上述色譜條件測定，計算樣品中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的含量之和。結(jié)果的RSD為2．23%（n＝6），表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗：取同一批號的樣品（鹽酸麻黃堿含量1．036mg／g，鹽酸偽麻黃堿含量0．452 mg／g）適量，按供試品制備方法制備待測溶液按2．1項下色譜條件測定，計算樣品中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的回收率。結(jié)果見表1和表2。

表1 鹽酸麻黃堿加樣回收率試驗結(jié)果（n＝9）

表2 鹽酸偽麻黃堿加樣回收率試驗結(jié)果（n＝9）

2．4 樣品含量測定

對5批樣品進(jìn)行含量測定，每批樣品平行2份，依法制備供試品溶液并測定，計算樣品中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的含量之和。結(jié)果批號為 120901，120902，120902，120904，120905 的樣品中鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿總含量分別為 0．605，0．583，0．613，0．642，0．617 mg ／片，平均 0．6 12 mg ／片。

3 討論

供試品溶液制備方法考察時，曾比較1．44%的磷酸溶液和水為溶劑，另外也對超聲時間進(jìn)行考察，采用1．44%的磷酸溶液效果較好，超聲20 min與30 min無顯著差別，但超聲時間為60 min時鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的含量顯著降低，因此采用1．44%的磷酸溶液為溶劑，時間為20 min。

曾參照藥典麻黃藥材項下方法[1]，以甲醇－0．09%磷酸溶液（含 0．04%三乙胺和 0．02% 二正丁胺，1．5：98．5）為流動相，但供試品中鹽酸偽麻黃堿位置有干擾，將流動相進(jìn)行調(diào)整后，結(jié)果分離度良好。

[1]國家藥典委員會．中華人民共和國藥典（一部）[M]．北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：300 － 301．